牡蠣多糖提取工藝的研究

張艷軍，李超柱，彭重威，陳艷輝

（欽州學院 化學與化工學院，廣西 欽州 535000）

牡蠣多糖提取工藝的研究

張艷軍，李超柱*，彭重威，陳艷輝

（欽州學院 化學與化工學院，廣西 欽州 535000）

優(yōu)化提取工藝條件，從牡蠣中提取具有調(diào)節(jié)機體免疫、抑制腫瘤、延緩衰老、降血糖、血脂、等生物活性的多糖。采用硫酸－苯酚法測定牡蠣多糖，根據(jù)L9（34）正交試驗對牡蠣多糖（Polysaccharide of Oyster）的提取條件進行優(yōu)化，確定水提取多糖的工藝參數(shù)為：pH為6、提取時間5 h、提取次數(shù)為3次、水浴溫度為75℃，該條件下多糖得率達2.56%。

牡蠣多糖；提取；苯酚－硫酸比色法；正交試驗

牡蠣，屬牡蠣科（Ostreidae真牡蠣）或燕蛤科（Aviculidae珍珠牡蠣），雙殼類軟體動物，分布于溫帶和熱帶各大洋沿岸水域[1]。據(jù)統(tǒng)計，全世界已發(fā)現(xiàn)的就有100多種，分布于熱帶和溫帶。在我國沿海牡蠣分布很廣，渤海、黃海至南沙群島均產(chǎn)，約有20種。牡蠣肉肥爽滑，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，素有“海底牛奶”之美稱，是沿海一種重要的海洋經(jīng)濟貝類[2]。西方牡蠣仍被譽為“神賜魔食”，日本人則譽之為“根之源”。在我國有“南方之牡蠣，北方之熊掌”。牡蠣中含有海洋生物特有的多種活性物質(zhì)，其中含有的多糖，具有調(diào)節(jié)機體免疫、抑制腫瘤、延緩衰老、降血糖、血脂、等生物活性[3-4]。廣西欽州是中國著名的“牡蠣之鄉(xiāng)”，為充分發(fā)揮地方資源，本文選取了“欽州四大特產(chǎn)”之一的牡蠣，對其中多糖的提取工藝進行研究，為開發(fā)廣西地區(qū)豐富的海洋資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

新鮮牡蠣500 g：采于廣西欽州茅尾海海域。

1.1.2 試劑

苯酚（AR）、硫酸（98%）、乙醇（95%）、葡萄糖（AR）。

1.1.3 儀器

SHB-III循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城工貿(mào)有限公司；721E分光光度計：上海舜宇恒平科學儀器有限公司；LB610型電子天平：上海上天精密儀器有限公司；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；LD4-2A離心機：上海梅香儀器有限公司；冰箱（新飛）、數(shù)顯鼓風干燥箱101-3A：紹步伐市滬越科學實驗儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 多糖提取方法

取新鮮牡蠣20 g，用自來水清洗3遍，粉碎，勻漿，取牡蠣勻漿液，加入到一定pH的水溶液中，水浴提取，過濾，離心，減壓濃縮，醇沉得粗多糖，離心后取沉淀冷凍干燥，在冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 測定方法

苯酚-硫酸法：苯酚-硫酸法是測定多糖的常用方法。其原多糖類成分在硫酸作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糖和苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法于適當波長處進行測定。

取一定量的多糖，溶解，定容到50 mL，配制成多糖溶液。取一定體積多糖溶液，加入80%的重蒸苯酚溶液和濃硫酸，搖勻，放置冷卻到室溫，分光光度計測定吸光度，再根據(jù)多糖標準曲線計算多糖的得率。

1.2.3 計算方法

牡蠣多糖含量的計算：硫酸-苯酚法測定多糖提取液中的多糖得率為：

式中：X為在Y吸光度下根據(jù)回歸方程計算所得的值；ρ[5]為校正系數(shù)，取0.9。

2 試驗步驟

2.1 最大吸收波長的確定

按照2.2方法，在比色管中加入1.0 mL標準葡萄糖溶液（0.1000 mg/mL），加入1.2 mL 80%重蒸苯酚溶液、6 mL濃硫酸，并用蒸餾水定容到10 mL，搖勻，冷卻至室溫后，在分光光度計上檢測吸收譜峰值，490 nm處為最大吸收峰值。如圖1及表1所示。

2.2 標準曲線的繪制

在比色管中，分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL的標準葡萄糖溶液，加入1.2 mL80%重蒸苯酚溶液，再加入6 mL濃硫酸、并用蒸餾水定容到10 mL，搖勻，冷卻到室溫，用分光光度計在490 nm下測吸光度，如表2。以吸光度（Y）對葡萄糖的用量得回歸方程：y=3.4357x+0.0037，R2=0.9992。

表 1 吸光值隨波長變化的數(shù)據(jù)表Table 1 The absorpion spectrum of different wavelength

表 2 吸光值隨葡萄糖的用量變化的數(shù)據(jù)表Table 2 The absorption spectrum of different concentration glucose

2.3 牡蠣多糖的提取過程正交試驗

牡蠣多糖正交試驗及工藝條件的優(yōu)化：本研究根據(jù)各因素水平試驗結(jié)果，選定以pH、提取時間、提取次數(shù)、提取溫度（℃）為因素設(shè)計為四因素、三水平的正交試驗L9（34），對牡蠣多糖提取工藝進行優(yōu)選，因素水平見表3，正交試驗結(jié)果見表4。

表 3 牡蠣多糖提取因素水平表Table 3 Factors and levels of orthogonal test of polysaccharide of oyster

表 4 正交試驗表及結(jié)果Table 4 Polysaccharide extraeting rate of orthogonal test

以多糖收率為考察指標，由表4分析得知，各因素作用主次為A>C>D>B。從極差分析得知，諸因素對多糖提取收率的影響順序為：A（pH）＞C（提取次數(shù)）＞D（提取溫度）＞B（提取時間）。即各因素影響的順序是：pH對多糖收率影響較大，其次是提取次數(shù)，時間對多糖收率影響最小，對結(jié)果均無顯著性影響。故依據(jù)直觀分析結(jié)果，結(jié)合生產(chǎn)成本，選擇牡蠣多糖的最佳提取工藝參數(shù)為A3B3C3D2，pH為6、提取時間為5 h、提取次數(shù)為3次、水浴溫度為75℃。

3 結(jié)論

牡蠣多糖的最佳提取工藝參數(shù)為A3B3C3D2，pH為6、提取時間5 h、提取次數(shù)為3次、水浴溫度為75℃，該條件下多糖得率達2.56%。

[1]劉曉,王海艷,張素萍,等.中國近海牡蠣系統(tǒng)分類研究的現(xiàn)狀和對策[J].動物學雜志,2003,4(3):3-4

[2]陳惠源,蔡俊鵬.牡蠣的營養(yǎng)藥用價值及其開發(fā)利用[J].中藥材,2005,28(3):172-174

[3]曾利榮,張爾賢.牡蠣的食用與藥用價值及其開發(fā)利用[J].自然雜志,1998,20(6):321

[4]尹淑敏,李鳳謙.牡蠣的藥用[J].中國醫(yī)學雜志,1994,12:751-752

[5]張惟杰.復合多糖生化研究技術(shù)[M].上海科學技術(shù)出版社,1987:6-7

Study of Extraction and Methods of Polysaccharide of Oyster

ZHANG Yan－jun，LI Chao－zhu*，PENG Chong-wei，CHEN Yan－h(huán)ui，
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Qinzhou University，Qinzhou 535000，Guangxi，China）

The author made a study on the optimum preparation procedure for extraction of polysaccharide from the Oyster through sulfate－phenol method，the orthogonal test of four factors and three levels were studied to obtain the extracting technology of oyster.The optimal technical conditions were：the pH was 6，extraction time was 5 hours，extraction 3 times and extraction temperature was 75 ℃，extracting ratio was 2.56%.

polysaccharide of oyster；extraction；sulfate－phenol method；orthogonal test

廣西自然基金（桂科自0832281）、（2010GXNSFA013062）；廣西教育廳面上項目（200708MS072）、（200911MS241）

張艷軍（1980—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物化學及生物活性物質(zhì)的提取、分離研究。

*通信作者：李超柱（1957—），男（漢），副教授，學士，研究方向：天然產(chǎn)物化學及有機合成。

2011-04-18