血清轉化生長因子-β1在特發性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義

徐寶華 束 進 季海娟 康裕斌 朱紅英

江蘇省鎮江市第一人民醫院兒科，江蘇鎮江 212002

血清轉化生長因子-β1在特發性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義

徐寶華 束 進 季海娟 康裕斌 朱紅英

江蘇省鎮江市第一人民醫院兒科，江蘇鎮江 212002

目的 探討血清中轉化生長因子-β1（TGF-β1）在特發性血小板減少性紫癜患兒中的變化及臨床意義。 方法采用雙抗體夾心酶聯免疫（ELISA）定量測定方法檢測17例ITP患兒治療前后TGF-β1水平、血小板計數的變化，并與16例正常健康兒童血清TGF-β1、血小板計數水平進行比較。 結果 ITP患兒血清TGF-β1水平均顯著高于正常對照組（P<0.01），ITP患兒治療前血清TGF-β1水平均高于治療后（P<0.01）；血清TGF-β1高者，治療過程中血小板計數恢復較慢。相關分析顯示：TGF-β1水平與患者血小板計數呈負相關，與骨髓內巨核細胞數呈正相關（均P<0.01）。 結論 TGF-β1參與ITP的發病過程，其水平與血小板變化密切相關，可能與機體免疫機制異常有關。

特發性血小板減少性紫癜；轉化生長因子-β1；巨核細胞；兒童

特發性血小板減少性紫癜 （idiopathic thrombocytopeni purpura，ITP）是小兒時期常見的出血性疾病，目前認為自身免疫機制異常是其發病的主要因素，但在血小板生成調控方面有無異常改變目前報道較少，筆者對此進行相關研究，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

17例血小板減少性紫癜患兒來自于江蘇省鎮江市第一人民醫院兒科，為2010年1月～2012年5月門診及住院患兒，男8例，女9例，年齡為18個月～12歲，中位年齡7歲。所有病例均符合WHO診斷標準。16例健康體檢兒童作為正常對照，其中，男7例，女9例，年齡6個月～12歲，平均年齡7歲。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 采集特發性血小板減少性紫癜患兒開始治療前及治療4周后空腹外周靜脈血2 mL，以2 000 r/min的速度離心15 min，分離血清，-20℃冰箱保存，統一檢測TGF-β1，抗凝外周血用于血小板計數。對照組檢測血清TGF-β1、外周血血小板計數。治療前常規骨髓穿刺涂片檢查并進行巨核細胞計數。

1.2.2 人血清TGF-β1的定量測定 正常對照者于體檢日早清晨空腹靜脈血6 mL，形成血凝塊后以2 000 r/min離心20 min，分離血清，于-80℃冰箱保存。血清TGF-β1水平采用酶聯免疫吸附法 （ELISA）檢測，檢測試劑盒為美國Bender Medsystems公司產品，操作時嚴格按試劑盒說明進行。

1.2.3 血小板、骨髓涂片巨核細胞計數 血小板計數通過全血細胞分析儀計數。骨髓涂片進行伊紅染色，顯微鏡下進行巨核細胞計數并分類。

1.3 臨床治療方案

血小板減少性紫癜患兒主要采用潑尼松進行治療，部分輔以丙種球蛋白和 （或）濃縮血小板輸注。潑尼松用量為1.5 mg/（kg·d），分2次口服。 治療過程中，每周復查血小板計數2次，以了解患者血小板恢復所需時間。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 血小板減少性紫癜患者治療前、后各指標比較

采用配對資料t檢驗統計分析，各指標間均有顯著差異，具體結果見表1。

表1 ITP患者治療前、后各指標水平比較（±s）

表1 ITP患者治療前、后各指標水平比較（±s）

注：與ITP治療后及正常對照組比較，★P<0.01

組別 例數（n） TGF-β1（pg/L）血小板數（×109/L）骨髓巨核細胞數ITP治療前ITP治療后正常對照組17 17 16 5.93±1.35★4.02±1.26 2.04±0.44 27.76±6.62★167.52±50.71 166.81±40.68 151.35±58.94--

ITP患兒治療前及治療后與正常對照組TGF-β1三指標間差異有統計學意義（均P<0.01）。

2.2 各指標間的相關性

ITP患者治療前，TGF-β1水平與患者血小板數呈負相關，與骨髓內巨核細胞數（兒童骨髓巨核細胞數和分類正常值：總數為7～35）呈正相關（P<0.01）。血小板數和巨核細胞數呈負相關（P<0.01）。

2.3 ITP患者治療前血清TGF-β1水平與血小板恢復關系

以血小板數恢復到100×109/L為標準統計患者恢復時所需時間，10例在2周內血小板數恢復正常，7例患者在治療的第3、4周內恢復正常。對不同恢復時間患者TGF-β1水平比較分析，遲恢復組 TGF-β1分別為（5.22±1.02） pg/L，早恢復組 TGF-β1分別為（3.19±0.43）pg/L。 兩組 TGF-β1水平差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

ITP患者以血小板減少為特征，多表現為巨核細胞生成血小板障礙。巨核細胞增殖、分化、成熟后生成血小板過程中受組織、細胞及細胞因子等多因素調控，細胞因子對巨核細胞和血小板的調節有重要作用[1]。其中TPO、IL-3、IL-6是正性調控因子，而 TGF-β1、PF4、TNF 等是負性調控因子[2]。 TGF-β1通過與巨核細胞表面TGF-β1Ⅲ型受體結合并抑制巨核細胞核內有絲分裂和CFU-MK的形成參與血小板生成調節[3-4]，這種對血小板生成的負調控作用的發揮與TGF-β1相關的信號傳導途徑密切相關[5]。國內學者發現[6]：急性ITP組與慢性ITP組TGF-β1均明顯高于健康對照組，且慢性ITP組明顯高于急性ITP組。本結果中ITP患者血清TGF-β1水平明顯升高，且與患者血小板計數呈負相關，反映了其負調控特征。但其與骨髓內巨核細胞數呈正相關，這可能是由于其作用致巨核細胞分化成熟障礙所致，說明TGF-β1與該類患者發病密切相關。

對 ITP患者 PBMCs相關因子表達研究發現[7]：IL-2、IFN-γ與IL-4、IL-5的mRNA表達水平的比率明顯升高，且Th1/Th2比率與血小板計數呈負相關。在急性期患者，PBMCs中TGF-β1表達水平被明顯抑制。對ITP患者外周單個核細胞TGF-β1低表達變化研究發現[8]，血小板計數低時其TGF-β1低表達；血小板計數升高后TGF-β1表達增加。發現ITP患者血小板升高大于150×109/L患者Th3相關因子TGF-β1表達水平較血小板在 （50～150）×109/L者及健康對照組明顯升高[9]，說明ITP患者的轉歸與TGF-β1水平密切相關。本研究結果還顯示：隨著臨床糖皮質激素治療，血小板計數上升，患者的血清TGF-β1水平而下降。血小板遲恢復患者其血清TGF-β1水平較早恢復患者高，以上均說明ITP患者血清TGF-β1水平的變化與患者臨床治療的反應性密切相關。

綜上所述，ITP患者存在TGF-β1表達異常，且TGF-β1表達水平與患者血小板恢復關系密切，與巨核細胞的分化、成熟有一定關系，可能在巨核細胞分化及血小板的生成中發揮調節作用，進一步的研究對闡明ITP的發病機制，尤其是難治性ITP的治療有重要價值。

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The change and clinical significance of serum transforming growth factorβ1 in young idiopathic thrombocytopenic purpura patients

XU Baohua SHU Jin JI Haijuan KANG Yubin ZHU Hongying
Department of Pediatrics,Zhenjiang First People′s Hospital of Jiangsu Province,Zhenjiang 212002,China

Objective To discuss the change and clinical significance of serum transforming growth factor-beta1(TGF-β1)in young idiopathic thrombocytopenic purpura patients.Methods The levels of TGF-β1 and the the counts of platelet were quantitative detected with double antibody sandwich enzyme linked immune(ELISA)for 17 cases with ITP before and after treatment,and compared with 16 cases of normal healthy children.Results In children with ITP,the levels of serum TGF-β1 were higher than the normal control group significantly (P<0.01).The levels of serum TGF-β1 were higher in cases before treatment than after treatment(P<0.01).The counts of platelet recovery is relative slowly through treatment process in those cases with higher levels of serum TGF-β1.Correlation analysis showed that there were negative correlation between the counts of platelet and the level of TGF-β1 (P<0.01)and there were positive correlation between the counts of megakaryocytes and the the levels of TGF-β1 (P<0.01).Conclusion TGF-β1 participated in the pathogenesis of ITP process,and there are closely relationship between its levels and the counts of platelet.The reason may be that the body′s immune mechanism is abnormal.

Idiopathic thrombocytopenic purpura;TGF-β1;Megakaryocyte;Children

R725.5

A

1674-4721（2012）11（c）-0054-02

2012-08-31 本文編輯：林利利）