加味佛手散治療原發(fā)性痛經(jīng)作用機制實驗研究

佟 昕 佟 力

(1秦皇島市海港區(qū)計劃生育服務站，河北秦皇島，066000;2秦皇島市青龍滿族自治縣人民醫(yī)院)

加味佛手散(MFSS)為本課題組應用的自擬方，以佛手散為基礎的組方，由當歸、川芎、血見愁、赤芍、黃芪等組成，具有益氣活血、行氣活血、通經(jīng)散寒、止痛之功效，臨床用于治療原發(fā)性痛經(jīng)療效可靠［1］，前期實驗研究證明本方對原發(fā)性痛經(jīng)模型動物的痛反應及對縮宮素誘發(fā)的正常小鼠離體子宮過度收縮有明顯的抑制作用［2］。本研究旨在通過觀察MFSS對原發(fā)性痛經(jīng)模型動物子宮平滑肌興奮性的影響及血清中PGF2α水平，探討MFSS治療原發(fā)性痛經(jīng)的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 加味佛手散水提取物的制備:當歸、川芎、血見愁、赤芍、黃芪按 6∶3∶1∶1∶5 配伍，加 8 倍量水，浸泡4h，煎煮2次，每次煎煮20min，合并煎煮液，過濾，減壓濃縮至1g/mL;元胡止痛片(YHZTP)，承德天源藥業(yè)有限公司，批號:20090312;己烯雌酚片，石家莊市華龍藥業(yè)股份有限公司，批號:20090408;縮宮素注射液，上海禾豐制藥有限公司，批號090206。

1.1.2 試劑盒 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，批號090621，上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)。谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒，批號:20090716;SOD試劑盒，批號:20090321;MDA試劑盒，批號:20090711，均購自南京建成生物工程研究所第一分所。

1.1.3 洛氏液(Locke’s solution)［3］NaCl 9.0g/L，KCl 0.42g/L，CaCl20.24g/L，NaHCO30.2g/L，Glucose 1.0g/L，臨用時重蒸水新鮮配制。

1.1.4 儀器 MacLab/4e四道生理記錄儀(澳大利亞生產(chǎn))。

1.1.5 動物 wistar大鼠，清潔級，雌性，未孕，體質(zhì)量200～220g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(冀)－1－003，實驗前在本實驗室適應3天，實驗室溫度22～24℃，相對濕度60%，光照時間12h(7:00－19:00)。

1.2 方法

1.2.1 分組及原發(fā)性痛經(jīng)模型的制備［4］雌性wistar大鼠60只，隨機分為正常對照組(NC)、MFSS(按生藥計算)1.0、2.0和4.0g/kg組，YHZT 1.0g/kg陽性對照組及模型組(MC)。除正常對照組外，其他組大鼠均每天腹腔注射(ip)己烯雌酚2mg/kg，連續(xù)10d。ip己烯雌酚第6日開始，各組灌胃給予相應的藥物，給藥容積為5mL/kg，模型組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)5d。末次給藥后1h肌肉注射縮宮素20u/kg。

1.2.2 檢測標本的制備 上述模型動物在注射縮宮素40min后，乙醚輕度麻醉，腹腔靜脈取血，3000 r/min，4℃離心15min，分離血清，置于－20℃保存。取血后，迅速取出子宮，置于冷洛氏液中輕輕沖洗，供下列實驗用。

1.2.3 大鼠離體子宮平滑肌活動力的測定 將上述離體子宮固定于盛有15mL洛氏液的恒溫浴槽中，與MecLab/4e相連的張力換能器上。浴槽內(nèi)溫度為37.5～38℃，恒量通入95%O2+5%CO2混合氣體。調(diào)節(jié)微調(diào)器加前負荷1g，平衡40min，待子宮恢復自發(fā)節(jié)律，收縮頻率和幅度穩(wěn)定后，記錄各組動物子宮的收縮頻率和幅度，并計算其活動力(頻率×幅度)。

1.2.4 大鼠血清中PGF2α、MDA含量及SOD和GSH－PX的活性測定 取1.2.2制備的血清，按試劑盒方法測定各組大鼠血清中PGF2α、MDA含量及SOD和GSH－PX的活性。

表1 MFP對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮力的影響(n=10，±s)

表1 MFP對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮力的影響(n=10，±s)

注:與 MC 組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量(g/mL)頻率(次/10min)收縮幅度(mm)活動力(頻率×幅度)NC － 6.21±2.53＊＊ 6.45±2.11＊＊ 39.85±7.54＊＊MC － 12.2±2.87 4.28±2.05 51.72±6.75 MFP 1.0 9.42±1.94 5.22±2.13* 49.17±8.86 MFP 2.0 7.93±2.01＊＊ 5.37±2.41* 42.31±6.21＊＊MFP 4.0 8.37±2.41＊＊ 5.58±2.34* 46.70±9.64*YHZT 1.0 8.37±3.34* 5.42±2.11* 45.96±5.91*

2 結(jié)果

2.1 對痛經(jīng)模型大鼠離體子宮平滑肌活動力的影響模型組大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率顯著高于正常對照組、收縮幅度低于正常對照組(P＜0.05)、活動力高于正常對照組(P＜0.01)。MFSS 2.0、4.0g/kg劑量組離體子宮收縮頻率明顯低于模型組(P＜0.05)，收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，活動力低于模型組(P＜0.05)。1.0g/kg劑量組收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，收縮頻率與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2.0g/kg劑量組的活動力低于其他劑量組，結(jié)果見表2。

2.2 對大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和 GSH－PX水平的影響 MC組大鼠血清中PGF2α的含量顯著高于NC組(P＜0.01)，MFSS各劑量組及YHZT組動物血清中PGF2α的含量顯著低于MC組(P＜0.05)。MC組MDA含量高于NC組(P＜0.05)，SOD、GSHPX活性低于NC組(P＜0.05)。MFP各劑量組MDA的含量低于MC組(P＜0.05);GSH－PX及SOD的活性高于MC組，結(jié)果見表2。

表2 MFP對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和GSH－PX水平的影響(n=10，±s)

表2 MFP對原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α、MDA、SOD和GSH－PX水平的影響(n=10，±s)

注:與MC組比較，*P＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 劑量(g/kg) PGF2α(μg/mL) MDA(nmol/mL) SOD(u/mL) GSH －PX(U)1.12±0.35 102.39±38.56 812.62±154.29 MC － 8.71±2.87 1.78±0.41 159.46±55.37 537.91±119.60 MFP 1.0 5.71±2.42* 1.46±0.26* 137.64±54.56* 597.12±203.12*MFP 2.0 5.34±0.75＊＊ 1.37±0.43＊＊ 122.75±49.52* 723.52±272.26＊＊MFP 4.0 4.79±0.87＊＊ 1.45±0.35* 128.12±42.51* 682.57±113.24*YHZT 0.1 4.78±1.38＊＊ 1.41±0.38＊＊ 134.78±51.25* 616.69±123.46 NC － 3.01±0.45＊＊*

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)的病因、病機復雜。Creat sas G等研究證明原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)生與前列腺素(PGs)密切相關［5］，前列腺素能促進子宮內(nèi)膜螺旋小動脈收縮，加速內(nèi)膜缺血、壞死及血管的斷裂導致月經(jīng)來潮。痛經(jīng)患者血中PGF2α水平與痛經(jīng)的癥狀呈正相關。高濃度的PGF2α作用于螺旋小動脈上的PGF2α受體，引起子宮平滑肌痙攣性收縮，表現(xiàn)為能宮肌張力增高、收縮幅度增加，導致子宮組織血流減少，缺血、缺氧，酸性代謝產(chǎn)物堆積于肌層，刺激子宮自主神經(jīng)疼痛纖維而致痛經(jīng)［6－8］。子宮平滑肌痙攣性收縮致肌間血管受壓而出現(xiàn)子宮肌層及內(nèi)膜的暫時缺血，產(chǎn)生更多的超氧自由基，而抗氧化酶活性相應降低，引起自由基的連鎖反應，形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物，進一步引起細胞膜的流動性降低，通透性增高，線粒體腫脹，溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放，更進一步加重了子宮內(nèi)膜的損傷，使痛經(jīng)發(fā)生并加劇［9］。

本方臨床用于治療血瘀兼氣虛型原發(fā)性痛經(jīng)，療效可靠［1］。前期實驗研究證明本方可明顯減少原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠的扭體反應次數(shù)，延長扭體反應的潛伏期［2］。本研究結(jié)果證明，MFS 2.0、4.0g/kg 明顯降低原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠離體子宮收縮頻率(P＜0.05)，而收縮幅度高于模型組(P＜0.05)，活動力低于模型組(P＜0.05)，說明MFS可明顯抑制原發(fā)性痛經(jīng)大鼠子宮的過度收縮，使其舒張完全，改善子宮平滑肌的血液供應，進而減輕痛反應。MFS明顯降低原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠血清中PGF2α水平，提示其緩解原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠子宮痙攣性收縮與抑制PGF2α的合成或釋放有關。

本實驗結(jié)果證明，本方可以明顯提高血清中SOD和GSH－PX的活性，降低MDA的含量，提示其可通過提高SOD及GSH－PX酶的活性，加速超氧自由基的消除，減輕超氧自由基對子宮平滑肌的進一步損傷，是其治療原發(fā)性痛經(jīng)作用機制之一。

［1］佟力.佛手散加味治療原發(fā)性痛經(jīng)60例臨床觀察［J］.河北中醫(yī)，2010，32(5):693 －694.

［2］李興嶺，佟力，佟欣，等.佛手散加味對原發(fā)性痛經(jīng)作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)急癥，2011，20(4):601 －602.

［3］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1583.

［4］王北嬰，李儀奎.中藥新藥研究開發(fā)技術與方法［M］.上海科學技術出版社，2001，700 －702.

［5］Creat sas G，Deligeoroglou E，Zachari A，et al.Prostaglandins:PGF2 alpha，PGE2，6 － keto － PGF1 alpha and TXB2 serum levels in dysmenorrheic adolescents before，during，and after treatment with oral contraceptives［J］.Europ J Obstet Gynecol Reprod Biol，1990，36(3):292 －298.

［6］華永慶，洪敏，朱荃.原發(fā)性痛經(jīng)進展［J］.南京中醫(yī)藥大學學報，2003，19(1):622 －641.

［7］李炳如，樊菁.痛經(jīng)寧對大鼠子宮微循環(huán)的影響［J］.中草藥，1990，21(7):22－24.

［8］孫寧銓，林雅，張從羽，等.痛經(jīng)散治療原發(fā)性痛經(jīng)的臨床與機制初探［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，6(12):711 －713.

［9］裴培田，姚凝.舒經(jīng)玫瑰膠囊對小鼠原發(fā)性痛經(jīng)血清中谷胱甘肽過氧化物酶及一氧化氮的影響［J］.中國藥物與臨床，2005，5(1):24－25.