快速融化離心法與虹吸法制備冷沉淀的質量評價

蔣燕，陳寶葵，林敏詩

(佛山市順德區中心血站，廣東佛山528300)

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在1～5℃條件下不溶解的白色沉淀物，主要含有第Ⅷ因子、纖維蛋白原、血管性血友病因子等有效成分。冷沉淀制劑中的第Ⅷ因子、纖維蛋白原含量是直接影響治療效果的重要因素，且與制備過程密切相關。筆者對虹吸法和快速融化離心法制備冷沉淀的質量與制備效率進行了比較，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 數字控制水浴式血漿融化箱(CT-4T.6C型)，大容量冷凍離心機(日立 CR-7)，熱合機(日本泰爾茂)，電子天平(G＆G)，四通道半自動血凝儀(歐家隆Coag-A-Mate.XM)。

1.1.2 耗材與試劑 乏Ⅷ因子血漿，活化劑，氯化鈣溶液，緩沖液，標準人血漿，上述整套試劑均為德國Dade Behring Marburg公司提供。400 ml五聯采血袋(四川南格爾)。

1.1.3 原料血漿 全血采集后6 h內經2次離心，分離出新鮮液體血漿，放入－50℃速凍機速凍后，置入－30℃以下的低溫冰箱保存［1］。

1.2 方法

1.2.1 取樣 取原料血漿420袋，分為2組，每組有200 ml原料血漿90袋，100 ml原料血漿120袋，4名成分制備人員連續2日分別采用虹吸法與快速融化離心法制備冷沉淀。每組實驗均按照30袋200 ml原料血漿、40袋100 ml原料血漿分批浸沒于水浴箱進行融化。

1.2.2 虹吸法制備冷沉淀 將原料血漿浸沒于2～6℃血漿融化箱中融化，另一空轉移袋懸掛于水浴箱外。新鮮冰凍血漿融化時，上清血漿隨時被虹吸入轉移袋內，冷沉淀留在原袋中。待融化至僅有15～30 ml冷沉淀和血漿時，將冷沉淀袋和冷上清袋之間的導管熱合分離［2］。

1.2.3 快速融化離心法制備冷沉淀 將原料血漿浸沒于2～6℃血漿融化箱中完全融化時，批量取出所有血漿于0℃ 2 000×g離心10 min。離心后用分離夾分離袋底沉淀的冷沉淀與血漿，熱合分離冷沉淀袋和冷上清袋之間的導管［2］。

1.2.4 Ⅷ 因子和纖維蛋白原的檢測 每組隨機抽取100 ml原料新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀30袋，嚴格按照血凝儀和試劑操作說明書進行檢測。

1.3 質量標準［3］

100 ml新鮮冰凍血漿制備冷沉淀:(25±5)ml/袋，Ⅷ因子含量≥40 IU，纖維蛋白原含量≥75 mg，符合質量標準者為合格。

1.4 統計方法

采用SPSS10.0統計軟件，兩總體方差齊同的成組t檢驗和χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ 因子和纖維蛋白原含量比較

快速融化離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量為(70.9±8.3)IU，合格率為 100%，高于虹吸法制備冷沉淀的Ⅷ因子含量(45.9±7.6)IU與合格率90%，差異有統計學意義;兩種方法制備的纖維蛋白原含量及合格率差異亦有統計學意義。見表1。

表1 兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原的含量與合格率比較 n=30

2.2 兩種制備方法工作效率比較

見表2。4名成分制備人員采用快速融化離心法制備300 U冷沉淀較虹吸法快1個小時。即按照一天6.5小時工作時間計算，4名人員采用快速融化離心法可以比虹吸法多制備40 U冷沉淀。

表2 兩種方法制備冷沉淀的工作效率比較

3 討論

本次實驗結果顯示，快速融化離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量均較虹吸法高，前者制備的冷沉淀合格率亦較后者高。與文獻報道結果一致［4，5］。分析原因:虹吸法在原料新鮮冰凍血漿融化過程中，部分冷沉淀不能形成大的凝聚團塊或絮狀，無法聚集吸附在中央未融化的冰碴上或袋壁上，有部分散在的細小冷沉淀由于虹吸作用直接流到另一冷上清轉移空袋中，因此冷沉淀袋內的冷沉淀減少，降低了Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量。同時，由于虹吸法制備冷沉淀時，原料血漿融化的速度不一致，部分血漿融化為少量冰碴的時間較為集中，工作人員來不及取出部分冷沉淀袋，致使袋內的少量冰碴繼續融化，甚至完全融化，冷沉淀直接流入冷上清的轉移袋內，導致冷沉淀量減少，Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量降低，致使冷沉淀合格率降低。而快速融化離心法制備冷沉淀時，原料血漿為全部融化后批量0℃強離心，使冷沉淀凝聚黏附于袋底或袋壁，冷沉淀流失量少，回收率高，因此Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量較高，冷沉淀合格率亦較高。

冷沉淀制備的工作效率直接影響臨床的供應量。本次實驗顯示，快速融化離心法的制備效率高于虹吸法。分析原因:融化原料血漿過程中，虹吸法融化剩余適量冰碴的速度不一致，融化過程需要工作人員密切觀察袋內的冰碴量以確保血液質量;此種制備方法為非批量操作，降低了制備效率。而快速融化離心法需要完全融化原料血漿，工作人員可充分利用融化等待時間，完成上一批冷沉淀的離心分離熱合與貼簽速凍工作;整個制備過程均為批量操作，提高了制備效率。應用快速融化離心法，科室可以根據工作人員數量優化工作流程，進一步提高制備效率。實際工作中我們發現，200 ml原料血漿與100 ml原料血漿交替融化制備可充分利用原料血漿融化等待的時間，冷沉淀制備效率較高。

Ⅷ因子是不穩定因子，隨著時間的延長或制備期間溫度的升高，Ⅷ因子活性會降低［6］。因此，制備過程應盡快分離速凍新鮮冰凍原料血漿;原料血漿融化過程應嚴格控制恒溫冰水浴;冷沉淀分離貼簽速凍時間應盡量縮短，嚴格控制整個冷鏈過程，確保冷沉淀的質量。

綜上所述，快速融化離心法制備冷沉淀具有優質高效的特點，值得推廣使用。

［1］王培華.輸血技術學［M］.北京:人民衛生出版社，2002:33－34.

［2］高峰.臨床輸血與檢驗［M］.北京:人民衛生出版社，2003:140.

［3］GB18469—2001，全血及成分血質量要求［S］.

［4］史艾娟，譚明科.虹吸法與離心法制備冷沉淀的質量對比［J］.中國當代醫藥，2010，17(13):149 －150.

［5］楊玉峰，黃春萍，趙云，等.兩種制備冷沉淀方法的比較［J］.實用醫技雜志，2007，14(8):1007 －1008.

［6］苗翠英，李蓬，孫波，等.新鮮冰凍血漿中FⅧ:C檢測結果分析［J］.中國輸血雜志，2002，15(1):34.