Rb與C-erbB-2基因在胃癌前病變組織中的表達(dá)及其臨床病理意義

蘇秀麗，金建軍

近年研究表明，胃癌的發(fā)生是一個多階段漸進(jìn)發(fā)展的癌變過程，是多因素相繼或協(xié)同作用引起抑癌基因失活及癌基因的活化共同參與的結(jié)果，癌變之前經(jīng)歷持續(xù)多年的癌前病變。胃黏膜異型增生及腸型化生是目前明確的胃癌前病變，大量研究在胃癌前病變組織中檢測到多種基因的異常表達(dá)。本研究檢測抑癌基因Rb及癌基因C-erbB-2在胃癌前病變組織中的表達(dá)，探討二者的表達(dá)在胃癌變過程中的意義。

1 材料和方法

1.1材料①標(biāo)本：87例慢性胃炎胃黏膜活檢組織，取自河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃鏡室，病理診斷為胃黏膜慢性炎癥伴輕度異型增生29例、中度異型增生36例、重度異型增生22例，其中異型增生伴腸化35例,異型增生分級參照全國內(nèi)鏡協(xié)作組的異型增生組織分級標(biāo)準(zhǔn)[1]。②試劑：鼠抗人Rb基因蛋白免疫組化單克隆抗體、鼠抗人C-erbB-2免疫組化單克隆抗體、即用型快捷免疫組化MaxVisionTM試劑盒、DAB顯色試劑盒、PBS緩沖液、檸檬酸抗原修復(fù)液、EDTA 抗原修復(fù)液購自福州邁新生物技術(shù)產(chǎn)品開發(fā)公司。

1.2方法所取標(biāo)本常規(guī)10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，取切片經(jīng)伊紅染色做病理診斷，依照免疫組化說明書，采用免疫組化一步法檢測Rb基因、C-erbB-2基因的表達(dá)。判定標(biāo)準(zhǔn)，C-erbB-2 蛋白免疫組化染色參照美國 Hercept Test 評價標(biāo)準(zhǔn)[2]：每張切片選取連續(xù)的10 個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，算出各個視野中陽性細(xì)胞數(shù)，無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞<10%及僅胞質(zhì)著色者為陰性(-)，陽性細(xì)胞>10%定為陽性(+)。顯色弱且不連續(xù)為(+)；陽性細(xì)胞>10%，呈連續(xù)胞膜顯色，強(qiáng)度中等為(++)；陽性細(xì)胞>10%，胞膜顯色呈連續(xù)強(qiáng)陽性者為(+++)。 Rb蛋白免疫組化染色參照Mark Kelley實驗室標(biāo)準(zhǔn)[3]進(jìn)行，每張切片隨機(jī)選取10個高倍視野，計數(shù)100個細(xì)胞中的陽性數(shù),根據(jù)陽性細(xì)胞百分率及顯色深淺,采用半定量積分法分級。評分標(biāo)準(zhǔn)如下：①顯色深淺:按著色程度分為:基本未著色0分，著淺色(黃色)為1分，中度著色(棕黃)為2分，強(qiáng)陽性著色(棕褐)為3分。②按陽性細(xì)胞百分率分為:染色細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～75%為2分，>75%為3分。以上兩項相加最終評定結(jié)果，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++)，5～6分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對實驗所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，分類資料用χ2檢驗，相關(guān)分析用Spearman相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1基因Rb、C-erbB-2在胃癌前病變組織中的表達(dá)Rb陽性著色為棕褐色，定位于細(xì)胞核，為胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒，少數(shù)同時有細(xì)胞漿著色。試驗結(jié)果表明，從輕度異型增生、中度異型增生到重度異型增生，基因Rb陽性表達(dá)率分別為86.21%、75%、54.55%，趨勢卡方分析P<0.05，呈下降趨勢，輕度異型增生與重度異型增生相比表達(dá)明顯降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示 Rb陽性表達(dá)隨病變加重而降低。C-erbB-2蛋白陽性著色為棕黃色，定位于包膜，少數(shù)有胞漿著色，僅胞漿著色為非特異性著色；隨病變加重，基因C-erbB-2在輕度異型增生、中度異型增生及重度異型增生中表達(dá)的陽性率為20.69%、33.3%、50%，呈上升趨勢(P<0.05)，和輕度異型增生相比，重度異型增生陽性表達(dá)明顯增加(P<0.05)，提示基因C-erbB-2陽性表達(dá)隨病變加重而升高。實驗結(jié)果見表1。

表1 基因Rb、C-erbB-2在胃癌前病變中的陽性表達(dá) 例(%)

2.2基因Rb和C-erbB-2表達(dá)的相關(guān)性統(tǒng)計結(jié)果示Spearman相關(guān)系數(shù)r=-0.129，P>0.05，二者表達(dá)無相關(guān)性，見表2。

表2 基因基因Rb和C-erbB-2在胃癌前病變中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

細(xì)胞周期調(diào)控異常是導(dǎo)致細(xì)胞增殖、凋亡失衡以及腫瘤發(fā)生的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。Rb 基因是細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子，是最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于細(xì)胞周期G1/S調(diào)控點的中心。低磷酸化的Rb蛋白與轉(zhuǎn)錄因子E-2F結(jié)合成復(fù)合物，使E-2F失去轉(zhuǎn)錄激活功能，細(xì)胞周期便停留在G1期，完成遺傳物質(zhì)的節(jié)點檢測，并通過抑制多種原癌基因如c-myc、c-fos等而抑制細(xì)胞增殖，減少腫瘤的發(fā)生。所有人類腫瘤均存在Rb基因表達(dá)異常，一半為基因突變[4]，一半為調(diào)控異常，失去對轉(zhuǎn)錄因子E-2F及原癌基因c-myc、c-fos的抑制，不能完成染色體的節(jié)點檢測，使損傷的遺傳物質(zhì)表達(dá)于新的子代細(xì)胞，并出現(xiàn)細(xì)胞分裂增殖活躍，參與了腫瘤的發(fā)生[5]。本研究結(jié)果表明，Rb在胃癌前病變中的表達(dá)率為73.56%(輕、中、重度異型增生分別為86.21%、75%、54.55%)，隨病變加重，呈降低趨勢，與文獻(xiàn)[6]報道一致。結(jié)果提示，檢測基因Rb的表達(dá)可用于監(jiān)測胃癌前病變的進(jìn)展。

原癌基因C-erbB-2是細(xì)胞基因組的正常成分，其表達(dá)產(chǎn)物具有酪氨酸蛋白激酶活性，在細(xì)胞增殖及分化調(diào)控中起重要作用，正常情況下處于非激活狀態(tài)。該基因在多種致病因素作用下，可因點突變、獲得啟動子、增強(qiáng)子、基因擴(kuò)增與重排等被活化,表現(xiàn)為基因的擴(kuò)增和產(chǎn)物的高表達(dá), 具有致癌變活性。張朝軍等人[7]研究提示：C-erbB-2 基因的表達(dá)不僅發(fā)生于重度異型典型增生及胃癌組織中，而且在輕、中度異型增生及腸上皮化生組織中也出現(xiàn) C-erbB-2 基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌前病變中，C-erbB-2表達(dá)明顯增加[8-10]，本研究結(jié)果表明，胃黏膜中、重度異型增生C-erbB-2表達(dá)(33.33%、50.00%)明顯增加，與文獻(xiàn)報道一致，提示C-erbB-2廣泛活化參與了胃癌癌變過程。

現(xiàn)代腫瘤學(xué)認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生必須有至少兩個腫瘤相關(guān)基因的異常激活或失活，并且同時有原癌基因的活化和抑癌基因的失活。本研究檢測到在胃癌前病變組織中抑癌基因Rb和原癌基因C-erbB-2的異常表達(dá)，統(tǒng)計分析表明，二者無明顯相關(guān)性，提示二者同時或相繼出現(xiàn)異常表達(dá)增加了胃癌前病變癌變的風(fēng)險，需要密切隨訪。以上研究結(jié)果提示，檢測基因Rb、C-erbB-2可用于監(jiān)測胃癌前病變的進(jìn)展，以指導(dǎo)胃癌前病變的臨床干預(yù)。

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