乳腺癌新輔助化療前后分子標志物表達的臨床意義

曾宇鋒 羅榮城 楊接輝 米賢軍

南方醫科大學附屬中山市博愛醫院，廣東中山 528403

乳腺癌新輔助化療前后分子標志物表達的臨床意義

曾宇鋒 羅榮城▲楊接輝 米賢軍

南方醫科大學附屬中山市博愛醫院，廣東中山 528403

目的 探討乳腺癌新輔助化療前后分子標志物表達的臨床意義。 方法 應用免疫組化方法檢測40例乳腺浸潤性導管癌Ⅱ～Ⅲ期患者在新輔助化療前后分子標志物的表達情況，分析其改變原因及分子標志物與臨床療效的相關性。 結果 40例患者新輔助化療前后分子標志物（ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2）均發生了一定程度的量變和狀態改變，ER和Ki-67表達的改變與新輔助化療的臨床療效相關 （P＜0.05）。 結論ER和Ki-67表達可以作為預測化療療效的敏感因子。

乳腺癌；新輔助化療；分子標志物

自20世紀80年代始，隨著分子生物學研究的開展，分子標志物的臨床價值不斷被揭示并應用于臨床。有部分分子標志物已用于指導乳腺癌臨床治療，預測乳腺癌術后的轉歸，并對其療效進行評價。本研究擬通過對40例Ⅱ～Ⅲ期可手術的原發性乳腺癌患者在新輔助化療前后對分子標志物（ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2）進行免疫組化檢測，了解新輔助化療對這些分子標志物表達的影響，觀察這些分子標志物對新輔助化療療效是否有預測作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2008年4月～2010年3月在我院乳腺外科確診為Ⅱ～Ⅲ期乳腺浸潤性導管癌的患者40例為研究對象，其中，Ⅱ期患者30例，Ⅲ期患者10例；所有患者均為單側原發性乳腺癌，具可評價病灶；性別均為女性，且為初治；年齡最小29歲，最大78歲，中位年齡52歲；均無放療、化療及內分泌治療病史。

1.2 方法

全部病例均用18G空芯針（CNB）進行穿刺活檢，經病理確診為乳腺浸潤性導管癌，同時采用免疫組化方法測定穿刺組織的ER、PR、Ki-67、C-erbB-2和 pS2水平。 采用CEF方案（環磷酞胺500 mg/m2，表柔比星75 mg/m2，氟尿嘧啶500 mg/m2）對全部患者進行化療2個周期后，施行乳腺癌改良根治術。將術后標本再次行同樣分子標志物測定。

1.3 評定標準

1.3.1 療效評定 按照RECIST 1.0標準，化療前后均進行CT掃描檢查，測量每個可測量病灶治療前后的最長徑以及最大垂直徑，計算最長徑以及最長徑與最大垂直徑的乘積（代表腫瘤面積）及其變化率。療效分為4個等級，即完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）和疾病進展（PD）。

1.3.2 免疫組化結果判定 ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2 量變的含義為陽性反應僅有程度改變。狀態改變的含義為由陽性（陰性）變為陰性（陽性）。C-erbB-2由過度表達（低表達）變為低表達（過度表達）稱狀態改變。由于ER、PR均定位于細胞核，故以細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性細胞，表達率的標準為：陽性細胞數＜10%為（-），陽性細比例為10%～25%為（+），陽性細胞比例為 26%～50%為（++），陽性細胞比例＞50%為（+++）。C-erbB-2 呈 （+++）被認為是過度表達；呈（-）～（+）被認為是低表達。Ki-67的增殖指數（PI）是指計算1 000個乳腺癌細胞，陽性細胞所占百分比，PI≥20%為高表達，＜20%為低表達。pS2表達率的標準與ER相同。

1.4 統計學方法

采用SPSS 14.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關關系的分析采用Spearman秩相關。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床療效

經CEF方案化療2個療程后，30例Ⅱ期乳腺癌患者中有24例達到PR，其臨床部分緩解率為80.0%（24/30）；10例Ⅲ期乳腺癌患者7例達到PR，其臨床部分緩解率為70.0%（7/10）；40例Ⅱ～Ⅲ期乳腺癌患者中共 30例達到 PR的效果，總有效率為77.5%（31/40）；Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者中分別有6例和3例達到SD；所有患者中均未出現CR與PD病例。Ⅱ、Ⅲ期患者的臨床療效一致性差異無統計學意義 （P＞0.05），即可以認為Ⅱ期乳腺癌和Ⅲ期乳腺癌患者經CEF方案化療2個療程后臨床療效一致，具體結果見表1。

表1 Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者臨床療效一致性比較（例）

2.2 分子標志物在新輔助化療中的意義

40例患者新輔助化療前后分子標志物 （ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2） 的量變依次為 17.5%、15.0%、22.5%、32.5%、7.5%；狀態改變依次為22.5%、42.5%、12.5%、50.0%、45.0%；新輔助化療前后Ki-67增殖指數差異有統計學意義（χ2=3.218，P=0.003）。

2.2.1 ER表達在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關分析結果顯示，ER表達的改變與術前新輔助化療的臨床療效呈正相關關系（P＜0.05），相關系數r為0.313。臨床療效為SD時，ER 表達改變 5例（12.5%），其中，3例（7.5%）和 2例（5.0%）分別為陽性表達上調和陽性表達下調；臨床療效為PR時，ER表達改變10例（25.0%），均為陽性表達上調。由此可以看出，隨著臨床療效的增加，ER陽性表達逐漸上調；反之，隨著臨床療效的降低，ER陽性表達逐漸下調。

2.2.2 Ki-67表達在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關分析結果顯示，Ki-67表達的改變與術前新輔助化療的臨床療效呈正相關關系（P＜0.05），相關系數r為0.373。臨床療效為 SD時，Ki-67表達改變 12例 （30.0%）， 其中，9例（22.5%）和3例（7.5%）分別為PI下調和上調；臨床療效為PR時，Ki-67表達改變20例（50.0%），均為PI下調。由此可以看出，隨著臨床療效的降低，Ki-67增殖指數下調減弱；反之，隨著臨床療效的增加，Ki-67增殖指數下調明顯增強。

2.2.3 其他分子標志物在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關分析結果顯示，其他分子標志物PR、C-erbB-2、pS2表達的改變與化療療效并無明顯相關性（均P＞0.05）。

3 討論

乳腺癌作為婦女常見的惡性腫瘤之一，目前，對該疾病的治療重點已轉向注重早期全身治療的新模式，而其中最重要的就是新輔助化療的出現。新輔助化療是指在手術治療或放療前進行的全身性、系統性的2～4個周期的細胞毒性藥物治療[1]。新輔助化療能夠提高保乳率，根據臨床的治療反應評估和選擇有效化療方案，為術后殘留病灶的治療提供化療選擇依據。ER、PR是乳腺癌的預測因子和預后因子，在激素治療時可以預測效果[2]。乳腺癌生物學指標在新輔助化療前后會發生很大的變化[3]。乳腺癌術后輔助治療方案的選擇可能受術前新輔助化療能否使乳腺癌ER、PR表達出現變化的影響。本研究的結果顯示，ER、PR狀態在化療前后無明顯差異，但部分患者ER的狀態受化療的影響。ER、PR表達出現變化的原因，費伯健等[4]認為可能是：對ER、PR的染色技術水平的不同以及化療后腫瘤細胞染色的透明度可能會降低影響判斷。另外，腫瘤組織內部存在著生物學差異，術前活檢標本和術后用于檢測ER的腫瘤標本作為整個腫瘤組織的一部分存在著差異。

C-erbB-2對乳腺癌患者的預后及乳腺癌對多種治療方法的敏感性均能有效預測且已有文獻報道[1]。有研究提示，新輔助化療并不能改變C-erbB-2基因的增殖狀況[5]。本研究顯示，C-erbB-2在新輔助化療前后的表達差異無統計學意義，與Tauther等[6]研究報道的結果相同。但C-erbB-2在有腋淋巴結轉移的患者中陽性率較高，這可能提示C-erbB-2主要影響腫瘤細胞的轉移潛能，對增殖性影響較小。

Ki-67是一種在增殖細胞中表達的核抗原，Ki-67表達能可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率，其表達的高低能夠對多種惡性腫瘤細胞的增殖狀態進行評價，并且對腫瘤細胞生物學行為的評估、腫瘤的臨床化療及推斷其預后均有相當的指導意義。在相關的研究中，衛燕等[7]的研究提示，Ki-67表達與化療敏感性并無明顯相關性。經多組研究證實，腫瘤細胞的增殖是重要的預后因素，腫瘤細胞增殖越快，提示對化療的反應性越好。本研究結果顯示，新輔助化療能明顯降低乳腺癌Ki-67的表達。

pS2對了解乳腺癌的生物學行為和激素依賴性有很大的幫助，并能指導內分泌治療。有學者認為，作為乳腺癌內分泌治療的預測指標，其作用可能要優于ER和PR。本研究中新輔助化療前pS2表達與ER表達正相關，但用Spearman秩相關分析發現pS2與化療療效卻顯著相關性。

綜上所述，新輔助化療能使Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌達到PR，能明顯降低乳腺癌組織Ki-67的表達，且Ki-67高表達的患者對化療更敏感，因此，Ki-67可能是預測化療療效的敏感因子；對PR、C-erbB-2、pS2的表達雖無顯著影響，但仍能改變部分患者的上述腫瘤特異性標志物的表達。此研究僅選擇CEF方案，尚未包括紫杉醇在內，故不能代表所有的新輔助化療；且本研究的樣本量尚小，觀察療效的時間也較短，所以還有待增大樣本量及增加化療方案做進一步探討。乳腺癌患者的預后判斷是一個相當復雜的問題，其中存在許多未知因素，而且這些預測指標與以后長期隨訪結果進行相關性分析，將會進一步明確其臨床價值。

[1]陳浩華，張紅梅，陸春燕，等.乳腺癌分子分型在新輔助化療中的應用價值[J].山西醫藥雜志，2012，41（2）：151-152.

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[6]Taucher S，Rudas M，Mader RM，et al.Influence of neoadjuvant therapy with epirubicin and docetaxel on the expression of HER2/neu in patients with breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat，2003，82：207-213.

[7]衛燕，李金峰，王天峰，等.激素受體和Ki-67的表達與乳腺癌蒽環類新輔助化療療效的相關性[J].北京大學學報：醫學版，2007，39（5）：481-483.

Clinical significance of molecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy of breast cancer

ZENG Yufeng LUO Rongcheng▲YANG Jiehui MI Xianjun
Zhongshan Bo'ai Hospital Affiliated to Southern Medical University,Guangdong Province,Zhongshan 528403,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of molecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy of breast cancer.MethodsMolecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy among 40 cases of patients with invasive ductal carcinoma of stageⅡ-Ⅲ was tested by immunohistochemistry method.The changes reasons and correlation between molecular markers and clinical effect were analyzed.ResultsAfter neoadjuvant chemotherapy,biological molecular markers of 40 patients(ER,PR,C-erbB-2,Ki-67 and pS2)all had some quantitative and status changes,and the changes of ER,Ki-67 expression were correlated with clinical effect(P＜0.05).ConclusionER and Ki-67 expression can be used to predict the sensitivity of chemotherapy curative effect.

Breast cancer;Neoadjuvant chemotherapy;Molecular marker

R737.9

A

1673-7210（2012）08（c）-0048-02

曾宇鋒（1970-），男，2008級在職碩士研究生，副主任醫師。▲

2012-03-30 本文編輯：程 銘）