3031例血流感染病原菌分離情況及耐藥性分析

[摘要] 目的 研究我院血流感染病原菌的分離情況以及對抗生素的耐藥情況，以指導臨床合理用藥。 方法 采用BACT/ALERT 3D60全自動血培養儀進行血培養，西門子MicroScan WalkAway 40全自動細菌鑒定儀進行細菌鑒定及藥敏試驗。 結果 2009～2011兩年間共送檢血培養標本3 031例，基本采用單側雙瓶采血，需氧培養1 531例，厭氧培養1 500例，共分離出病原菌268株，陽性率8.84%。其中G+菌152株，占56.7%；G—菌98株，占36.6%；真菌18株，占6.7%。最常見的分離病原菌是凝固酶陰性葡萄球菌、大腸埃希菌。儀器報警陽性在12 h之內82株，12～24 h之間105株，24 h內共有187株，占78.6%，且12 h內同一株兼性厭氧菌培養比需氧培養陽性報告稍快。 結論 血流感染是臨床上最嚴重感染，快速準確地培養出病原菌并進行耐藥性分析是非常重要的，以便指導臨床合理用藥。另外，對于凝固酶陰性葡萄球菌（CNS），臨床醫生應結合病史、癥狀及其他檢查來判斷是污染還是真正的病原菌。

[關鍵詞] 血流感染；病原菌；耐藥性

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673—9701（2012）26—0090—02

Analysis of pathogen separation condition and their resistance to antimicrobials in 3031 blood culture samples

XIA Qingqing1 LOU Jiangtao1 WANG Weihua2 CHEN Jianwei1

1.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Ningbo TCM Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Ningbo 315012，China；2.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Hospital of School of Medicine of Ningbo University，Ningbo 315020，China

[Abstract] Objective To investigate the distribution of pathogenic bacteria in blood culture and to observe the drug resistance in our hospital to provide the basis for clinical antimicrobial therapy. Methods BACT/ALERT 3D60 automated blood culture system was applied for the blood culture. The microorganism identification and antimicrobial resistance tests were performed with the Siemens MicroScan Walkaway 40 automated bacterial identification system. Results Among 3031 blood culture samples， 268 cases were alarm positive with the positive rate of 8.84%. moreover， 152 strains were Gram—positive bacteria（56.7%）， 98 strains were Gram—negative bacteria（36.6） and 18 strains were fungi （6.7%）. The most common isolated pathogen bacteria were coagulase—negative staphylococci and Escherichia coli. In all sample， 82 were alarm positive in 12 h with facultative anaerobic culture positive report is slightly faster than the aerobic cultivation， 105 cases were alarm positive between 12—24 h. Conclusion bloodstream infection is the most serious clinical infections， quickly and accurately cultivate pathogens and drug resistance analysis is very important for clinical therapy. As for coagulase—negative staphylococci（cns）， clinicians should be combined with history， symptoms and other tests to determine whether contamination or the real pathogen.

[Key words] Blood stream infection；Pathogen；Drug resistance

血流感染是臨床上嚴重危及患者生命的感染性疾病，病情進展迅速，死亡率高[1]。如今各種各樣治療手段的開展應用以及抗生素的濫用，血流感染在各大醫院的發生率有了很大的上升趨勢，而快速準確地從血液中培養出病原菌是臨床診斷菌血癥、敗血癥以及合理應用抗菌藥物的重要手段。本文對我院2009～2011年兩年間共3 031份血培養標本中分離出的268株病原菌進行鑒定及耐藥性分析回顧，以指導臨床合理用藥。

1材料與方法

1.1 菌株來源

我院2009年8月～2011年7月住院門診患者采集的血培養標本3 031例，其中需氧培養1 531例，厭氧培養1 500例。

1.2 儀器與試劑

血培養瓶、BACT/ALERT 3D60全自動血培養儀及真菌鑒定藥敏API條由法國生物梅里埃公司提供。西門子MicroScan WalkAway40全自動細菌鑒定儀進行一般細菌鑒定及藥敏分析，藥敏紙片為英國Oxoid公司產品。念珠菌顯色培養基為鄭州博賽生物有限公司產品。質控菌株為大腸埃希菌ATCC25922，金黃色葡萄球菌ATCC25923，銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 患者在高熱、寒戰時或抗菌藥物使用前采集血液8～10 mL，注入血培養專用瓶，混勻后立即送檢。基本采用單側雙瓶采集。

1.3.2 細菌分離及鑒定藥敏 自動血培養儀報警提示陽性時移種至血平板、巧克力平板、麥康凱平板，必要時移種至真菌顯色培養基中進行細菌分離，并同時進行革蘭染色鏡檢，將鏡檢結果初報給臨床醫生。若培養5 d未報警則報告“經5天培養無細菌及真菌生長”。分離到單個菌落采用西門子MicroScan WalkAway40全自動細菌鑒定藥敏儀進行細菌鑒定及藥敏。K—B法藥敏試驗按照NCCLS進行操作和結果判斷。真菌鑒定用20C AUX API條，藥敏試驗用ATB—fungus3藥敏API條。

1.3.3 耐甲氧西林葡萄球菌檢測 應用30 μg頭孢西丁藥敏紙片替代1 μg苯唑西林，按NCCLS標準判定。

1.4 統計學方法

以WHO NET 5.4進行數據分析，同一患者的相同菌株以首次分離菌進行統計。

2 結果

2.1 病原菌分布及構成比

從3 031份血培養標本中分離出病原菌268株，陽性率8.84%，其中G+菌152株，占56.7%，其中凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）88株，占32.8%（主要為表皮葡萄球菌32株，占CNS36.4%；人葡萄球菌人亞種30株，占CNS 34.1%）；金黃色葡萄球菌15株，腸球菌16株，鏈球菌4株，構成比分別為5.6%、6.0%、1.5%。G—菌98株，占36.6%，其中大腸埃希菌40株，鮑曼不動桿菌14株，肺炎克雷伯菌10株，構成比分別為15.0%、5.2%、3.7%。真菌18株，占6.7%，其中熱帶念珠菌7株，乳酒假絲酵母4株，光滑球擬酵母3株，構成比分別為2.6%、1.5%、1.1%。

2.2 病原菌的耐藥情況

革蘭陽性球菌及革蘭陰性桿菌對常用抗菌藥物的耐藥率見表1、2。

3討論

我院2009年8月～2011年7月住院和門診患者共送檢3 031份血培養標本，分離出268株病原菌，陽性率為8.84%，與郭燕[2]報道10.43%的陽性率基本一致，而比張淑青等[3]報道的16.3%低，可能與地域不同或臨床用藥差異有關，前兩者為浙江地區，而后者則為華北地區。本資料中革蘭陽性球菌分離率要高于革蘭陰性桿菌分離率，而且革蘭陽性球菌中又以凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）高居首位，占32.8%，而且絕大部分是耐甲氧西林的CNS。凝固酶陰性葡萄球菌分離率占首位可能因為臨床上各種免疫抑制劑和廣譜抗菌藥物的廣泛應用，使各種條件致病菌成為血行感染的重要致病菌[4]。CNS中居前兩位的是表皮葡萄球菌，占CNS 36.4%，人葡人亞種占CNS 34.1%。表葡已成為臨床重要機會致病菌和院內感染的重要致病菌，這已是不爭的事實；而人葡萄球菌近年來也已成為臨床常見致病菌，特別是長期臥床免疫力低下的患者更容易發生感染。故對從血培養中分離出的凝固酶陰性葡萄球菌，應鑒別到種的水平，并同時進行抗菌藥物敏感性試驗，為臨床感染治療提供實驗室依據[5]。本資料顯示，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）檢出率60%，與陳堅等[6]報道的MRSA檢出率64%基本一致；耐甲氧西林的凝固酶陰性葡萄球菌（MRSN）檢出率80%以上。對現在的臨床用藥帶來很大困難。且許多研究證明，CNS有比較高的污染率，因此，臨床醫生應結合多方面因素如體溫、白細胞計數、病史以及抽血時的皮膚消毒效果等等來考慮此細菌是否為真正的病原菌。檢出的葡萄球菌對奎奴普丁/達福普丁、萬古霉素、利奈唑胺的敏感性為100%，但也應注意合理使用與監測.腸球菌的耐藥情況還不算太嚴重。

本次資料中，革蘭陰性桿菌檢出主要以大腸埃希菌為主，占G—桿菌的五成左右，其次是鮑曼不動桿菌和肺炎克雷伯菌，與國內許多報道基本一致。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對β—內酰胺類藥物耐藥率較高，可能與其產ESBLs有密切關系；其次對喹諾酮類抗生素也有60%以上的耐藥率，與醫院長期濫用這類藥物有一定關系；對碳青霉烯類藥物及阿米卡星敏感性最高，可作為首選藥物。真菌檢出率不高，占6.7%，盡管檢出率不高，但主要分布在ICU和呼吸內科等重點科室，應引起臨床醫生足夠重視。

血培養儀陽性報警時間的早晚對臨床治療有非常重要的影響。本資料顯示儀器陽性報警在12h之內的有82株細菌，12～24 h有105株細菌，24 h之內報警陽性187株，占78.6%，且12h內同一株兼性厭氧菌厭氧培養比需氧培養陽性報警稍早，說明血培養一次抽兩瓶是非常有必要的，至少可以快速預報陽性及提高陽性檢出率。 血培養細菌陽性報警時間與總體細菌濃度有關，而后者又與接種菌量相關。而在實際操作中，所有研究對象的血培養接種量不可能完全一致，故對實驗結果有一定影響[7]。因此，若有條件，臨床抽取血培養最好是雙側多套，且增加抽血次數，這樣對提高陽性率，減少污染率有很大幫助。總之，我們要積極配合臨床治療，減少敗血癥的發生。

[參考文獻]

[1] 羅小銘，歐萍，陳菊香. 961份血培養的細菌及其藥敏分析[J]. 中國微生物學雜志，1997，9（2）：35—36.

[2] 郭燕. 兒童血培養標本病原菌構成及藥敏分析[J]. 中國現代醫生，2011， 49（28）：87—88.

[3] 張淑青，王賀永，李宏芬. 血培養標本中病原菌的分布及藥敏分析[J]. 中華醫院感染學雜志，2011，21（7）：1472—1474.

[4] 王進，柴軍，肖永紅. 2008年Mohnarin血流感染病原菌構成及耐藥性[J].中華醫院感染學雜志，2010，20（16）：2399—2404.

[5] 陳東升，孫長貴. 實用臨床微生物學檢驗與圖譜[M]. 北京：人民衛生出版社，2011：185.

[6] 陳堅，王彩虹，王金果，等. 不同來源的金黃色葡萄球菌耐藥率比較分析[J]. 中華醫院感染學雜志，2009，19（5）：571—573.

[7] 王沛，何永貴，陳學兵，等. 陽性報警時間法快速鑒定血培養中的葡萄球菌[J]. 檢驗醫學，2009，24（11）：851.

（收稿日期：2012—04—20）