提高缺氧耐受力的紅景天口服液的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)

劉琳，莫麗春，郭艷，向晉龍，曾凡駿，*

（1.四川大學(xué)食品工程系，四川 成都 610065；2.四川省疾病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；3.四川麥力若科技發(fā)展有限責(zé)任公司，四川 成都 610065）

當(dāng)人體組織得不到充足的氧，或不能充分利用氧時(shí)，細(xì)胞、組織、器官的代謝、機(jī)能、甚至形態(tài)結(jié)構(gòu)都可能發(fā)生異常變化，這一病理過程就稱為缺氧。缺氧多見于空氣稀薄的高原地區(qū)，一些低氧場(chǎng)所，如商場(chǎng)、辦公樓、地鐵、隧道、地下設(shè)施等。一些特殊人群也易發(fā)生缺氧癥狀，如利用氧的效率下降的老年人、腦力勞動(dòng)者及運(yùn)動(dòng)員。因此開發(fā)具有缺氧耐受力的保健食品具有重要的意義。紅景天為保健食品可用資源，為景天科紅景天屬多種植物的根及根莖，主要成分有紅景天甙和酪醇[1]。紅景天具有抗缺氧、抗疲勞[2]等功能，臨床上紅景天可用于預(yù)防高原反應(yīng)的輔助用藥[3]。紅景天通過降低耗氧量、耗氧速度，清除自由基或減少自由基對(duì)血管內(nèi)皮的損傷來實(shí)現(xiàn)抗缺氧作用[4]。以紅景天提取物為主要原料，輔以枸杞子提取物、西洋參提取物、牛磺酸，開發(fā)一種具有提高缺氧耐受力功能的保健食品。

1 產(chǎn)品工藝和配方

紅景天能提高機(jī)體組織氧的利用率，增加有氧氧化酶的活性，提高機(jī)體的帶氧和供氧能力，來實(shí)現(xiàn)抗缺氧作用。在缺氧環(huán)境枸杞多糖對(duì)心、肝、肺、腦、肌組織、睪丸組織等器官和組織的缺氧損傷具有保護(hù)作用。除此之外，枸杞的抗疲勞功能也強(qiáng)化了提高缺氧耐受力功能。西洋參顯著的益氣、抗疲勞功能進(jìn)一步強(qiáng)化了耐缺氧功效。牛磺酸通過維持細(xì)胞功能穩(wěn)態(tài)，增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受力。以紅景天提取物為主要原料，輔以枸杞子提取物、西洋參提取物和牛磺酸，協(xié)同提高缺氧耐受力，研制出紅景天口服液。紅景天生藥經(jīng)水提、濃縮、噴霧干燥制成紅景天提取物；枸杞子生藥經(jīng)水提、醇沉、真空干燥、粉碎制成枸杞子提取物；西洋參生藥經(jīng)醇提、濃縮、噴霧干燥制成西洋參提取物。紅景天口服液經(jīng)3種提取物和牛磺酸檢驗(yàn)、計(jì)量稱重、制母液、配液、過濾、灌裝、封口、滅菌、燈檢、包裝、檢驗(yàn)等工序制作而成。紅景天口服液推薦服用量為10 mL×3/（人·d），功效成分及用量為：紅景天甙6.82 mg/d，粗多糖66 mg/d。

2 安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)

2.1 材料

2.1.1 樣品

紅景天口服液：由四川麥力若科技發(fā)展有限責(zé)任公司中試生產(chǎn)。

2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠和SD大鼠（白色封閉群大鼠）：四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2.1.3 主要儀器和試劑

CX4型全自動(dòng)生化分析儀：美國(guó)貝克曼公司；CA620-Vet型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀：瑞典麥道尼克公司；AL104型METTLER電子天平：瑞士梅特勒-托利多公司；OLYMPUS BH-2型顯微鏡：日本奧林巴斯公司；雙人單面垂直流凈化工作臺(tái)VS-1300L-U：蘇州達(dá)寶凈化設(shè)備有限公司。

生化試劑盒、環(huán)磷酰胺、1，8-二羥基蒽醌、疊氮化鈉、2-氨基芴、4-硝基喹啉-N氧化物、絲裂霉素C、S-9混合液。

2.2 安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)方法

對(duì)紅景天口服液進(jìn)行急性毒性MTD（最大耐受劑量法）試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)和大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)。其中遺傳毒性試驗(yàn)包括Ames（污染物致突變性檢測(cè)）試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)。

2.3 安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

SD大鼠和昆明種小鼠的MTD值均大于15g/（kg·bw），按急性毒性分級(jí)屬無毒級(jí)。

2.3.2 遺傳毒性試驗(yàn)

3項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)以及小鼠精子畸形試驗(yàn)）結(jié)果無致突變作用。

2.3.3 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

最高劑量為人體推薦量的100倍。可見動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育正常，體重持續(xù)增長(zhǎng)，體態(tài)活潑，大、小便未見異常改變。試驗(yàn)期間未見動(dòng)物出現(xiàn)中毒癥狀及死亡。3個(gè)劑量組雌雄大鼠的每周體重、每周進(jìn)食量、每周食物利用率及總食物利用率、臟體比值與對(duì)照組相比較，均無顯著性差異（P＞0.05），血液學(xué)常規(guī)檢測(cè)及末期血生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組相比較，僅見雄鼠低劑量組和雌鼠中劑量組的白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低有顯著性差異（P<0.05，P<0.05），雄鼠高劑量組的甘油三酯降低有顯著性差異外（P<0.05），其余指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。組織病理學(xué)檢查結(jié)果，除動(dòng)物自發(fā)病變外，未見受試物高劑量組引起動(dòng)物中毒性損傷改變。

3 提高缺氧耐受力功能評(píng)價(jià)

3.1 材料

3.1.1 樣品紅景天口服液

四川麥力若科技發(fā)展有限責(zé)任公司中試生產(chǎn)。

3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雌性昆明種小鼠，120只，體重18 g～22 g，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

3.1.3 主要儀器和試劑

250 mL磨口瓶、秒表、凡士林、鈉石灰、亞硝酸鈉、1 mL注射器、剪刀、電子天平。

3.2 提高缺氧耐受力功能評(píng)價(jià)方法

試驗(yàn)設(shè)5、10、15 mL/（kg·bw）3個(gè)劑量組（分別相當(dāng)于人體推薦量的10、20、30倍），對(duì)紅景天口服液進(jìn)行對(duì)小鼠體重的影響試驗(yàn)、常壓耐缺氧試驗(yàn)、亞硝酸鈉中毒存活試驗(yàn)、急性腦缺血性缺氧試驗(yàn)。

3.3 提高缺氧耐受力功能評(píng)價(jià)結(jié)果

3.3.1 紅景天口服液對(duì)小鼠體重的影響

各劑量組及對(duì)照組動(dòng)物的初始體重經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，方差齊（P>0.05），且方差分析結(jié)果（P>0.05），表明各組動(dòng)物的初始體重是均衡的。3個(gè)劑量組動(dòng)物的中期體重和結(jié)束時(shí)體重與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均無顯著性差異（P>0.05）。

3.3.2 紅景天口服液對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響

紅景天口服液對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響，見表1。

由表1可見，3個(gè)劑量組小鼠的常壓耐缺氧時(shí)間與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，除低劑量組無顯著性差異（P>0.05），中、高劑量組常壓耐缺氧時(shí)間延長(zhǎng)有顯著性差異（P<0.05）。

3.3.3 紅景天口服液對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響

紅景天口服液對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響，見表2。

表1 紅景天口服液對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響（）Table 1 Rhodiola Oral Liquid on the time of Hypoxia tolerance in mice

表1 紅景天口服液對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響（）Table 1 Rhodiola Oral Liquid on the time of Hypoxia tolerance in mice

注：*表示與對(duì)照組比較P<0.05。

劑量/[mL/（kg·bw）]動(dòng)物數(shù)/只存活時(shí)間/minP值010 17.10±1.48510 18.46±1.84 0.16710 10 19.08±2.69* 0.02615 10 19.11±1.37* 0.024

表2 紅景天口服液對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響（）Table 2 Rhodiola Oral Liquid on the survival time of Sodium Nitrite Poisoning in mice

表2 紅景天口服液對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響（）Table 2 Rhodiola Oral Liquid on the survival time of Sodium Nitrite Poisoning in mice

注：*表示與對(duì)照組比較P<0.05。

劑量/[mL/（kg·bw）]動(dòng)物數(shù)/只存活時(shí)間/minP值010 12.81±1.31510 14.55±2.57 0.20710 10 15.64±2.81* 0.01915 10 15.30±1.88* 0.043

由表2可見，3個(gè)劑量組小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，除低劑量組無顯著性差異（P>0.05），中、高劑量組常壓耐缺氧時(shí)間延長(zhǎng)有顯著性差異（P<0.05）。

3.3.4 紅景天口服液對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響

紅景天口服液對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響，見表3。

表3 紅景天口服液對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響（）Table 3 Rhodiola Oral Liquid on the time of Acute Cerebral Ischemic Hypoxia in mice

表3 紅景天口服液對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間的影響（）Table 3 Rhodiola Oral Liquid on the time of Acute Cerebral Ischemic Hypoxia in mice

劑量/[mL/（kg·bw）]動(dòng)物數(shù)/只存活時(shí)間/sP值010 18.90±2.64510 21.50±5.56 0.28710 10 20.50±2.22 0.65415 10 22.00±3.50 0.169

由表3可見，3個(gè)劑量組小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，3個(gè)劑量組無顯著性差異（P>0.05）。

紅景天口服液連續(xù)30 d經(jīng)口灌胃給予雌性小鼠后，可見動(dòng)物生長(zhǎng)良好，體重持續(xù)增長(zhǎng)。中、高劑量組能明顯延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間，常壓耐缺氧試驗(yàn)結(jié)果為陽性；中、高劑量組能顯著延長(zhǎng)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)果為陽性；小鼠急性腦缺血性缺氧試驗(yàn)結(jié)果為陰性。按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的規(guī)定，紅景天口服液對(duì)動(dòng)物具有提高缺氧耐受力功能。

4 產(chǎn)品功效成分穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)3個(gè)批次的紅景天口服液進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)，在（38±1）℃和相對(duì)濕度75%的環(huán)境中加速試驗(yàn)3個(gè)月，每月測(cè)定口服液中功效成分紅景天甙和粗多糖的含量。經(jīng)3個(gè)月的加速實(shí)驗(yàn)，功效成分變化情況如表4、表5所示。

表4 3批次紅景天口服液加速試驗(yàn)中紅景天甙的變化Table 4 The changes of Rhodiola glucoside in Accelerated testing of three batches of Rhodiola Oral Liquid

表5 3批次紅景天口服液加速試驗(yàn)中粗多糖的變化Table 5 The changes of Polysaccharide in Accelerated testing of three batches of Rhodiola Oral Liquid

紅景天口服液經(jīng)過3個(gè)月（38±1）℃和相對(duì)濕度75%的加速實(shí)驗(yàn)，其中功效成分紅景天甙的變化在4%之內(nèi)，粗多糖的變化在10%之內(nèi)，該變化范圍都在檢測(cè)方法的誤差范圍之內(nèi)。因此，經(jīng)過上述工藝制備出的保健口服液中的功效成分均有良好的穩(wěn)定性。

5 結(jié)論

以紅景天提取物為主要原料，輔以枸杞子提取物、西洋參提取物和牛磺酸，研制出紅景天保健口服液。經(jīng)衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)表明紅景天口服液功效成分指標(biāo)均符合要求，且于（38±1）℃、相對(duì)濕度75%環(huán)境存放3個(gè)月其功效成分指標(biāo)變化均符合要求；經(jīng)安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)表明，紅景天口服液安全無毒，急性經(jīng)口MTD均大于15 g/（kg·bw），屬實(shí)際無毒類，本產(chǎn)品無致突變作用；經(jīng)提高缺氧耐受力功能評(píng)價(jià)表明紅景天口服液具有提高缺氧耐受力的功能。

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