竹節參皂苷類化學成分的研究

鄒海艷 趙 暉 邱 葵 崔小桂 于 萍

(1首都醫科大學中醫藥學院，北京，100069;2首都醫科大學附屬北京朝陽醫院藥事部)

竹節參又名竹節人參、竹節三七、白三七等，是五加科植物竹節參Panax Japonicus C.A.Mey.的干燥根莖，為2010版《中華人民共和國藥典》收載品種。竹節參始載于《百草鏡》，具有散瘀止血，消腫止痛等功效［1］。竹節參中主要含有皂苷、揮發油、多糖和氨基酸等類化學成分［2］。前期研究發現竹節參總皂苷口服給藥后對大鼠腦缺血模型有很好的保護作用，可有效改善腦缺血動物的神經功能癥狀及減輕腦組織病理形態學改變［3－4］。為深入探討其藥效物質基礎，本實驗對竹節參中的皂苷類化合物進行了提取分離，得到了5個化合物。

圖1 化合物1～5的結構

1 儀器與試藥

島津CBM－20A半制備高壓液相色譜儀;BRUKER AVANCE 500MHz核磁共振儀;Agilent 6320XCT型離子阱質譜儀;AR1140型萬分之一電子天平;KQ5200DU型數控超聲波清洗器。乙腈和甲醇為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。竹節參皂苷 IVa對照品(批號:111861－201001，含量測定用)，購于中國藥品生物制品檢定所;人參皂苷Ro對照品(批號:MUST－12010503，純度＞98%)，購于北京世紀奧科生物技術有限公司。竹節參藥材，購于湖北，由首都醫科大學李佳副教授鑒定為五加科人參屬植物竹節參Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 提取與分離 取竹節參藥材粗粉5kg，用70%的乙醇加熱回流提取3次，溶劑用量依次為10、10和8倍量，每次2h。合并提取液減壓回收溶劑，用含水正丁醇等量萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑得粗總皂苷。將粗總皂苷用85%乙醇溶液充分溶解，緩慢加入4～5倍量丙酮，靜置，收集沉淀物，真空干燥(60℃)，得精制竹節參總皂苷479.1g。

取精制的竹節參總皂苷適量，加50%甲醇溶解，采用反相半制備高效液相色譜進行分離，以甲醇－0.1%三氟乙酸水溶液(72∶28)為流動相，等度洗脫，收集6個流份(Fr.1－6)，甲醇重結晶后得到化合物1(15mg)、2(12mg)、4(14mg)和 5(16mg)。取 Fr.4 進行二次制備，得到化合物3(9mg)。

表1 化合物1、3和5的13C－NMR(125MHz，Pyr－d5)數據

2.2 結構鑒定 1)化合物1 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESI－MS neg.m/z:955.5［M －H］–，793.3［M－glc－H］–，631.3［M －2glc－H］–，455.3［M －2glcglcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.27(1H，d，J=8.0Hz，glc － H －1)，5.05(1H，d，J=7.5Hz，glc－H －1)，5.41(1H，br.d，12 － H)，5.01(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H － 1)，1.31，1.27，1.10，1.00，0.89，0.88，0.85(各 3H，s，CH3× 7)。13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數據見表1。以上數據與相關文獻［5］比對，確定該化合物為巨花雪膽皂苷B(Hemsgiganosides B)。

2)化合物2 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:955.5［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.3［M－2glc－glcUA －H］–。采用 HPLC色譜，通過對照品增高色譜峰試驗，判斷該化合物為竹節參皂苷Ⅴ，即人參皂苷Ro。

3)化合物3 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:925.6［M －H］–，793.4［M －ara－H］–，631.3［M－ara－glc－H］–，455.2［M －ara－glc－glcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.33(1H，d，J=8.5Hz，glc － H － 1)，5.42(1H，br.d，12 － H)，5.03(1H，d，J=4.0Hz，ara － H － 1)，4.97(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H － 1)，1.27，1.25，1.09，0.97，0.92，0.89，0.80(各 3H，s，CH3× 7)。13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數據見表 1。以上數據與文獻比對［6－7］確定該化合物為竹節參皂苷Ⅳ，即楤木皂苷A。

4)化合物4 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:793.5［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.2［M－glc－glcUA－H］–。采用HPLC色譜，通過對照品增高色譜峰試驗，判斷該化合物為竹節參皂苷Ⅳa。

5)化合物5 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:793.4［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.3［M －glc－glcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.28(1H，d，J=7.5Hz，glc－H －1)，5.45(1H，br.d，12 －H)，5.01(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H －1)，2.54(1H，d，J=11Hz，H － 18)，1.31(3H，s，H － 23)，1.23(3H，s，H －27)，1.14(3H，s，H －24)，0.99(3H，d，J=7.0Hz，H －29)，0.97(3H，d，J=7.0Hz，H －30)，0.92(3H，s，H －25)，0.85(3H，s，H －26);13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數據見表1。與文獻［8］比對確定該化合物為Cynarasaponin C。

3 討論

作為人參和三七的同屬植物，竹節參中富含三萜皂苷類化合物，現代藥理研究表明，竹節參總皂苷具有保護缺血性心肌損傷、強心、擴冠、鎮靜、保肝、抗腫瘤等多方面的藥理活性［2］，是中藥竹節參中的主要有效成分。目前，從竹節參中分離得到的皂苷主要為齊墩果烷型和達瑪烷型，而烏索烷型的化合物為首次從該屬植物中分離得到，竹節參中是否含有該類型的其他化合物需要進一步研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京:化學工業出版社，2010:129.

［2］頓耀艷，袁丁.竹節參化學成分的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2006，17(10):1909 －1912.

［3］趙暉，李佳，劉南岑.竹節參總皂苷對大鼠局灶性腦缺血損傷及抗氧化酶活性的影響［J］.中藥新藥與臨床藥理，2007，6:445－447.

［4］趙暉，張秋霞，穆陽.竹節參總皂苷對局灶性腦缺血大鼠模型的保護作用［J］.中國中醫藥信息雜志，2005，12(3):43 －44.

［5］陳亞，邱明華，古昆，等.巨花雪膽中的兩個新化合物［J］.云南植物研究，2003，25(5):615 －619.

［6］魏煥莉，李艷靜，陳君，等.牛膝中的三萜皂苷類成分［J］.中國天然藥物，2012，10(2):98 －101.

［7］孫文基，張登科，沙振方，等.楤木根皮中皂苷化學成分的研究［J］.藥學學報，1991，26(3):197 －202.

［8］Shimizu S，Ishihara N，Vmehara K，et al.Sesquiterpene Glycosides and Saponins from Cynara cardunculus L.Chem.Pharm.Bull.，1988，36(7):2466－2474.