虹吸法與離心法制備冷沉淀的質量分析

付竹筠

冷沉淀是臨床上較常用的一種血液成分，它是由新鮮冰凍血漿在2~6 ℃環境下融化后殘留的白色沉淀物。其主要成分是凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原、纖維結合蛋白、血管性血友病因子等，特別是冷沉淀中Ⅷ因子是體內纖溶系統的重要成分。但由于Ⅷ容易受外界因素影響而不穩定，所以不同的制備工藝和設備所制備的冷沉淀，其質量存在較大差異。為了選擇一種合適的方法制備冷沉淀，筆者分別運用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法和4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀并進行質量比較，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 血液來源 制備冷沉淀的原料漿均來源于筆者所在市無償獻血者的合格血液，采集全血400 ml（要求采血順利，血流通暢無凝塊），6 h內分離出血漿約220 ml并在血漿速凍機中冰凍成塊，貯存在-30 ℃以下的冰箱中備用。

1.2 儀器設備 CT-4T.6C型低溫水浴融化箱（美國Cytotherm公司），4 ℃日本三洋冰箱，索福RC-12BP大容量離心機，CA-50凝血酶儀（日本Sysmex公司）。

1.3 冷沉淀的制備方法

1.3.1 虹吸法 運用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法制備冷沉淀。制備方法為：將12袋待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置于溫度恒定在6 ℃的CT-4T.6C型低溫水浴融化箱的水浴箱中，融化15 min后血袋管道變軟，松開轉移空袋的止流夾，將轉移空袋置于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。在血漿融化的過程中水浴箱不停地搖晃，使水和新鮮冰凍血漿能充分地接觸，保證血漿受熱均勻。血漿融化后，隨時被虹吸至轉移空袋中，當血漿融化至剩下40~50 ml血漿與沉淀物時，閉合導管，阻斷虹吸，將血漿與沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子，制備過程約需1 h。

1.3.2 離心法 運用4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀。制備方法為：取出12袋待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置（4±2）℃冰箱中融化10~11 h，待其融化至尚剩下少量冰渣時取出離心（3000 r/min，10 min，溫度0~4 ℃），移出上層血漿至轉移空袋，將留下的20~30 ml血漿與沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子。

1.4 統計學處理 采用SPSS 11.0統計軟件包進行統計學分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

12袋采用虹吸法和12袋采用離心法制備的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ和纖維蛋白原的含量均達到我國的質量標準[1]，凝血因子Ⅷ的含量分別為（120±11）IU/袋，（90±9）IU/袋，兩者比較差異具有統計學意義（P<0.01）；纖維蛋白原的含量分別為（165±12）mg/袋，（168±10）mg/袋，兩者比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 虹吸法與離心法制備冷沉淀Ⅷ因子、纖維蛋白原含量比較

3 討論

冷沉淀主要用于兒童血友病甲、血管性血友病、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥患者，冷沉淀也經常用于手術后出血，嚴重外傷及DIC等患者的治療，是一種臨床療效顯著，已被臨床醫師廣泛接受的血液產品。因此血站應為臨床提供優質高效的冷沉淀，以保證臨床療效。

新鮮冰凍血漿內含有全部的凝血因子，其中的Ⅷ因子是一種不穩定的凝血因子。新鮮冰凍血漿融化后，Ⅷ因子活性隨著時間的延長而有明顯的降低，其活性衰減了41.17%[2]，國內報道在1 h內融化完成所制冷沉淀質量最好[3]；Ⅷ因子在2~6 ℃的水浴中制備其回收率較高，在8 ℃以上產生自融。所以新鮮冰凍血漿的融化時間和融化溫度是影響冷沉淀質量的關鍵因素。本文結果顯示，虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量較離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量顯著升高，比較差異有統計學意義（P<0.01）；但兩種方法制備的冷沉淀纖維蛋白原含量比較差異無統計學意義（P>0.05）。這是因為運用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法制備冷沉淀僅需1 h，且可使水浴箱中水的溫度恒定6 ℃，因而極大地避免了Ⅷ因子的喪失。而運用4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀，新鮮冰凍血漿需要在4 ℃冰箱中經過10~11 h緩慢融化至一定程度后，再進行離心分離，耗時長，離心時不可避免的溫度上升，制備后期產品在室溫下完成，均可導致Ⅷ因衰減較多。纖維蛋白原是一種穩定的凝血因子，受制備時間和制備溫度的影響較小，所以兩種方法制備的冷沉淀纖維蛋白原含量無明顯差異。虹吸法制備冷沉淀簡便、快捷，凝血因子Ⅷ含量高，優于離心法，值得推廣應用。

[1] 中華人民共和國衛生部.中國輸血技術操作規程（血站部分）[M].天津：天津科學技術出版社，1997：44.

[2] 楊江存，李芒會，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時間凝血因子的變化[J].中國輸血雜志，2005，18（3）：211-212.

[3] 高峰.臨床輸血與檢驗[J].北京：人民衛生出版社，2003：139-140.