超聲提取—氣相色譜法測定曲克蘆丁中甲醇

摘 要：提出了采用乙腈作為溶劑漩渦混合超聲提取-氣相色譜外標法定量測定曲克蘆丁中甲醇的方法。結果顯示，提取方式選擇漩渦混合提取5分鐘加超聲提取20分鐘，提取率最高，甲醇濃度在0.05～2mg/ml呈線性關系，甲醇的定量限為0.0042mg/ml。在2個標準加入水平下進行回收率和精密度實驗，加標回收率均處于98.1%～101.2%之間，相對標準偏差（n=6）小于1.95%。

關鍵詞：曲克蘆丁 甲醇 超聲提取 氣相色譜法

中圖分類號：O6文獻標識碼：A文章編號：1674-098X（2012）09（a）-0013-03

曲克蘆丁（troxerutin）為一種抗凝血藥和溶栓藥，具有抑制紅細胞和血小板凝聚作用，防止血栓形成，同時能增加血中氧的含量，改善微循環，促進新血管生成以增進側支循環[1]。曲克蘆丁是蘆丁和環氧乙烷經過醚化反應后得到的羥乙基蘆丁的有效成分[2，3]。要達到注射要求的曲克蘆丁必需經過精制，目前，通過甲醇對曲克蘆丁進行精制提純是曲克蘆丁純化的通用手段。然而，甲醇對中樞神經系統有麻醉作用；對視神經和視網膜有特殊選擇作用，引起病變；可致代射性酸中毒，食用5～10mL能雙目失明，大量食用會導致死亡。

甲醇殘留于曲克蘆丁中不可避免，曲克蘆丁中甲醇含量檢測是優化其生產工藝必備的前提條件之一。目前，國內只有藥典中有提到曲克蘆丁中甲醇的檢測方法，但是其方法中存在很多弊端，本方法采用乙腈作為溶劑，漩渦混合超聲提取，氣相色譜外標法定量測定曲克蘆丁中甲醇，該法線性范圍寬、重復性好、準確度高等優點。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

安捷倫7890A氣相色譜儀（帶FID檢測器）；超聲波萃取儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）；漩渦混合器（浙江金壇市金城教學儀器廠）等。

乙腈為優級純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲醇為優級純（天津市科密歐化學試劑有限公司）；曲克蘆丁（市售）。

1.2 色譜條件

載氣為99.99%高純氮氣；色譜柱：DB-WAX （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分離進樣口溫度為150℃，分流比20：1；檢測器溫度為200℃；柱流量為4ml/min，柱箱溫度條件：初始溫度60℃保持3min，以20℃/min升溫至120℃，保持5min。

1.3 標準溶液的制備

精密稱取甲醇0.5000g至100ml容量瓶中，用乙腈定容，混勻，得5mg/ml甲醇標準儲備液。將儲備液用乙腈稀釋成0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mg/ml的系列標準溶液。

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取曲克蘆丁樣品0.5000g，用乙腈作為溶劑，轉移至50ml容量瓶中，用乙腈定容，漩渦混合器混合2min，超聲波超聲20min，0.45μm微孔濾膜過濾于進樣瓶中，待測。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化與選擇

2.1.1 進樣口條件選擇

選擇進樣口溫度為120、150、180、200℃時，用10mg/ml標準溶液分別進樣5次，結果顯示，當進樣口溫度在120℃和150℃時，峰形及峰面積穩定性較好，當進樣口溫度在180℃和200℃時，峰形及峰面積穩定性波動較大。實驗結果表明，溫度越低，實驗穩定性越好，主要原因可能是甲醇分子量小，沸點低，本身穩定性較低，當氣化溫度低時，其膨脹系數相對小些，穩定性就會更好。但是，如果溫度太低，供試溶液中其它雜質就無法排除，因此進樣口溫度選150℃更好。

2.1.2 柱箱溫度條件選擇

當柱箱溫度從60℃至120℃之間變化時，甲醇出峰時間一般在1分鐘到2分鐘之間，溫度為60℃時峰形更好，考慮到供試溶液中雜質較多，采用程序升溫，最終溫度升溫至120℃，保持5min后再無雜質峰出現。實驗結果表明，柱箱溫度條件應該為：初始溫度60℃保持3min，以20℃/min升溫至120℃，保持5min。

2.2 實驗條件的選擇

2.2.1 溶劑的選擇

稱取樣品0.5000g，分別采用水、乙醇、乙腈作為溶劑進行比較實驗。其中水作為溶劑時，樣品能全部溶解，甲醇的峰拖尾嚴重，拖尾因子達到1.8，當多次進樣后，基線不穩，雜峰增多，主要原因是大分子的曲克蘆丁無法去除，嚴重污染了進樣口。當采用乙醇作為溶劑時，甲醇峰拖尾，拖尾因子達到1.5，而且甲醇與乙醇出峰時間過于靠近，不便于分析。當采用乙腈作為溶劑時，峰形較好，拖尾因子1.2，雜質較少，復合要求分析要求。因此，溶劑選擇乙腈。譜圖見圖1。

2.2.2 甲醇的提取方法選擇

稱取樣品0.5000g，采用乙腈作溶劑溶解，分別采用漩渦混合提取5min，漩渦混合提取10min，漩渦混合提取5min加超聲提取10min，漩渦混合提取5min加超聲提取15min，漩渦混合提取5min加超聲提取20min。檢測回收率結果見表1，實驗結果標明，單一采用漩渦混合方式，回收率一般只能達到74%，漩渦混合加超聲提取效果明顯提高，回收率能達到90%以上，當超聲時間達到20min時，已經基本能夠滿足檢測要求，回收率能達到98.6%。因此，提取方式選擇漩渦混合提取5min加超聲提取20min。

2.3 方法的專屬性

在上述色譜條件和實驗條件下，分別取空白溶液、標準品溶液與供試品溶液進行測定，得到特征峰，結果表明，測定無干擾，譜圖見圖2。

2.4 標準曲線和定量限

將1.3節中所制備的甲醇標準溶液進行分析，以質量濃度（mg/ml）為橫坐標X，甲醇鋒面積為縱坐標進行線性回歸，得甲醇標準曲線Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），結果表明，甲醇濃度在0.05～2mg/ml內線性關系良好。甲醇的定量限為0.0042mg/ml。

2.5 精密度試驗

取一定量的甲醇儲備液，用乙腈稀釋，得到濃度分別為1.2mg/ml的甲醇標準溶液各5份進行分析，計算得到相對標準偏差（RSD），結果見表2。結果表明，兩個濃度的標準溶液的RSD均小于1.95%，符合檢測方法要求。

2.6 回收試驗

稱取0.5000g已知甲醇含量的曲克蘆丁樣品6份，分別加入質量濃度分別為1、2mg/ml的甲醇標準溶液1ml，每個濃度3份，在2.1和2.2的條件下進行分析，計算回收率，結果見表3。甲醇的回收率均處于98.1%～101.2%之間。

2.7 樣品分析

稱取不同樣品8批次，按1.4的方法處理，在2.1的色譜條件下測定，得到各樣品的甲醇含量。結果見表4。

本方法建立了曲克蘆丁中甲醇的檢測方法，具有操作簡單、靈敏度高、雜質含量低、回收率良好和穩定性好的優點，用于實際樣品的測定，結果滿意。

參考文獻

[1]周昌奎，吳曉華.曲克蘆丁臨床研究新進展[J].中國生化藥物雜志，2005.26（5）：56-58

[2]李玉山.曲克蘆丁的合成工藝研究[J].應用化工，2008.38（8）：1060-1062

[3]王厚全，任慧霞，程秀民，等.曲克蘆丁的精制[J].中國醫藥工業雜志2002.33（8）：368-369