黎藥角花胡頹子提取物不同極性部位抗菌活性研究

魏 王 2 官 ▲ 李永輝

1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南海口 571199；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006

角花胡頹子（Elaeagnus gonyanthes Benth.）為胡頹子科胡頹子屬植物，又名羊母奶子、吊中子藤，以根、葉、果入藥，主要分布于廣東、廣西、湖南、云南等地。據(jù)《全國中草藥匯編》中記載，胡頹子葉平喘止咳，其根能祛風(fēng)通絡(luò)，行氣止痛，消腫解毒，其果能收斂止瀉[1]，是海南黎族地區(qū)常用藥之一，也是著名黎藥品牌——荔花鼻竇炎片的主藥。目前國內(nèi)外學(xué)者已對胡頹子屬植物如大葉胡頹子[2-3]、胡頹子的抗菌作用研究，而未見對角花胡頹子抗菌作用的研究報道，本實驗通過角花胡頹子水提取液及各極性萃取部位對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白假絲酵母菌三種常見菌的體外抑菌實驗，對不同極性部位進行抑菌活性篩選，觀察其抑菌效果，明確各萃取部位抑菌率，確定角花胡頹子抑菌有效部位，為角花胡頹子提取物在抗微生物感染方面的開發(fā)和利用提供參考依據(jù)，為明確荔花鼻竇炎片治療鼻炎作用物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

潔凈工作臺；電熱恒溫培養(yǎng)箱；手提式壓力蒸汽滅菌器。

1.2 試藥

角花胡頹子（采自海南省萬寧市）；吐溫80（分析純汕頭市光華化學(xué)廠）；正丁醇、乙酸乙酯和石油醚（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；沙氏瓊脂培養(yǎng)基（上海研生生物技術(shù)科技有限公司）。

1.3 菌種

細菌：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538），大腸桿菌（ATCC 25922）；真菌：白假絲酵母菌（ATCC 10231），由海南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)部微生物教研室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試藥液的提取萃取

稱取角花胡頹子粉末50 g，加入500 mL蒸餾水，水煎煮2次，每次2 h，過濾，得濾液即角花胡頹子水提取物，水提取濃縮至一定量（置分液漏斗中）。分別以石油醚（1∶1）、乙酸乙酯（1∶1）、正丁醇（1∶1）反復(fù)萃取，合并各萃取物，減壓回收，干燥，稱重，得各萃取物，石油醚萃取物0.75 g，乙酸乙酯萃取物1.05 g，正丁醇萃取物0.83 g。實驗時加2%吐溫80配制成所需濃度。將以上四個供試品滅菌備用。

2.2 菌液制備

取菌株第3～14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（18～24 h），用5 mL 0.03 mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用上述PBS稀釋至所需濃度。

2.3 抑菌試驗依據(jù)

按照《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15979-2002[4]附錄C4溶出性抗（抑）菌產(chǎn)品抑菌性能試驗方法項進行。

2.4 角花胡頹子不同提取部位的抑菌試驗

將試驗菌24 h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液，并分別取出100μL加入含5 mL供試品樣液（角花胡頹子水提取液、石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液，共4個樣品）和對照品溶液（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白假絲酵母菌）的試管內(nèi)，充分混勻，在（20±2）℃條件下，作用20 min，取0.5 mL樣液和對照品溶液加入含5 mL PBS的試管內(nèi)，混勻并適當(dāng)稀釋，分別取0.5 mL置于2個平皿，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（真菌）（35±2）℃培養(yǎng)48 h（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌）或72 h（白假絲酵母菌），作活菌菌落計數(shù)。試驗重復(fù)3次，計算抑菌率。抑菌率計算公式∶X4＝（A-B）/A×100%（C1）。其中式中∶X4代表抑菌率（%）；A代表對照樣品平均菌落數(shù)；B代表被試樣品平均菌落數(shù)。

2.5 評價標(biāo)準(zhǔn)

抑菌率在50%～90%，樣品有抑菌作用；抑菌率≥91%，樣品有較強抑菌作用。

2.6 結(jié)果

角花胡頹子提取物及不同萃取部位的抑菌試驗結(jié)果見表1。角花胡頹子提取物及不同萃取部位的抑菌率結(jié)果見表2。角花胡頹子水提液及各萃取部位除乙酸乙酯萃取物對白假絲小酵母菌無抑菌作用外，其他各部分均有一定抑菌作用，并且角花胡頹子正丁醇萃取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率可達100%，表現(xiàn)出極強的抑菌作用；角花胡頹子石油醚萃取液對金黃色葡萄球菌抑菌率為98.61%，具有較強的抑菌作用；其他部位對3種常見菌均有一定抑菌作用。各菌種的抑菌作用規(guī)律：①金黃色葡萄球菌：角花胡頹子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥乙酸乙酯萃取液﹥水提取液；②大腸桿菌：角花胡頹子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥水提取液﹥乙酸乙酯萃取液；③白假絲酵母菌：角花胡頹子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥水提取液。

3 討論

本研究結(jié)果表明，角花胡頹子極性較大的正丁醇萃取部位中存在有效的抗菌成分，該萃取部位對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌具有極強的抑制作用，抑菌效果達到100%。該部位為角花胡頹子具有抗菌活性的有效部位，應(yīng)進一步對活性部位進行化學(xué)成分分析與分離，再進行抗菌活性的研究，最終確定出具有抗菌活性的單體成分，為該植物資源的開發(fā)提供基礎(chǔ)資料。

表1 角花胡頹子提取物及不同萃取部位的抑菌試驗結(jié)果（cfu/mL）

鼻炎、鼻竇炎是因機體感染病菌及機體抵抗力降低所致，臨床上一般采用抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛等藥物治療，抗感染是治療該類疾病的重要措施之一[5-6]。荔花鼻竇炎片是臨床上治療急、慢性鼻竇炎的藥物，角花胡頹子為該藥物的主藥，本研究結(jié)果顯示角花胡頹子正丁醇部位具有極強的抑菌作用，尤其是對金黃色葡萄球菌的抑制作用，金黃色葡萄球菌是急性鼻竇炎的主要病原體之一，為闡明角花胡頹子治療急、慢性鼻竇炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。

[1]劉明生.黎藥學(xué)概論[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：88.

[2]由寶昌，劉建萍，張曉暉，等.大葉胡頹子莖的化學(xué)成分預(yù)實驗及抗菌作用研究[J].北方園藝，2010，（10）：220-222.

[3]劉建萍，由寶昌，張曉暉，等.大葉胡頹子根的化學(xué)成分預(yù)實驗及抗菌作用研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（3）：353-355.

[4]中國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：GB15979-2002-6-11.

[5]肖家軍，童貫和，謝振榮，等.蒼耳不同部位提取物抑菌活性比較[J].食品工業(yè)科技，2011，32（9）：138-140.

[6]李雁群，黎樺，陳超君，等.石韋醇提取物抑菌活性的初步研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（1）：142-144.