永康地區女性HPV感染的分子流行病學調查

摘要：目的調查永康地區23種人乳頭瘤病毒(HPV)基因型的分子流行病學特點。方法：取1000例女性宮頸分泌物，應用聚合酶鏈反應(PCR)結合反向雜交分析技術檢測HPV6等23種基因型，分析病學特點。結果：HPV患者總感染率為32.6%；HPV高危型占檢出HPV基因型的70.8%；其中，高危型中HPV16型的感染率最高，占檢出HPV基因型的16.6%，低危型中HPV11型感染率最高，占檢出HPV基因型的11.0%；不同年齡段HPV感染率基本相同。結論：本研究提供了23種常見HPV基因型的分子流行病學資料，對HPV疫苗開發、應用及HPV感染的防治具有重要價值。

關鍵詞：人乳頭瘤病毒 基因型 宮頸癌

【中圖分類號】R-1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1008-1879(2012)02-0240-02

HPV感染及宿主癌變的預防成為國內外研究熱點。本研究采用聚合酶鏈反應(PCR)結合反向雜交分析技術檢測23種常見HPV基因型，調查本地區HPV基因型的分子流行病學特點。

1 材料與方法

1.1 標本來源 本院婦產科門診患者和健康體檢者，共1000例，年齡18歲～69歲。

1.2 標本采集 用女性專用宮頸刷擦拭宮頸處，采集足夠的陰道分泌物，取出后放入洗脫管中，沿折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊洗脫管蓋，做好樣品標記，-20℃保存送檢。

1.3 主要儀器和試劑 人乳頭瘤病毒分型基因檢測試劑盒及相關試劑為亞能生物技術(深圳)有限公司產品，LITTLE GENIUS基因擴增儀（LIFE EXPRESS），分子雜交箱（Combi-H12型），超速低溫離心機。

1.4 PCR及反向雜交檢測:①DNA提取:用鑷子在洗脫管內充分刷洗宮頸刷，將洗脫液倒入1.5ml離心管中，13000rpm離心10min，棄上清，加入50μl裂解液充分混勻，移至恒溫金屬浴上，100℃干浴10min，再13000rpm離心10min，保留上清液備用。②PCR擴增:擴增條件為50℃15min、95℃10min，然后94℃30s、42℃90s、72℃30s共40循環，再72℃5min延伸。③雜交:將編好編碼的反應膜條放入15ml的離心管，加入5mlA液和相應PCR擴增產物，混勻后放入沸水浴中加熱10min，再放入雜交箱51℃雜交2小時。④洗膜:取出膜條，移至已裝有預熱B液的50ml離心管中，于雜交箱51℃輕搖洗滌15min。⑤顯色:用A液配制1:2000的POD溶液，室溫輕搖浸泡30min，棄去POD溶液。用A液室溫輕搖洗滌兩次，每次5min。用C液室溫洗滌2min。將膜條浸泡于顯色液(需新鮮配制使用，按順序加入C液19ml，TMB1ml，3%H2O210μl)中避光顯色15min左右，倒去顯色液，用清水沖洗一次膜條。

1.5 結果判斷。每張膜條的PC位點顯色結束后均應有藍色斑點出現，結果視為有效；根據膜條上藍色斑點出現的相應位置即可判斷HPV的亞型為陽性，反之為陰性。

1.6 統計學處理對不同年齡段的HPV感染率采用SPSS17.0統計學軟件處理數據，行X2檢驗。

2 結果

2.1 1000例標本23種HPV基因型檢測結果，見表1。

2.2 不同年齡段HPV感染率構成比，見表2。

3 討論

這里所查的23種基因型，是中國人群感染HPV的主要基因型，約占總HPV感染的95%^［1］。研究發現，HPV患者總感染率達32.6%（326/1000），其中高危型HPV（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、MM4）的感染率占檢出的23種HPV基因型的70.8%（367/518），高危型中HPV16型的感染率占居首位達16.6%（86/518）。說明永康地區感染HPV女性患者以感染高危型HPV為主，故人群篩查高危型HPV是必要的，以便對高危型感染患者進行定期隨訪、及早預防。不同基因型的感染率也不同，HPV52次之，為11.5%（60/518），低危型HPV11位居第三為11.0%（57/518）。HPV16更具有逃避免疫監測的能力，并且感染率高居不下，是引起病變走向惡性病變的最主要型，與我們的研究結果HPV16的感染率達16.6%（86/518）相一致。研究還表明HPV52和HPV58的感染率位居HPV16之后，感染優勢明顯高于HPV18，成為除HPV16外的主導型別，與童郁等^［2］的研究結果一致。

參考文獻

［1］ 董學君，張國榮，等.人乳頭瘤病毒16、18型分子流行病學及新株篩查［J］.中華傳染病雜志，2001

［2］ 童郁，邵展，等.2735例女性下生殖道HPV感染檢測結果分析［J］.溫州醫學院學報，2010