非典型新城疫的綜合診斷試驗

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非典型新城疫的綜合診斷試驗

陶新萍 （山東省昌樂縣紅河鎮畜牧獸醫站 262411） 劉恩昌 （山東省昌樂縣畜牧獸醫局）

本試驗對某蛋雞場疑似患非典型新城疫的雞進行了病理學、血清學及病原學綜合診斷。診斷結果表明：雞群表現有呼吸道癥狀、消化道癥狀及產蛋性能下降的非典型新城疫的基本癥狀；剖檢病變胃腸道及呼吸道出血性卡他性炎癥，卵泡充血、出血，輸卵管萎縮等均符合新城疫的病變特征；病毒性腦炎、淋巴組織壞死是具有證病意義的新城疫組織病變；結合發病前后HI抗體檢測結果及新城疫的病毒分離鑒定，綜合判定該雞群所患疾病為非典型新城疫。

非典型新城疫；蛋雞；診斷；病毒分離

新城疫(Newcastle disease，ND)也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由新城疫病毒(NDV)引起的禽類的一種急性、高度接觸性傳染病[1]。非典型性新城疫一般發生于用過新城疫疫苗免疫過不久的雞群，一般不呈爆發性流行，多散發，發病率在5%~10%左右。發病后臨床癥狀不明顯，有輕微的呼吸道癥狀，大群精神正常，采食量變化不大，糞便變化不明顯，死亡率不高，產蛋雞出現產蛋量下降，產軟殼蛋等。剖檢病變不典型，只見病雞上呼吸道有卡他性炎癥，消化道淋巴濾泡聚集處黏膜充血、腫脹。產蛋雞除上述病變外，卵泡萎縮、變形、液化，嚴重者卵泡破裂，卵黃散落腹腔，引起卵黃性腹膜炎[2]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 發病雞群 雞群為21周齡開產不久的蛋雞。病初雞群采食量下降，有輕度呼吸道癥狀，咳嗽，個別甩頭，有些雞拉綠色稀糞。產蛋下降，每天下降2%~5%，蛋的形狀和質量稍有變化，顏色略淡，軟殼蛋、薄殼蛋增多。持續10幾天后開始恢復，但恢復不到原來的水平。后期死亡率開始上升，死雞多因繼發大腸桿菌或支原體感染。

1.1.2 試驗動物 該雞群病死雞及癥狀明顯的雞；9日齡SPF雞胚購自購自山東省家禽研究所。

1.1.3 主要儀器 LDZ4-0.8自動平衡微量離心機，冰箱，凈化工作臺，96孔“V”型血凝板，PW-30精密培養箱，8道可調移液器，冰凍切片機。

1.2 方法

1.2.1 病理剖檢 取病死雞和癥狀明顯的雞按常規方法進行剖檢。尤其觀察腦、氣管、肺、胰腺、心臟、腺胃、肌胃病變，以及腸道變化。然后無菌取病料。

1.2.2 組織病理學檢查 在剖檢觀察后取病雞腦、氣管、肺、脾、腸道等組織器官，10%福爾馬林固定，常規石蠟切片、HE染色，光鏡下觀察。

1.2.3 血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI) 從發病雞場隨機抽取16只雞，采血，靜置。然后4000r/min，離心5min，提取血清。然后做血凝和血凝抑制實驗[3]。

1.2.4 病毒分離與鑒定 無菌采集10只疑似ND病死雞的腦、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟等組織，剪碎、置于消毒的勻漿器內，加入滅菌的PBS緩沖液研磨成1:5的懸液，每毫升懸液加入雙抗(青霉素和鏈霉素)各2000IU，凍融3次，5000r/min離心10min，取上清液經細菌濾器過濾，置4℃冰箱作用8h后，-20℃保存備用。取9日齡的SPF雞胚，通過照蛋標出雞胚和氣室部位，然后分別用5%碘酊和75%酒精消毒氣室，干燥后用無菌的打孔器打孔。然后將處理好的樣品的上清液，接種于9日齡SPF雞胚尿囊腔中，每個樣品做兩個平行試驗，共接種20枚雞胚，0.1ml/胚，置37℃溫箱中孵育。棄去24h內死亡胚，每6h照蛋一次，及時取出死亡雞胚，置4℃保存。有明顯病變者無菌收集雞胚尿囊液，作細菌檢樣后放-20℃保存備用。觀察雞胚的病理變化。檢測尿囊液HA滴度，若能凝集雞紅細胞，則進行HI試驗。經72h不死亡者，取尿囊液繼續盲傳三代不能致死雞胚方可判為陰性[3]。

2 結果

2.1 病理變化

2.1.1 剖檢病變 喉頭、氣管明顯充血出血，氣管黏膜有多量漿液性滲出液。腺胃變軟、變薄，腺胃乳頭間有出血。小腸腸壁變薄，腸壁毛細血管充血或出血，與周圍界限明顯。小腸上有數個大小不等的黃色泡狀腸段。剪開該腸斷，可見腸壁呈橘黃色，缺乏彈性，腸黏膜脫落。腸管淋巴濾泡腫脹，盲腸扁桃體出血腫大，泄殖腔黏膜有出血點。卵泡充血、出血、或液化破裂，輸卵管萎縮。后期死亡的病雞常表現卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、心包炎等繼發病變。

2.1.2 組織病理學變化 病雞腦膜充血、淋巴細胞浸潤，腦血管充血，血管周圍淋巴細胞袖套樣浸潤。脾臟淋巴細胞廣泛性壞死、崩解。肺淤血，二級支氣管內有大量紅細胞。

2.2 血清學檢查

雞群發病后進行的HI試驗結果見表1。由于該雞場發病前在實驗室做過定期抗體檢測，檢測結果見表2。比較雞群發病前后HI抗體效價的變化發現，發病后2周左右雞群HI抗體效價均顯著升高，且離散度變大。

表1 雞群發病后新城疫抗體水平檢測結果 (log2)

表2 雞群發病前新城疫抗體水平檢測結果 (log2)

2.3 病毒分離鑒定

雞胚接種樣品上清液后，10份樣品中有6份樣品接種的雞胚在48h內死亡，死亡胚體全身彌漫性出血，尤其是胚的頭部、頸部和腳爪出血嚴重，形成紫紅色出血斑，肝臟點狀出血斑和壞死灶。收取尿囊液，細菌檢驗為無菌。對采集的尿囊液進行的血凝試驗(HA)和血凝抑制實驗(HI)。HA試驗有凝集紅細胞特性，血凝價達8個滴度，并且均被ND陽性血清所抑制，而不能被禽流感H9、H5陽性血清所抑制。有2份樣品接種的雞胚在60h內死亡，胚體出血不明顯，收取尿囊液做HA實驗，有凝集紅細胞特性，凝集效價為7，且該尿囊液的血凝特性可被抗ND陽性血清所抑制，而不能被禽流感H9、H5陽性血清所抑制。有2份樣品，經72h不能致死雞胚，收取尿囊液做HA實驗，無凝集紅細胞特性，取該尿囊液盲傳3代均不能致死雞胚。

3 討論

雞群的ND抗體水平已顯著升高，抗體水平高，平均抗體水平為10.56，1/3的雞只超過11以上且高低不均、離散度大。可懷疑曾被ND野毒感染。8份病料經接種雞胚分離到新城疫強毒，可直接判定新城疫野毒感染；2份病料盲傳3代均不能致死雞胚，有可能未感染新城疫野毒，也有可能該雞群感染病毒時間較長，雞群抗體水平高，帶毒量少。結合傳統臨床診斷看到的非典型新城疫的典型病變與兩種實驗室診斷得到的結果可以很有把握地判定該雞群患非典型新城疫。

一般新城疫的診斷只是經過臨床診斷和病理剖檢就判斷雞群是否患新城疫。但這只能初步診斷，即使有經驗的獸醫也可能會誤判。這樣會給養殖場帶來很大的損失。何況非典型新城疫癥狀不典型，更增加了診斷出錯的風險。而本試驗結合實驗室診斷，檢測出病雞體內含有新城疫病毒，就可下定論。另外，HA和HI特異性好，經濟適用，是實驗室最常用的抗原抗體檢測方法，而且操作步驟簡單，操作人員只要經過一段時間訓練后方能進行操作。因此，大型的養殖場可以利用血凝和血凝抑制試驗檢測免疫效果，指導生產實踐，增強雞群免疫力；也可用于禽病診斷。這樣可以給養殖場帶來更大的收益。但HI抗體測定會受許多因素的影響，同一份血清在不同實驗室的測定結果往往不同，為獲得準確結果，一方面操作人員嚴格按要求規范操作，每次均進行重復試驗，另一方面設立標準陰、陽性血清作對照，從而減少測定誤差。

在本病例中雞群臨床表現有呼吸道癥狀、消化道癥狀及產蛋性能下降的非典型新城疫的基本癥狀。剖檢病變小腸腸壁變薄，腸壁毛細血管充血或出血，與周圍界限明顯。腸壁黏膜層呈橘黃色，缺乏彈性，腸黏膜脫落，腸淋巴濾泡處腫脹，卵泡充血、出血，輸卵管萎縮等剖檢病變均符合新城疫的特征性病變。初步判斷該雞群患非典型新城疫。做了組織病理切片后觀察到的病毒性腦炎、淋巴組織壞死具有證病意義的新城疫組織病變；發病前后HI抗體檢測結果對比對新城疫亦具有證病意義；結合新城疫的病毒分離鑒定的陽性結果，綜合判定該雞群所患疾病為非典型新城疫。

[1] 陳溥言主編. 獸醫傳染病學[M]. 北京: 中國農業出版社, 2008.

[2] 刁有祥主編. 禽病學[M]. 北京: 中國農業科學技術出版社, 2008.

[3] 姚火春主編.獸醫微生物學實驗指導[M]. 北京: 中國農業出版社, 2002.

（2012–07–12）

S858.31

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1007-1733(2012)11-0013-02