黃秋葵粉對(duì)衰老小鼠抗疲勞和免疫功能的影響

陳艷珍，宋新華

（山東理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 淄博 255049）

黃秋葵（Okra，Hibiscus esculentus L.），又名秋葵，羊角豆等，屬錦葵科秋葵屬一年生草本植物，黃秋葵果實(shí)中含有豐富的多糖、礦物質(zhì)和黃酮類(lèi)化合物等，具有一定的保健功能[1-4]。但有關(guān)黃秋葵果實(shí)粉（OFP）增強(qiáng)免疫力和抗疲勞研究國(guó)內(nèi)外尚鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究探討OFP對(duì)衰老小鼠免疫和抗疲勞能力的影響，為黃秋葵的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與主要儀器

D-半乳糖：美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)；甘油三酯（TG）、血糖（GlU）、總膽固醇（TC）測(cè)定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。TGL-18C-C高速臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；722分光光度計(jì)、FC204電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；HWS-26型數(shù)顯恒溫水浴鍋：上海一恒科技有限公司；UV755B紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海分析儀器總廠。

1.1.2 動(dòng)物分組與處理

昆明種小白鼠50只，體重（20±2）g，山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。用基礎(chǔ)飼料（山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）喂養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境。之后將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只（雌雄各半）：正常對(duì)照組、衰老模型對(duì)照組均飼喂基礎(chǔ)飼料，低劑量組、中劑量組和高劑量組飼喂用黃秋葵果實(shí)粉（淄博濟(jì)世保健食品科技有限公司提供）替代等量基礎(chǔ)飼料的試驗(yàn)飼料（替代量依次為 32.00、64.00、128.00 g/kg）。除正常組外，其余各組均每日頸背部皮下注射400 mg/kg·bw的D-半乳糖0.2 mL（D-半乳糖以滅菌生理鹽水配置），正常組注射等量生理鹽水，每天定時(shí)注射，連續(xù)56 d。小鼠同室分籠飼養(yǎng)（每籠5只），保持衛(wèi)生清潔、光照充足，自由采食和飲水。每天進(jìn)行常規(guī)觀察，包括動(dòng)物外觀、體征、行為活動(dòng)等，每周稱(chēng)體重一次，根據(jù)小鼠體重變化調(diào)整注射量。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 黃秋葵果實(shí)粉主要成分分析方法

水分，105℃熱失重法；蛋白質(zhì)，凱氏定氮法；脂肪，乙醚索氏提取法；灰分，高溫灰化法；粗多糖，水提醇沉法[4]；總黃酮，甲醇索氏提取，蘆丁測(cè)定含量[5]。

1.2.2 抗疲勞試驗(yàn)[6]

負(fù)重游泳試驗(yàn)：小鼠連續(xù)灌喂49 d，灌胃30 min后，每只小鼠尾根部按小鼠體重5%負(fù)荷鉛絲，將小鼠置于水深30 cm、水溫（25±1）℃的水槽內(nèi)自由游泳，用秒表記錄小鼠自落水至鼻孔沉入水中8 s不能浮出水面的時(shí)間，為小鼠游泳時(shí)間。

血清尿素氮含量的測(cè)定：負(fù)重游泳的小鼠休息60 min后眼底采血0.5 mL，采用二乙酰-肟法測(cè)定。

肝糖原的測(cè)定：實(shí)驗(yàn)56 d后，小鼠頸椎脫臼法處死，準(zhǔn)確稱(chēng)取肝臟200 mg，采用蒽酮比色法測(cè)定。

1.2.3 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞和免疫器官指數(shù)的測(cè)定[6]

于實(shí)驗(yàn)?zāi)┤战?2 h，灌胃30 min后稱(chēng)重，每鼠腹腔注射5%壓積的雞紅細(xì)胞（CRBC）懸液0.8 mL進(jìn)行免疫，眼底采血、離心分離血清，待測(cè)生化指標(biāo)。小鼠頸椎脫臼處死，采用滴片法測(cè)定巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)。剝?nèi)∑⑴K、胸腺，去除臟器周?chē)闹竞徒Y(jié)締組織，用1/100電子天平稱(chēng)其濕重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

吞噬率（%）=吞有CRBC的巨噬細(xì)胞數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞×100吞噬指數(shù)=吞噬的CRBC總數(shù)/100個(gè)巨噬細(xì)胞免疫器官指數(shù)＝臟器重量（mg）/小鼠體重（10 g）

1.2.4 血清生化指標(biāo)的檢測(cè)

血清中血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）的含量均按試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 黃秋葵果實(shí)粉主要成分

經(jīng)測(cè)定，黃秋葵果實(shí)粉中主要成分的重量百分比（%）為：蛋白23.31，脂肪24.00，灰分 5.97，水分 5.96，粗多糖1.24，總黃酮1.98，以上各值均為3次平行試驗(yàn)分析的均值。

2.2 一般情況

飼養(yǎng)56 d后，各劑量組、模型組增重與正常組比，差異顯著（P<0.05）；各劑量組間以及各劑量組與模型組間體重均無(wú)顯著差異（P＞0.05），但從外表觀察，各劑量組和正常組小鼠皮毛光滑，精神狀態(tài)較好；而模型組小鼠皮毛粗糙，精神狀態(tài)較差；各組間進(jìn)食量均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明給予黃秋葵果實(shí)粉沒(méi)有影響進(jìn)食情況。

2.3 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)機(jī)體抗疲勞作用的影響

黃秋葵果實(shí)粉對(duì)機(jī)體抗疲勞作用的影響，見(jiàn)表1。

表1 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)機(jī)體抗疲勞作用的影響Table 1 The effect of Okra fruit powder on anti-fatigue of aged mice（，n=10）

注：與模型組相比較，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

肝糖原/（mg/g）正常組 500.82±46.66b 8.26±2.12a 4.98±0.81a模型組 325.22±62.52 12.89±3.36 3.02±0.62低劑量組 406.85±68.03 10.32±2.73 3.78±0.59中劑量組 448.69±61.70a 9.46±2.58a 4.56±0.43a高劑量組 430.28±60.72a 9.57±2.39a 4.34±0.76a組別 負(fù)重游泳時(shí)間/s血清尿素氮/（mmol/L）

對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素氮和肝糖原含量進(jìn)行測(cè)定，模型組與正常組各指標(biāo)均存在顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組相比，各劑量組血清尿素氮含量均有不同程度下降；負(fù)重游泳時(shí)間和肝糖原含量均有一定程度升高。結(jié)果表明，低劑量組可降低小鼠血清中血清尿素氮含量及提高負(fù)重游泳時(shí)間和肝糖原含量，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量組負(fù)重游泳時(shí)間和肝糖原含量明顯高于模型組（P＜0.05），尿素氮含量顯著低于模型組（P＜0.05）。

2.4 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響

黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響，見(jiàn)表2。

表2 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響Table 2 Effect of Okra fruit powder on the immunity index of aged mice(,n=10）

表2 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠免疫指標(biāo)的影響Table 2 Effect of Okra fruit powder on the immunity index of aged mice(,n=10）

注：與模型組相比較，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

組別 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù) 吞噬率/% 吞噬指數(shù)正常組 37.82±5.47b 52.88±8.52b 52.16±18.57a 0.67±0.06a模型組 28.55±3.82 39.67±9.34 39.91±12.26 0.35±0.04低劑量組 33.60±4.96 43.26±7.57 45.61±14.78 0.42±0.07中劑量組 35.26±3.88a 44.88±6.63a 48.74±16.16a 0.60±0.06a高劑量組 35.46±5.62a 46.71±8.79a 51.10±20.03a 0.63±0.08a

從表2可以看出，模型組與正常組比較，吞噬率、吞噬指數(shù)、胸腺和脾臟指數(shù)均存在顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組相比，各劑量組吞噬率、吞噬指數(shù)、胸腺和脾臟指數(shù)均有一定程度升高。結(jié)果表明，低劑量組可提高吞噬率、吞噬指數(shù)、胸腺和脾臟指數(shù)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量組吞噬率、吞噬指數(shù)、胸腺和脾臟指數(shù)明顯高于模型組（P＜0.05）。

2.5 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響

黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響，見(jiàn)表3。

表3 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響Table 3 The effect of Okra fruit powder on the blood index of aged mice（,n=10）

表3 黃秋葵果實(shí)粉對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響Table 3 The effect of Okra fruit powder on the blood index of aged mice（,n=10）

注：與模型組相比較，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

組別TG/（mmol/L）GLU/（mmol/L）TC/（mmol/L）正常組 1.44±0.30a 0.57±0.07a 1.77±0.16a模型組 2.01±0.49 0.85±0.10 2.74±0.22低劑量組 1.85±0.26 0.79±0.06 2.60±0.16中劑量組 1.54±0.27a 0.77±0.07 2.24±0.13a高劑量組 1.82±0.22 0.81±0.04 2.38±0.18

從表3小鼠血清中TG、GLU、TC的測(cè)定數(shù)據(jù)可知，模型組與正常組各指標(biāo)均存在顯著性差異（P＜0.05）。與模型組相比，各劑量組血清中TG、GLU、TC的含量均有不同程度下降。結(jié)果表明，低、高劑量組可降低血清中TG、GLU、TC的含量，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中劑量組血清中TG和TC含量明顯低于模型組（P＜0.05），GLU含量低于模型組，但差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

常用的體力疲勞的評(píng)價(jià)方法主要有運(yùn)動(dòng)耐力實(shí)驗(yàn)和生化指標(biāo)的檢測(cè)。運(yùn)動(dòng)耐力實(shí)驗(yàn)是反映機(jī)體疲勞最直接、最客觀的指標(biāo)。在反映疲勞的生化指標(biāo)中，血清尿素氮、肝糖原含量等生化指標(biāo)的改變最具代表性，也是檢測(cè)疲勞最常用的指標(biāo)[6]。糖原是機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)能量的重要來(lái)源，它的多少直接影響運(yùn)動(dòng)能力，故肝糖原含量是檢測(cè)保健食品抗疲勞作用的重要指標(biāo)之一。運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮的多少，提示機(jī)體利用蛋白質(zhì)供能的多少，間接反映機(jī)體的疲勞程度[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，衰老小鼠抗疲勞能力顯著下降；秋葵果實(shí)粉可提高衰老小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和肝糖原儲(chǔ)備，降低衰老小鼠血清尿素氮含量，中、高劑量組效果顯著（P＜0.05）。

免疫功能的衰退是機(jī)體衰老最明顯的特征之一。胸腺是免疫系統(tǒng)的中心器官；脾臟是外周免疫器官，是體內(nèi)最大的淋巴器官。機(jī)體內(nèi)的免疫細(xì)胞大多數(shù)分布于胸腺和脾臟中，因此，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)是衡量胸腺和脾臟功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。巨噬細(xì)胞具有吞噬、殺傷、遞呈抗原、分泌生物活性物質(zhì)、調(diào)控局部組織微環(huán)境以及抑制腫瘤等多種免疫功能，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，衰老小鼠免疫功能顯著下降；飼喂黃秋葵果實(shí)粉可提高衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)，增強(qiáng)衰老小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性，中、高劑量組效果顯著（P＜0.05）。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠血清總膽固醇、甘油三酯、血糖含量測(cè)定結(jié)果表明，衰老小鼠血脂和血糖含量顯著升高；飼喂黃秋葵果實(shí)粉可降低衰老小鼠血酯、血糖含量，中劑量組降血脂效果顯著（P＜0.05）。

綜上，黃秋葵果實(shí)粉能顯著提高衰老小鼠免疫功能和抗疲勞作用。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)前期對(duì)黃秋葵果實(shí)粉主要成分的檢測(cè)，可以初步推論黃秋葵果實(shí)粉可能是通過(guò)其中含有的礦物元素、多糖和黃酮等，通過(guò)代謝途徑提高機(jī)體免疫功能和抗疲勞作用。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)黃秋葵果實(shí)粉生物活性的研究報(bào)道較少，發(fā)揮這一作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)還不很清楚，有待深入研究。

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