高效液相色譜法測(cè)定果醬中VC含量

王坤，王學(xué)楠，劉朝麾，張金鵬

（天津市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站第四站，天津 300462）

抗壞血酸（ascorbic acid），又稱 VC，是維持機(jī)體正常生理代謝的一種重要的有機(jī)化合物，具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，人體嚴(yán)重缺乏時(shí)會(huì)引起壞血病[1]。但是由于人體自身不能合成VC而必須從食物中攝取，近年來，其作為一種保健功能因子，已經(jīng)被廣泛添加于各種食品中，因此食品中VC含量的測(cè)定方法引起了廣泛的研究[2]。常用的測(cè)定方法有2，6－二氯靛酚滴定法、熒光光度法、2，4－二硝基苯阱比色法等[3]。由于VC具有還原性，容易受空氣、光、熱、氧化劑等因素的影響[4]，上述方法在靈敏度和準(zhǔn)確性方面都偏低。目前，對(duì)果醬中VC含量測(cè)定方法的研究比較少，為此，本文采用高效液相色譜法對(duì)果醬中VC含量進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟，操作簡(jiǎn)便、快速，具有良好的靈敏度和準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Agilent 1200 LC高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測(cè)器及色譜工作站：美國(guó)Agilent公司；XP 504電子分析天平：精確至0.0001 g，瑞士METTLER公司；GLD-136真空泵：ULVAC KIKO Inc；SB-5200型超聲波清洗器：上海必能信超聲有限公司；MILLI-QA超純水器：密里博公司；QL-901旋渦混合儀：海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1.1.2 試劑

甲醇（色譜純）：天津市康科德科技有限公司；冰乙酸（分析純）：天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心；抗壞血酸（純度99.0%）：購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜條件

Kromasil 100A C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm，天津市特納迪奧色譜技術(shù)有限公司）；流動(dòng)相為0.1%乙酸水溶液∶甲醇=95∶5（體積比）；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：246 nm；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：20μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

準(zhǔn)確稱取10 mg（精確到0.1 mg）VC標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL棕色容量瓶中，用水完全溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，當(dāng)天配制，需4℃冰箱保存。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

準(zhǔn)確吸取VC標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2.5 mL于25 mL棕色容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，得到濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液。分別吸取 0.20、0.50、1.00、2.50、5.00 mL的VC標(biāo)準(zhǔn)中間液于50 mL的棕色容量瓶中，用水稀釋并定容至刻度，配制成濃度為 0.4、1.0、2.0、5.0、10 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品處理

稱取約0.5 g試樣于50 mL容量瓶中，用水溶解稀釋，超聲振蕩5 min，用水定容至刻度。再吸取1 mL混合溶液于5 mL容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，0.45μm微孔濾膜過濾，供HPLC進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

考慮到VC的特性，在中性和弱酸性條件下較穩(wěn)定，本試驗(yàn)考察了甲醇-水、甲醇-0.1%乙酸水溶液作為流動(dòng)性體系，發(fā)現(xiàn)VC在酸性流動(dòng)相的條件下的保留效果和峰形較好，于是又對(duì)甲醇與0.1%乙酸水溶液的比例 5∶95，8∶92，10∶90 分別進(jìn)行比較。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著甲醇含量的增加，VC目標(biāo)峰的峰形更加尖銳對(duì)稱，但保留時(shí)間逐漸縮短，這不利于復(fù)雜基體與待測(cè)組分的有效分離，因此綜合考慮，選擇甲醇與0.1%乙酸水=5∶95為最終流動(dòng)性體系，此時(shí)各基質(zhì)組分能達(dá)到基本分離，保留時(shí)間為4.1 min。

2.2 樣品提取溶液的選擇

考慮到VC的水溶性和不穩(wěn)定性，試驗(yàn)選擇水、0.1%乙酸水和0.1%甲酸水溶液做樣品提取溶液，分別對(duì)添加濃度為0.8 mg/kg的果醬樣品進(jìn)行提取，3份平行，比較兩三種提取液的提取效果。試驗(yàn)表明，當(dāng)用0.1%乙酸水和0.1%甲酸水溶液做提取液時(shí)，樣品的添加回收率在112%～117%和110%～119%之間，存在明顯的基質(zhì)干擾作用。當(dāng)用水做樣品提取溶液時(shí)，樣品的添加回收率在105%～110%，基質(zhì)干擾作用明顯降低，因此本試驗(yàn)最終選擇水溶液作為果醬樣品的提取溶液。

2.3 樣品溶液稀釋倍數(shù)的選擇

本試驗(yàn)考察了不同稀釋體積對(duì)樣品回收率的影響。試驗(yàn)稱取0.5 g添加濃度為0.8 mg/kg的果醬樣品，3份平行，用水溶液稀釋定容至50 mL，直接進(jìn)樣，得到樣品的回收率為130%～139%。為降低基質(zhì)干擾效應(yīng)對(duì)回收率的影響，實(shí)驗(yàn)再分別吸取1、2、2.5 mL樣品稀釋液于5 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻后直接進(jìn)樣。經(jīng)儀器檢測(cè)，得到樣品的添加回收率在102%～105%、104%～114%和108%～115%之間，并且稀釋5倍的樣品溶液在儀器檢測(cè)中得到的色譜圖比稀釋2.5倍和2倍的基線穩(wěn)定，同時(shí)待測(cè)組分與基質(zhì)得到了良好的分離。因此，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，試驗(yàn)選擇將定容后的樣品溶液稀釋5倍后再進(jìn)行色譜分析。

2.4 方法性能指標(biāo)

2.4.1 線性范圍和方法的檢出限

在選定的色譜條件下，按照1.3.2中配制的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行檢測(cè)，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，所得線性方程為y=53.50753x-17.1079，相關(guān)系數(shù)r2=0.9984。結(jié)果表明，VC在0.4 mg/L～10 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以3倍基線噪音所對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)算，本方法的檢出限為30μg/L，具有很高的檢測(cè)靈敏度。

標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品中VC的色譜圖分別見圖1和圖2。

2.4.2 方法的精密度和準(zhǔn)確度

在果醬樣品種分別添加200.0、400.0、800.0 mg/kg三個(gè)濃度水平的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，按照1.4中的操作步驟平行測(cè)定，每個(gè)濃度重復(fù)5次，結(jié)果見表1，本法對(duì)果醬樣品中VC的平均加標(biāo)回收率為97.4%～107.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不大于2.54%，滿足食品檢測(cè)的要求。

圖2 果醬樣品色譜圖Fig.2 Chromatogram of Jam sample

表1 精密度及平均回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）Table 1 Results of precision and average recovery（n=5）

3 結(jié)論

該方法以水溶液作為提取溶液，超聲提取果醬樣品中的VC，操作簡(jiǎn)單快速，可避免樣品中VC被氧化和基質(zhì)成分的干擾，采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確，且靈敏度高，適合用于果醬樣品中VC的測(cè)定。

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[2]龐燕軍,陳靖,曹春英,等.高效液相色譜法測(cè)定食品和飲料中VC含量[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,18(5):555-556

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