MMP-2、MMP-9及VEGF在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

端傳友

江蘇省南京市六合區(qū)人民醫(yī)院外二科，江蘇南京 211500

結(jié)腸癌（colon cancer）是胃腸道最常見的惡性腫瘤，發(fā)病高峰年齡為41～51歲，5%的患者30歲以下發(fā)病。近年來，結(jié)腸癌發(fā)病率有逐漸上升趨勢，以大城市發(fā)病率增高為主，在北京、上海等大城市中，結(jié)腸癌發(fā)病率已上升到惡性腫瘤的前3位，其死亡率也逐漸升高，成為一個(gè)重大社會問題[1]。目前手術(shù)治療是結(jié)腸癌的有效治療方法，但術(shù)后結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移可導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)甚至死亡。研究表明，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）降解和新生血管形成是腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)[2-3]。基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）能夠通過降解細(xì)胞外基質(zhì)和血管基底膜促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤和血管形成[4]，而血管內(nèi)皮生長（vascular endothelial growth factor，VEGF）則通過與VEGF受體結(jié)合促進(jìn)新生血管形成，參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[5]。本研究旨在通過檢測MMP-2、MMP-9及VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，并分析其與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，評價(jià)三者在結(jié)腸癌進(jìn)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年3月～2011年12月南京市六合區(qū)人民醫(yī)院收治的經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)的86例結(jié)腸癌患者，術(shù)前均未接受放化療、免疫治療等抗腫瘤治療，排除家族性結(jié)腸癌病史及其他腫瘤史。86例患者中，男58例，女28例；年齡34～76歲，平均（52.3±4.6）歲；腫瘤部位：左半結(jié)腸36例，右半結(jié)腸50例；Dukes分期[6]：A期32例，B期11例，C+D期43例；淋巴轉(zhuǎn)移57例，無轉(zhuǎn)移29例。同時(shí)取患者距癌灶≥5 cm且經(jīng)病理證實(shí)為正常結(jié)腸組織作為對照。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定后石蠟包埋，行4μm厚連續(xù)切片，然后行HE染色，采用免疫組化SP法檢測MMP-2、MMP-9及VEGF，鼠 抗 人MMP-2、MMP-9抗 體、兔 抗 人VEGF抗體均由武漢博士德生物工程有限公司提供，免疫組化SP試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供，嚴(yán)格按照說明書操作，以PBS代替一抗作為陰性對照。陽性對照由試劑公司提供。在40倍光鏡下觀察免疫組化染色切片，隨機(jī)選擇6個(gè)高倍視野，采用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量MMP-2、MMP-9及VEGF蛋白表達(dá)強(qiáng)度。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判斷

鏡下觀察腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，采用半定量積分法[6]進(jìn)行評分：①陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞記0分，＜25%記1分，25%～75%記2分，＞75%記3分。②顯色深淺：陽性細(xì)胞按無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記0、1、2、3分。以兩項(xiàng)評分之和進(jìn)行判斷，≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用配對t檢驗(yàn)進(jìn)行比較；計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson直線相關(guān)分析MMP-2、MMP-9與VEGF表達(dá)之間的相關(guān)性，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織MMP-2、MMP-9、VEGF陽性表達(dá)比較

結(jié)腸癌組織MMP-2、MMP-9、VEGF陽性率均顯著高于正常結(jié)腸組織，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織MMP-2、MMP-9、VEGF陽性表達(dá)比較[n（%）]

2.2 結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表達(dá)

86例結(jié)腸癌組織平均MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白吸光度值均顯著高于正常結(jié)腸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表達(dá)（±s）

表2 結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表達(dá)（±s）

分組 MMP-2 MMP-9 VEGF結(jié)腸癌組對照組t值P值0.596±0.093 0.015±0.009 2.29＜0.05 0.612±0.087 0.017±0.005 3.01＜0.05 0.639±0.100 0.020±0.003 2.56＜0.05

2.3 結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9、VEGF陽性表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

86例結(jié)腸癌組織中，52例（60.5%）發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，34例（39.5%）未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9、VEGF陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9、VEGF陽性表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[n（%）]

2.4 結(jié)腸癌組織MMP-2、MMP-9與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MMP-2、MMP-9與VEGF表達(dá)之間呈正相關(guān)（r=0.72，P＜0.05）。

3 討論

腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移是決定腫瘤惡性程度的重要因素，而腫瘤ECM及基底膜（basement membrane，BM）的降解和破壞在腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。MMPs是一類與鋅結(jié)合的能夠降解ECM活性的酶類，其中MMP-2和MMP-9是參與ECM降解的主要成分[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9表達(dá)水平及陽性率均顯著高于癌灶旁的正常結(jié)腸組織（P＜0.05、0.01），且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9陽性表達(dá)率亦高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），與Qin等[8]的研究結(jié)果基本一致，提示MMP-2和MMP-9在結(jié)腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移中起重要作用，其可能的作用機(jī)制是二者能破壞局部解剖結(jié)構(gòu)，刺激腫瘤的生長；同時(shí)破壞基底膜屏障，加速腫瘤轉(zhuǎn)移，刺激腫瘤新生血管的形成[9]。

VEGF是一種糖蛋白二聚體，VEGF及其受體過表達(dá)與腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[10-11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中VEGF表達(dá)水平及陽性率顯著高于癌灶旁的正常結(jié)腸組織（P＜0.05、0.01），且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中VEGF陽性表達(dá)率亦高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），提示發(fā)生結(jié)腸癌時(shí)，機(jī)體內(nèi)VEGF表達(dá)水平顯著增高，且其表達(dá)增高與腫瘤轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。

鄧一平等[12]通過轉(zhuǎn)染方式將膜型基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)入裸鼠異種移植瘤模型，檢測膜型基質(zhì)金屬蛋白酶對腫瘤生長速度和VEGF表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膜型基質(zhì)金屬蛋白酶能夠加快腫瘤生長速度，VEGF在膜型基質(zhì)金屬蛋白酶組呈強(qiáng)陽性表達(dá)，提示膜型基質(zhì)金屬蛋白酶能夠通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞VEGF表達(dá)水平而有效誘導(dǎo)腫瘤血管新生。本研究考察了MMP-2、MMP-9與VEGF表達(dá)水平之間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP-2、MMP-9表達(dá)與VEGF表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)（r=0.72，P＜0.05），推測MMP-2及MMP-9可能誘導(dǎo)結(jié)腸癌組織中VEGF的表達(dá)，三者相互作用，促進(jìn)血管生長和腫瘤浸潤。

綜上所述，結(jié)腸癌組織中MMP-2、MMP-9及VEGF表達(dá)水平明顯升高，并與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測三者表達(dá)可作為反映結(jié)腸癌進(jìn)展的重要指標(biāo)，為判斷患者的預(yù)后提供依據(jù)。

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