不同消毒劑的殺菌效果試驗(yàn)觀察

邱 梅，郝智慧，沈 巍，王英俊，劉元元，龐云露

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院，山東 青島266111；2.青島康地恩藥業(yè)股份有限公司，山東 青島266061）

目前，畜禽業(yè)應(yīng)用較多的是化學(xué)消毒劑，主要分為鹵素類(lèi)（氯制劑、碘制劑、溴制劑）、醛類(lèi)、酚類(lèi)、醇類(lèi)、氧化劑類(lèi)、表面活性劑類(lèi)、酸堿類(lèi)等。其作用機(jī)理就是改變微生物賴以生存的環(huán)境，致使微生物的內(nèi)外結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，主要代謝機(jī)能出現(xiàn)障礙，生長(zhǎng)發(fā)育受阻，從而喪失活性，失去致病力［1］。其中，過(guò)氧化物類(lèi)消毒劑在畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)用較多，效果突出。

過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物是一種新型過(guò)氧化物類(lèi)消毒劑，具有很強(qiáng)的氧化能力，其水溶液接近中性，比較適合各種水體消毒，溶解后產(chǎn)生各種高活性小分子自由基、活性氧等衍生物［2］，在水體中很少會(huì)形成有毒副產(chǎn)物［3］。因其具有非常強(qiáng)大而有效的非氯氧化能力，使用和處理過(guò)程符合安全和環(huán)保要求，因而被廣泛的應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和消費(fèi)領(lǐng)域。通常狀態(tài)下比較穩(wěn)定，當(dāng)溫度高于65℃時(shí)易發(fā)生分解反應(yīng)，比較活潑，易于參與多種化學(xué)反應(yīng)，可作為氧化劑、漂白劑、催化劑、消毒劑、蝕刻劑等。

新型消毒劑－衛(wèi)克，其主要成分為過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物、氯化鈉等。為了解其殺菌性能，以杜邦衛(wèi)可消毒劑為對(duì)照，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室殺菌效果觀察。

1 材料與方法

1.1 藥物 試驗(yàn)藥物：衛(wèi)克（含量25%，批號(hào)：20110312，由青島康地恩藥業(yè)股份有限公司提供）；對(duì)照藥物：衛(wèi)可（含量25%，批號(hào)：VKNS100704，美國(guó)杜邦）。

1.2 菌株 大腸桿菌，為本實(shí)驗(yàn)室臨床分離菌株。

1.3 消毒劑溶液的配制 衛(wèi)克消毒劑：按推薦使用方法，用硬水配制成濃度為1∶200、1∶400、1∶600、1∶800的試驗(yàn)用溶液；衛(wèi)可消毒劑：按推薦使用量，用硬水配制成1∶400、1∶600、1∶800的試驗(yàn)用溶液。

1.4 方法

1.4.1 懸液定量殺菌試驗(yàn)［3］取消毒試驗(yàn)用無(wú)菌小瓶，先加入0.5mL試驗(yàn)用菌懸液，再加入0.5 mL有機(jī)干擾物質(zhì)（20%牛血清白蛋白），混勻，置20℃±1℃水浴中2、5、10、30min后，用無(wú)菌吸管吸取上述濃度消毒液（1.3項(xiàng)下配制的不同濃度消毒液）4.0mL注入其中，迅速混勻并立即記時(shí)。待試驗(yàn)菌與消毒劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間，分別吸取0.5mL試驗(yàn)菌與消毒劑混合液加于4.5mL經(jīng)滅菌的中和劑中，混勻。各管試驗(yàn)菌與消毒劑混合液經(jīng)加中和劑作用10min后，分別吸取0.2mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿即可。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用稀釋液代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。

所有試驗(yàn)樣本均在37℃溫箱中培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)24h觀察最終結(jié)果。

1.4.2 有機(jī)物干擾殺菌試驗(yàn) 采用懸液定量殺菌法，在20℃±1℃水浴中，不同濃度消毒劑溶液（衛(wèi)克：1∶200、1∶400、1∶600、1∶800，衛(wèi)可：1∶400）分別對(duì)含0%、25%、50%滅菌牛奶的菌液作用10、30min，觀察、計(jì)算其殺菌效果。

1.4.3 溫度對(duì)殺菌效果影響試驗(yàn) 采用懸液定量殺菌法，不同濃度消毒劑溶液（衛(wèi)克：1∶200、1∶400、1∶600、1∶800，衛(wèi)可：1∶400）在不同溫度（13℃±0.3℃、22℃±2℃、30℃±2℃）水浴中對(duì)菌液作用10、30min，觀察、計(jì)算其殺菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 懸液定量殺菌結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 殺菌試驗(yàn)結(jié)果

3次綜合試驗(yàn)結(jié)果由表1可知，衛(wèi)克1∶200稀釋液分別作用2、5、10、30min均可將菌全部殺滅，達(dá)100.0%殺菌率；1∶400稀釋液作用10、30min可全部殺滅菌液；1∶600和1∶800稀釋液殺菌效果較差。衛(wèi)可1∶400作用10、30min可達(dá)100.0%殺菌率。通過(guò)1∶600和1∶800稀釋液的殺菌效果可以看出，衛(wèi)克和衛(wèi)可殺菌效果基本一致。

2.2 有機(jī)物干擾殺菌結(jié)果 見(jiàn)表2。

綜合3次試驗(yàn)結(jié)果由表2可知，衛(wèi)克1∶200稀釋液作用10、30min對(duì)不同濃度有機(jī)物干擾菌懸液均能全部殺滅，1∶400稀釋液作用30min也能達(dá)到100.0%的殺菌率。各消毒劑稀釋液對(duì)含25%干擾物的菌懸液消毒效果比含0%和50%的差。

2.3 溫度對(duì)殺菌效果的影響試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表3。

表3結(jié)果顯示，衛(wèi)克消毒劑1∶200稀釋度作用10、30min在高中低溫度下均能達(dá)到100.0%的殺菌率；1∶400作用30min均能全部殺滅；1∶600稀釋液在30℃±2℃下作用30min可達(dá)100.0%的殺菌率。衛(wèi)可1∶400稀釋液在22℃±2℃和30℃±2℃下作用10、30min殺菌率均為100.0%。兩種消毒劑不同作用濃度在22℃±2℃和30℃±2℃下的殺菌效果均好于13℃±0.3℃。

表2 有機(jī)物干擾殺菌試驗(yàn)結(jié)果

表3 不同溫度對(duì)消毒劑殺菌效果影響

3 討論與結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)隨著工業(yè)研制方法的改進(jìn)，過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽的應(yīng)用逐漸受到人們的關(guān)注。過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽分解后的產(chǎn)物硫酸鹽可通過(guò)人及動(dòng)物的肝臟及泌尿系統(tǒng)排出體外，對(duì)環(huán)境無(wú)任何有害殘留。與過(guò)氧化氫、過(guò)氧乙酸等消毒劑相比，過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽晶體穩(wěn)定，易于保存和運(yùn)輸，在任何使用場(chǎng)合均可現(xiàn)場(chǎng)配制，且對(duì)水質(zhì)無(wú)嚴(yán)格要求［4］。

其作用機(jī)制：與靶物接觸后釋放高活性過(guò)氧化自由基，進(jìn)而破壞微生物膜的通透性，使蛋白質(zhì)變性，酶失活，DNA和RNA結(jié)構(gòu)斷裂，同時(shí)生成的硫酸鹽具有協(xié)助滲透作用，可作為皮膚消毒及治療的輔助藥劑。過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽不僅可以通過(guò)其氧化作用殺滅微生物，而且可以清除水中的有機(jī)物。

陽(yáng)艷林等（2008）［5］研究顯示，以含過(guò)硫酸氫鉀1 250mg／L的該復(fù)合消毒劑溶液，對(duì)溶血性鏈球菌和多殺性巴桿菌作用2.5min，殺滅對(duì)數(shù)值＞5.00。用含過(guò)硫酸氫鉀1 250mg／L該消毒液，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作用5min，殺滅對(duì)數(shù)值＞5.00。用含過(guò)硫酸氫鉀835mg／L該消毒液作用15min，對(duì)大腸桿菌可達(dá)到完全殺滅。用含過(guò)硫酸氫鉀1 000 mg／L該消毒劑溶液作擦拭消毒并作用10min，對(duì)模擬現(xiàn)場(chǎng)物體表面上人工污染的大腸桿菌殺滅對(duì)數(shù)值＞3.0。將過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合消毒劑密封儲(chǔ)存于37℃60d，其有效成分含量下降率為6.09%。

張躍華等（2005）［2］研究結(jié)果，其濃度為10～60 mg／L過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽對(duì)不同種類(lèi)微生物懸液的作用5min，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的殺滅率均為100%，對(duì)白色念珠菌的殺滅率大于99.5%，此作用條件下未觀察到其對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅作用；160mg／L過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽作用30 min，未見(jiàn)對(duì)乙肝病毒表面抗原的滅活作用。在一定作用條件下過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽對(duì)細(xì)菌繁殖體有良好的殺滅作用，對(duì)真菌也有一定的殺滅作用，但未見(jiàn)其對(duì)細(xì)菌芽孢及乙肝病毒表面抗原的滅活作用。

嚴(yán)曉玲（2007）［6］研究顯示，5%過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽水溶液25℃時(shí)有良好的殺菌作用，殺滅細(xì)菌的繁殖體需2min，作用15min可將細(xì)菌芽孢全部殺滅。作用30min可將HBsAg完全滅活。

研究結(jié)果表明，衛(wèi)克消毒劑1∶200（相當(dāng)于1 250mg／L）稀釋液在室溫下作用2min即可將細(xì)菌全部殺滅，殺菌效果不受有機(jī)物和溫度影響；1∶400（相當(dāng)于625mg／L）稀釋液在室溫下作用10min殺菌率可達(dá)100.0%，30min殺菌效果不受有機(jī)物和溫度影響；1∶600（相當(dāng)于約416.7mg／L）稀釋液在室溫下作用30min殺菌率達(dá)99.8%，30℃±2℃下作用30min可達(dá)100.0%的殺菌率。同濃度（1 250 mg／L）下殺菌時(shí)間比陽(yáng)艷林等（2008）的研究短。本產(chǎn)品具有很好的殺菌效果，高濃度消毒時(shí)不受有機(jī)物和環(huán)境溫度的影響，低濃度使用時(shí)可通過(guò)提高其作用時(shí)間和環(huán)境溫度來(lái)提高其消毒效果。

［1］馬賢坤，車(chē)娟娟.消毒滅源 健康養(yǎng)殖［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2007（5）：70－72.

［2］張躍華，趙永勛.過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽消毒作用實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，9（1）：40.

［3］Virender S K .Potassiumfemate（VI）：an environmentally friendly oxidant［J］.Advances in Environmental Reserch，2002，2：143.

［4］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，消毒技術(shù)規(guī)范（2002版）［M］.2002.

［5］陽(yáng)艷林，于洪忠，徐輝.過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合消毒劑殺菌效果觀察［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2008，25（2）：150－152.

［6］嚴(yán)曉玲.消毒劑過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽性能的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，11（4）：631，679.