EGFR單核苷酸多態(tài)性和食管癌放射敏感性的相關(guān)性研究

李長春， 李光明， 胡 欣， 付 曦， 潘榮強， 郭翠華， 文世明

(川北醫(yī)學(xué)院， 四川 南充 637000)

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%，鱗狀細胞癌是其主要組織學(xué)類型。由于食管癌癥狀不典型，臨床確診病例多數(shù)都已是中晚期，從而失去根治性手術(shù)的機會，需要接受放射治療［1］。目前分子生物學(xué)的研究成果已表明，食管癌的發(fā)生與癌基因，表皮生長因子及其受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的活化以及抑癌基因的失活或丟失密切相關(guān)，70% －80%食管癌患者出現(xiàn)EGFR的過表達，同時其mRNA也顯著高于正常食管粘膜組織，認為EGFR基因轉(zhuǎn)錄增強與食管癌發(fā)展有關(guān)［2，3］。本文選取在我院接受治療的160例食管鱗癌患者為研究對象，分別檢測他們外周血EGFR基因多態(tài)位點rs763317的基因型，并進一步統(tǒng)計分析EGFR的rs763317位點SNP在食管癌放射治療中的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取2008年3月至2011年3月在我院接受放射治療的食管癌患者160例，其中男86例，女74例，年齡30歲－85歲，平均年齡49.5歲，中老年患者多見。患者經(jīng)內(nèi)鏡、胸部CT和組織病理學(xué)確診，組織學(xué)證實均為鱗癌;病變長度2－7cm，無鎖骨上淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移，治療前肝、腎功能及血常規(guī)正常，X線病理分型:潰瘍型62例、髓質(zhì)型53例、腔內(nèi)型45例。患者的臨床資料具可比性(P＞0.05)。

1.2 治療與療效評價:患者仰臥位，熱塑體膜固定，CT掃描模擬定位，將數(shù)據(jù)輸入CMS治療計劃系統(tǒng)，根據(jù)IRCU50、62號文件規(guī)定勾畫靶區(qū):食管造影和胃鏡顯示病變長度及CT檢查所示的腫瘤范圍和位置為GTV，CTV包括可顯示的GTV和需要被殺滅的亞臨床病灶的體積，前后左右方向各外放0.5－0.8cm，PTV為CTV外擴0.5cm，同時勾畫脊髓、心臟及雙肺。通過劑量體積直方圖與平面二維等劑量曲線選擇最佳治療計劃方案，脊髓心臟受量均在耐受范圍內(nèi)，肺V20＜30%。確認后進行CT復(fù)位驗證。采用西門子直線加速器6MVX 線實施治療。DT60－66Gy，2Gy/30－33F，共6－7周。治療前取患者外周血，采用RECIST標準評價近期療效，治療有效(臨床獲益)者包括完全緩解，部分緩解，病情穩(wěn)定超過24周，治療無效為在治療24周內(nèi)出現(xiàn)病情進展。

1.3 rs763317基因型分析:采用MassARRAY SNP分型技術(shù)分別檢測患者外周血EGFR基因多態(tài)位點rs76 3317的基因型，再用PCR－RFLP法檢測這些基因型的SNP。分別取所有患者抗凝外周靜脈血2mL，苯酚－氯仿法提取模板DNA。采用PCR的方法擴增EGFR基因第1內(nèi)含子片段，PCR反應(yīng)的引物分別為:F－5’－AGGGCTGAGAAAGAGAG ACA－3’和 R－5’－ TGGGGAGA AAGTTAAAGCTA－3 ’，產(chǎn)物大小為 240bp，25μL PCR混合液中含0.1μg模板，DNA引物濃度0.4μmol/L。擴增條件為:95℃預(yù)變性3min后，于94℃30s、60℃ 30s和72℃ 30s進行40個循環(huán)，最后72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物采用限制性內(nèi)切酶TfiI進行酶切，酶切溫度60℃，酶切產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分析，讀取基因型。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理:所有資料應(yīng)用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，rs763317基因型與放射治療近期療效關(guān)系的分析采用X2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 rs763317基因分型結(jié)果:對160例晚期食管癌患者的外周血DNA進行rs763317基因分型。其中GA基因型116例，占72.5%;GG基因型24例，AA基因型20例，GG/AA基因型占28.5%，見表1。

表1 rs763317基因分型及其與放射治療的相關(guān)性 (n)

2.2 rs763317各基因型與臨床近期療效的關(guān)系:在160例接受放射治療的食管癌患者中，將rs763317不同基因型與的近期療效進行分析(見表1)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)攜帶GA基因型的116例患者中，有效76例，臨床獲益率為65.5%;GG基因型的24例患者中有效3例，臨床獲益率僅為12.5%，AA基因型20例患者中有效1例，臨床獲益率僅為5%;攜帶GA/AA基因型患者臨床獲益率為9.1%。rs2293347基因型GA與放射治療的近期療效密切相關(guān)(P＜0.001)，而GG和AA等位基因攜帶者的療效差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

食管癌是一種嚴重威脅人類生命健康的消化道惡性腫瘤，我國是食管鱗狀細胞癌的高發(fā)國家，其死亡率居第四位。由于患者的早期癥狀不明顯，絕大多數(shù)病人就診時已屬中晚期，預(yù)后較差。目前，以手術(shù)治療為主，結(jié)合放化療的方案漸已成熟，但五年生存率低［4］。近年來，隨著腫瘤分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，利用分子靶向治療提高癌癥病人的治療效果已成為新的發(fā)展方向，并漸成為抗腫瘤治療的重要組成部分，尤其針對表皮生長因子受體(EGFR)的研究已在各類腫瘤的治療中取了重大進展［5］。EGFR廣泛分布在人體上皮細胞膜表面，并在多種上皮性腫瘤中存在高表達，其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)包括腫瘤細胞的增殖、遷移、凋亡抑制和血管生成等諸多方面，因此，EGFR是目前最有應(yīng)用前景的特異性治療靶點之一［6］。有研究結(jié)果表明EGFR基因的過表達與食管癌的惡性程度呈正相關(guān)。已經(jīng)證實EGFR的第一內(nèi)含子區(qū)rs763317位點單核苷酸多態(tài)性(SNP)與肺癌有相關(guān)性［7］。本組研究通過對160例漢族人群的食管癌患者進行基因分型顯示rs763317位點的三個等位基因分別為AA、GA和GG(G＞A)。同時我們對這些患者實施單一的放射治療，并參照RECIST標準進行近期療效評價，最后的相關(guān)性結(jié)果顯示AA基因攜帶者對放療敏感，而GA/GG攜帶者對放療不敏感。

單核苷酸多態(tài)性(SNP)是指在基因組上單個核苷酸的變異，形成的遺傳標記，其數(shù)量很多，多態(tài)性豐富，這種變異包括置換、顛換、缺失和插入等，最終造成不同個體對藥物和疾病的易感性不同，所以研究食管癌患者的SNP有助于發(fā)掘新的治療靶點。EGFR作為和食管癌有密切關(guān)系的基因，與之相關(guān)的研究已相當深入，但多集中在外顯子部分，對其內(nèi)含子的研究較少。一般認為基因的內(nèi)含子不參與蛋白的表達，實驗結(jié)果顯示EGFR的第一內(nèi)含子區(qū)rs763317位點的不同基因型與食管癌的放療敏感性具有相關(guān)性。這為我們的臨床治療提供了一個理論支撐，即為什么兩個臨床癥狀、分期都相同的食管鱗癌患者，同時接受相同強度的放射治療最終的效果卻不同，這可能其中一個攜帶了對放療敏感的基因;同時我們的結(jié)論也為臨床對食管癌的治療指出了新的方向，我們可以利用基因分型篩選出對放療敏感的患者，對其開展放射治療，這一方面能提高放療的臨床有益率，另一方面又能減低放療對不敏感患者帶來的傷害。

［1］張琴，陳德玉，劉俊，等.食管癌同期放化療的療效分析［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報，2008，18(1):79－81.

［2］張功員，尹磊，李晟磊，等.食管鱗狀細胞癌組織中核干細胞因子、表皮生長因子和表皮生長因子受體mRNA的表達［J］.解剖學(xué)報，2008，39(6):862－866.

［3］Yamada A，Saito N，Kameoka S，et al.Clinical significance of epidermal growth factor(EGF)expression in gastric cancer［J］.Hepatogastroenterology，2007，54(76):1049－1052.

［4］王承偉，胡曙東，程茵.64層螺旋CT灌注成像在食管癌放療中的應(yīng)用［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2008，18(5):435－437.

［5］Pegram MD，Pietras R，Bajamonde A，et al.Targeted therapy:wave of the future［J］.Clin Oncol，2005，23(8):1776－1781.

［6］Wong R，Malthaner R.Combined chemoradiotherapy(without surgery)compared with radiotherapy alone in localized carcinoma of the esophagus［J］.Cochrane Da－Tabase Syst Rev，2006，25(1):CD002092.

［7］Nicolas Girard，Emil Lou，et al.Christopher G.Analysis of genetic variants in never－smokers with lung cancer facilitated by an Internet－based blood collection protocol:a preliminary report［J］.Clin Cancer Res，2010，16(2):755－763.