FGFR2基因多態性與乳腺癌相關性研究

徐維華 王守彪

1.山東省蓬萊市人民醫院普外科，山東蓬萊 265600；2.青島大學解剖教研室，山東青島 266021

FGFR2基因多態性與乳腺癌相關性研究

徐維華1王守彪2▲

1.山東省蓬萊市人民醫院普外科，山東蓬萊 265600；2.青島大學解剖教研室，山東青島 266021

目的 研究成纖維細胞生長因子受體2（FGFR2）基因單核苷酸多態性（SNP）與乳腺癌發生相關性。方法 實驗組為280例乳腺癌患者，對照組為280名健康女性，運用等位基因擴增-聚合酶鏈反應（ASA-PCR）方法，對其FGFR2基因3個位點 （rs2912778、rs2981578、rs2981582）進行檢測，并對擴增產物進行測序，分析其中2個位點（rs2912778、rs3135718）單核苷酸多態性與乳腺癌風險關系。結果 兩個位點（rs2912778、rs3135718）基因型分布及等位基因頻率在乳腺癌組和對照組差異具有高度統計學意義 （P＜0.01）。 結論 FGFR2基因兩個位點（rs2912778、rs3135718）單核苷酸多態性可能與乳腺癌的發生有關。

單核苷酸多態性；成纖維細胞生長因子受體2；乳腺癌；相關性

乳腺癌是女性主要死亡原因之一，發達國家及發展中達國家均出現增長趨勢。成纖維細胞生長因子受體2（FGFR2）參與胚胎形成、維持人體內穩態及癌變過程。國外研究表明，FGFR2可能與乳腺癌發生相關，可能成為雌激素受體陽性乳腺癌治療的靶點[1]。本文運用等位基因擴增-聚合酶鏈反應（ASA－PCR）結合基因測序，分析FGFR2基因單核苷酸多態性與乳腺癌發生的關系。現報道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料

乳腺癌組280例，為青島大學醫學院附屬醫院2009年10月～2010年4月普外科確診的女性乳腺癌患者，均行乳腺癌改良根治術，年齡24～71歲，中位年齡45歲。對照組280例，為青島大學醫學院附屬醫院體檢健康的女性，年齡28～69歲，中位年齡47歲。兩組年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實驗方法

抽取實驗對象外周靜脈血5 mL置于抗凝管中于-80℃保存備用。

1.2.1 提取DNA采用TIANGEN試劑盒提取DNA。

1.2.2 設計、合成引物 采用Primer Premier 5軟件設計引物，由上海桑尼生物科技有限公司合成引物。3個位點的引物序列、目的條帶長度見表1。

表1 3個位點的ASA引物序列

1.2.3 PCR擴增 配置ASA-PCR反應混合物，反應物均為：DNA 模板 0.8 μL、上游引物 0.8 μL、下游引物 0.8 μL、TaqMIX 0.5 μL，用超純水補至 10 μL。rs2912778 反應條件：94 ℃預變性 5 min，94℃變性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸30 s，30 個循環后，72℃延伸7min。rs3135718反應條件：94℃預變性5 min，94℃變性 30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸 30 s，30 個循環后，72℃延伸 7 min。

1.2.4 擴增條帶分析 以marker2000作為參照，將擴增產物進行凝膠電泳，拍照記錄，并將目的條帶進行基因測序檢驗。

1.3 統計學方法

應用SPSS 17.0版統計建立數據庫，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義，P＜0.01為差異有高度統計學意義。

2 結果

2.1 ASA-PCR結果

PCR產物電泳結果、測序結果見圖1～4。

2.2 基因型及等位基因頻率在乳腺癌組與對照組之間的分布

經檢測，對照組符合Hardy-Weinberg定律。rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布在乳腺癌組與對照組之間均有高度統計學意義（P＜0.01）。見表1、2。

3 討論

傳統的乳腺癌治療方法主要有手術、化療、放療、內分泌治療等綜合治療，盡管使乳腺癌患者因此獲益，但仍不能徹底消滅腫瘤細胞。癌變根本問題在于基因，即癌基因激活或是抑癌基因失活，因此，要想從根本上解決癌癥問題，必須從基因著手。

表1 rs2912778位點基因型與等位基因頻率分布統計[n（%）]

表2 rs3135718位點基因型與等位基因頻率分布統計表[n（%）]

FGFR2基因編碼跨膜酪氨酸激酶，在細胞生長、侵襲和血管生成等方面起作用。細胞系的功能研究提示，FGFR2通過選擇性剪接在C-末端結構域，在腫瘤形成過程中發揮作用[2]。FGFR2與多種腫瘤有關，如乳腺癌、腎癌等[3-4]。FGFR2在乳腺腫瘤中出現擴增或過度表達[5-6]，一些關于人類和大鼠的實驗證明，FGFR2是乳腺癌致病基因[7-11]。乳腺癌變小鼠模型的建立表明FGF信號通路是乳腺腫瘤形成的一個主要因素[4]，在乳腺上皮細胞，FGFR2特異性激活途徑可能是依賴于此基因的不同剪接形式的平衡[12]。眾所周知，FGFR2在人類乳腺癌的ER陽性腫瘤中表達增高，然而，FGFR2基因作為乳腺癌風險因子的機制尚未明了。

本文對乳腺癌組與對照組 rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布進行了統計分析，其中，rs2912778位點A/A基因型、A/G基因型在乳腺癌組和正常組中分別為8例（2.86%）、196 例（70.00%）和 60 例（21.43%）、151 例（53.93%），rs3135718位點T/T基因型、T/C基因型在乳腺癌組和正常組中分別為 26例（9.29%）、238例（85.00%）和 105例（37.50%）、144例（51.43%）。 結果表明，rs2912778、rs3135718基因型、等位基因頻率分布在乳腺癌組與對照組之間均有高度統計學意義（P＜0.01）。同時，筆者對乳腺癌患者FGFR2基因兩個SNP位點rs2912778、rs2981578進行檢測，表明這兩個位點突變可能是乳腺癌發生的風險因子。西伯利亞人口研究中，FGFR2基因的rs2912778增加了乳腺癌的患病風險[13]。Katoh M等[3]研究表明，FGFR2rs2981578位點與乳腺癌發生相關，本文結果與此較一致。乳腺癌是多因素綜合作用的結果，因此，仍需更大量的樣本進行進一步研究。

在腫瘤形成方面，FGFR2具有雙重作用，可以是癌基因，也可以是抑癌基因。FGFR2基因突變的確定使我們進一步了解了腫瘤的病因學，通過對FGFR2基因一系列的生殖細胞系或體細胞系的突變研究，進一步擴展了FGFR2基因相關疾病的范圍。針對FGFR2突變導致惡性腫瘤，抑制FGFR2突變或將突變的基因進行修復，有針對性地進行個體化治療，可為FGFR2基因突變相關惡性腫瘤提供一個合理的、可能有效的新途徑，具有重要的研究價值和應用前景。

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Relative research of FGFR2 gene SNPs and breast neoplasm

XU Weihua1WANG Shoubiao2▲
1.General Surgery Department,the People's Hospital of Penglai City in Shandong Province,Penglai 265600,China;2.Anatomy Department,Medical College of Qingdao University,Qingdao 266021,China

Objective To study the relationship of the single nucleotide polymorphisms(SNP)in the fibroblast growth factor receptor 2 gene(FGFR2)and the development of breast neoplasm.Methods Two hundred and eighty patients with breast neoplasm and 280 healthy women were randomly selected.Allele amplification-polymerase chain reaction(ASA-PCR)method was used to detect the FGFR2 gene three loci(rs2912778,rs2981578,rs2981582),and the amplified products were sequenced.The risk relationship between the two sites(rs2912778,rs3135718)single nucleotide polymorphisms and breast cancer were analyzed.Results There were significant differences in the genotype frequency and allele frequency between the two groups(P＜0.01).Conclusion The SNP of rs2912778 and rs3135718 in the FGFR2 is probably connected with the development of breast neoplasm.

Single nucleotide polymorphism;FibrobIast growth factor receptor 2;Breast neoplasm;Correlation

R737.9

A

1674-4721（2012）11（c）-0017-03

徐維華（1973-），男，青島大學2008級在讀碩士研究生，主治醫師，主要從事胃腸、乳腺、甲狀腺等方面疾病的診治工作。

▲通訊作者：王守彪，青島大學解剖教研室，教授。

2012-10-17 本文編輯：陳 俊）