消化道腫瘤體外化療藥物敏感性與臨床特征的相關性

韓云國

山東省濱州市中心醫院藥劑科，山東濱州 251700

消化道腫瘤是臨床常見的惡性腫瘤之一，近年來，隨著我國經濟發展及生活質量的提高，不合理飲食對消化道腫瘤發生有促進作用，因此，消化道腫瘤發病率呈明顯上升趨勢[1]。同時，由于很多人對疾病意識不足，對消化道腫瘤的預防很難達到令人滿意的效果，臨床上接受治療的消化道腫瘤患者其疾病往往已發展到晚期[2]。眾所周知，單純手術治療消化道腫瘤的療效一般都無法達到期望目標，大量研究表明，術后輔助放、化療可以提高術后生存率及生存時間，減少復發。本研究對我院近期收治的30例中晚期消化道腫瘤病例手術切除標本行多種常規化療藥物的敏感性測定，以確定消化道腫瘤體外化療藥物敏感性與臨床特征的相關性，現總結報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年10月～2010年10月間于我院普通外科四病區住院并接受手術治療的消化道腫瘤患者及其手術切除標本，共入選患者30例，其中，男18例，女12例；年齡25～85歲，平均68.5歲，多為老年人。術后病理Ⅰ期8例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。所有患者均符合相關腫瘤診斷標準。

1.2 方法

1.2.1 化療藥物 本研究選用3種臨床常用化療藥物：5-氟脲嘧啶（5-Fu，100 mg/L）、絲裂霉素（MMC，4 mg/L）、順鉑（DDP，4 mg/L）。

1.2.2 腫瘤細胞懸液制備 無菌條件下取新鮮手術切除的癌組織約1 cm3，用生理鹽水沖洗或銳器剔除等物理方法初步去除其表面的血跡、脂肪、腸內容物等，放置入含有慶大霉素的RPMI 1640培養液轉移至實驗室。用含有慶大霉素的RPMI 1640培養液洗滌腫瘤組織3次，以進一步清除標本表面的血跡、脂肪，放置于無菌RPMI 1640培養液中，機械粉碎，加入0.5%Ⅳ型膠原酶3～5 mL，4℃消化12～16 h以去除纖維結締組織，1 500 r/min離心10 min，棄上清，沉淀物中加入含有10%牛胎血清、青霉素及鏈霉素的RPMI 1640培養液，并吹打成細胞懸液，調整細胞濃度至1×106/mL。

1.2.3 藥敏試驗 試驗設為3組，將3種臨床常用化療藥物藥液加入96孔板，將96孔板放置入37℃、5%CO2飽和濕度培養箱內培養48 h后，取出向每孔內各加入5 mg/mL MTT溶液20μL后放回培養箱內繼續培養4 h，然后向每孔內加入二甲亞砜100μL，于搖床上搖晃5 min后，于酶標儀上以570 nm檢測光密度值（OD值）。

1.2.4 藥物抑制率計算 抑制率＝（細胞對照組OD+空白對照組OD-試驗組OD）/（細胞對照組OD+空白對照組OD）×100%，重復多次試驗獲得多組OD值，并求出其平均值以計算抑制率[3]。

1.3 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，采用單因素方差分析比較不同藥物對腫瘤組織抑制率差異，采用χ2檢驗比較各藥物抑制率的差異以及與臨床分期等指標的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同藥物對消化道腫瘤的敏感性情況

經過觀察與分析，MMC最大抑制率為85.5%，最小抑制率為6.3%，平均抑制率為42.2%；5-Fu最大抑制率為81.2%，最小抑制率為4.4%，平均抑制率為35.6%；DDP最大抑制率為58.7%，最小抑制率為0，平均抑制率為31.2%。提示絲裂霉素體外化療敏感性最強。見表1。

表1 不同藥物對消化道腫瘤的敏感性情況（%）

2.2 腫瘤分期與化療抑制率的關系

本文結果顯示，各藥物在不同腫瘤分期下不敏感例數較多，高度敏感例數較少，各藥物敏感性與腫瘤分期無相關性（P＞0.05）。見表2。

表2 不同化療藥物敏感性與腫瘤分期的關系（例）

3 討論

惡性腫瘤是嚴重威脅人類生命的疾病之一，其轉移及復發是治療失敗的主要原因，手術切除聯合術后輔助化療已經成為大多數惡性腫瘤的治療原則[4]。近年研究表明，術前輔助放、化療可以在術前對腫瘤進行降級及降期，創造手術切除的機會[5]。近年消化道腫瘤的輔助化療藥物及相應給藥方案得到了長足的發展，從最初的5-Fu、DDP到后來的氟脲嘧啶甲氨酸鹽、卡鉑、草酸鉑等無論從療效還是副作用方面都取得了很大的改進，但是由于惡性腫瘤存在異質性，即不同部位腫瘤的不同病理類型及相同類型腫瘤的不同分期與分級，其對化療藥物的敏感性可能存在不同。

體外化療藥物敏感性試驗是為了選擇敏感性高的藥物而誕生并發展的試驗方法，本文所采用的四唑鹽染色法，基本原理為活細胞特別是增生期細胞的線粒體中琥珀酸脫氫酶通過能量代謝，能將MTT還原成藍紫色的不溶于水的甲脂，而死細胞或紅細胞無此能力，其形成量與細胞活力及活細胞的量成正比。因此，可通過酶標儀測定吸光度判斷甲脂的量，再利用比色法間接反映腫瘤細胞活力及數量的變化，從而研究化療藥物對腫瘤細胞的抑制及殺傷作用[6]。

本試驗采用作用機制不同的3種化療藥，其中，5-Fu與內源性甲酰四氫葉酸及脫氧胸苷酸合成酶形成不易解離的三聯復合物，阻止脫氧尿苷酸甲基化為脫氧胸苷酸，從而影響腫瘤DNA合成，臨床上曾應用其治療胃腸道來源的惡性腫瘤。絲裂霉素C具有烷化作用，能與腫瘤細胞DNA雙鏈交叉，連結或使DNA降解，抑制其復制，發揮抗腫瘤作用，臨床上應用于膀胱癌[7]。DDP通過鉑離子與DNA鏈上的堿基形成交叉聯結，從而破壞DNA的結構和功能，導致細胞的死亡，臨床曾將其應用于胃腸道來源的惡性腫瘤，現已為草酸鉑替代[8]。本試驗發現，不同藥物對消化道腫瘤的抑制率有明顯差異，敏感率排序為MMC>5-Fu>DDP，這與臨床常規用藥有一定的差異，類似研究也有相同發現。本研究結果顯示，MMC最大抑制率為85.5%，最小抑制率為6.3%，平均抑制率為42.2%；5-Fu最大抑制率為81.2%，最小抑制率為4.4%，平均抑制率為35.6%；DDP最大抑制率為58.7%，最小抑制率為0，平均抑制率為31.2%。本研究結果還顯示，各藥物在相應濃度下敏感性與腫瘤分期無相關性（P＞0.05）。有報道稱，依據MTT法試驗結果化療的患者較經驗性用藥的患者，在有效率、3年生存率、復發或轉移率等方面存在優勢。

總之，體外腫瘤藥敏試驗可以判定各化療藥對腫瘤組織的敏感性，為臨床標準化化療用藥及個體化化療提供依據，其作用機制獨特，對消化道腫瘤的輔助化療有一定幫助。

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[8]Folkesson J，Birgisson H，Pahalman I，et al.Swedish Rectal Cancer Trial：long lasting benefits from radiotherapy on survival and local recurrence rate[J].J Clin Oncol，2005，23（24）：5644-5650.