加拿利海棗葉斑病抑菌試驗

馮福娟，佘德松

（麗水職業技術學院，浙江 麗水 323000）

加拿利海棗（Phoenix canariensis）原產于非洲西岸的加拿利島，其樹形張開呈半圓形，遠觀如同撐開了的羅傘，富有熱帶風情，是國際著名的景觀樹種。該樹種于20世紀80年代開始引入我國，現在長江流域及以南地區廣泛應用于園林綠化，以烘托熱帶韻味。但由于生長環境的變化和管理方面的原因，許多栽種的加拿利海棗出現了生長不良的現象，葉斑病就是其中普遍而且嚴重的一種現象。加拿利海棗葉斑病主要危害葉片，其癥狀為葉局部變淡黃至棕褐色，葉尖病斑多，形狀大小不一[1]。有些地區由于葉斑病的危害，導致葉片枯死，甚至植株死亡，嚴重影響綠化效果。苗期為害更重，嚴重影響了種苗的商品價格，對花農造成嚴重的經濟損失。為了提高加拿利海棗葉斑病的防治效果，我們開展了對加拿利海棗葉斑病病原的分離培養和農藥抑菌試驗。

1 材料與方法

1.1 病原菌的分離培養

1.1.1 材料選取 采集麗水職業技術學院校園綠化帶的加拿利海棗葉斑病的新鮮病葉，帶回室內作分離材料。

1.1.2 培養基配制 病菌分離培養所用培養基為馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基（PSA）。制作方法：將馬鈴薯洗凈去皮切塊稱取200 g，將其切成正方形小塊，放入鋁鍋中加水1 000 mL煮沸20 ～ 30 min，直至馬鈴薯酥而不爛，用紗布過濾，定容至1 000 mL，加入瓊脂18 g、蔗糖20 g，加熱并用玻璃棒不停攪拌至瓊脂完全溶化后分裝到錐形瓶中，封口包裝，高壓蒸汽滅菌后備用。

1.1.3 病原菌的分離與純化 病原菌分離采用植物組織分離法。將加拿利海棗葉斑病病葉用清水洗凈，用刀片從加拿利海棗葉斑病典型病斑的病健交界處切取5 mm×5 mm的小組織塊若干。在消毒后的超凈工作臺上無菌操作制作培養基平板。將病組織塊先用70%酒精浸2 ～ 3 s，再用0.1%升汞消毒1 min，然后用滅菌水沖洗3次洗凈藥液。用鑷子將消毒過的組織塊移接到平板培養基上，每皿放5塊呈梅花狀排列。在培養皿上貼上標簽，然后倒置于26℃的培養箱中培養。菌落長成后，用接種針或環挑取分離培養出的菌落邊緣的菌絲，轉接到試管斜面培養基中，置于26℃的培養箱中培養得到純菌種。

1.1.4 病原菌的鑒定 觀察菌落菌絲特征，并將純化得到病菌制成臨時玻片標本，置于顯微鏡下觀察鏡檢其形態，依據菌落、菌絲和孢子特征，對照有關文獻確定病原菌種類。

1.2 病原菌的農藥抑菌試驗

1.2.1 供試農藥及濃度 本試驗選用了6種農藥。80%代森錳鋅可濕性粉劑，鄭州志信農化有限公司生產；10%苯醚甲環唑水分散粒劑，績溪農華生物科技有限公司生產；40%百菌清懸浮劑，東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產；450 g/L咪鮮胺水乳劑，陜西恒田化工有限公司生產；80%乙蒜素乳油，南陽臥龍農藥廠生產；70%甲基硫菌靈可濕性粉劑，北京達世豐生物科技有限公司生產。

供試農藥濃度以說明書上的有效使用濃度為依據，每種農藥選3種濃度，代森錳鋅、百菌清、甲基硫菌靈、乙蒜素分別配制了800、900和1 000倍液；苯醚甲環唑和咪鮮胺分別配制了1 000、1 500、1 800倍液。

1.2.2 試驗方法 采用水平擴散法中的濾紙片法[2]，并作了一定改進。操作方法如下：

1.2.2.1 菌液制備 將培養好的有大量孢子的病原菌移入帶玻璃珠已滅菌的無菌水中，振蕩搖勻，高倍鏡下鏡檢每視野20 ～ 30個孢子為度。

1.2.2.2 PSA培養基平板制備 在滅菌培養皿中倒入15 mL左右的PSA培養基，等冷卻凝固后備用。

1.2.2.3 抑菌試驗 將制備的菌懸液取 1滴，移入培養平板表面，用玻璃涂捧涂布均勻；將圓濾紙片浸入農藥藥液中1 min，再將圓濾紙片移入帶菌平板中，每培養皿移入3片，均勻排列。每種農藥每個濃度3個重復，以清水對照，貼上標簽，將制好的培養皿倒置恒溫箱26℃培養，隨時觀察抑菌圈大小及變化。

1.2.2.4 抑菌圈的測量 以通過圓濾紙片中心的兩次相互垂直的抑菌圈的平均值作為該藥紙片的抑菌直徑。將同一個培養皿內的3個藥紙片的抑菌直徑作為該培養皿的平均抑菌圈直徑。

2 結果與分析

2.1 加拿利海棗葉斑病病原

分離培養后3 d出現菌落，菌落平展，表面長絨毛狀，菌絲白色，邊緣整齊，培養基淡黃色。第5天菌落中心出現黑色液滴，為病菌分生孢子堆，聚成黑色焦油狀。培養過程，未發現有性階段。

鏡檢特征：菌絲有隔，分枝多，無色。分生孢子大，紡錘形或梭形，直，極少彎曲；中間有4個分隔，多數5個細胞，中部3個褐色，兩端細胞無色；頂端有3根附屬絲，少數2根或4根[3]（圖1）

根據以上特征鑒定其為半知菌亞門、黑盤孢目、擬盤多毛孢屬的掌狀擬盤多毛孢（Pestalotiosis palmarum）。

2.2 抑菌試驗結果

抑菌試驗在培養36 h后，出現明顯的抑菌圈，抑菌圈大小見表1。

圖1 病原菌分生孢子的形態特征Figure1 Characteristic of conidia

從表1可以看出，選擇的6種農藥對加拿利海棗葉斑病菌都有較好的抑制作用。對菌絲生長的抑制能力由強到弱依次為10%苯醚甲環唑水分散粒劑、450 g/L咪鮮銨水乳劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑、40%百菌清懸浮劑、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油，其EC50依次為0.167 2、0.283 2、2.946 4、4.138 9、5.978 6、9.2409 mg/L。

表1 6種殺菌劑抑制菌絲生長毒力測定結果Table1 The toxicity test of 6 fungicides against the mycelia

3 小結與討論

用加拿利海棗葉斑病新鮮病葉經分離培養、純化、鑒定，其病原為半知菌亞門、黑盤孢目、擬盤多毛孢屬的掌狀擬盤多毛孢（Pestalotiosis palmarum）。6種殺菌劑從EC50上看，抑菌效果為10%苯醚甲環唑水分散粒劑＞ 450 g/L咪鮮銨水乳劑 ＞ 80%代森錳鋅可濕性粉劑 ＞ 40%百菌清懸浮劑 ＞ 70%甲基硫菌靈可濕性粉劑 ＞ 80%乙蒜素乳油，最小值為0.167 2 mg/L，最高值為9.240 9 mg/L。因此，6種殺菌劑生產上都可用于防治加拿利海棗葉斑病。

[1]金亮，丁印龍.廈門地區主要棕櫚植物病害種類普查鑒定及其防治[J].熱帶農業科學，2000（4）：12－19.

[2]丁愛云.植物保護學實驗[M].北京：高等教育出版社，2004：83.

[3]陸家云.植物病原真菌學[M].北京：中國農業出版社，2001.：476.