翻白草總黃酮對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

劉文泊 許本善 王德厚 張 峰 (泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

翻白草總黃酮對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

劉文泊 許本善 王德厚 張 峰 (泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

目的 研究翻白草總黃酮對(duì)小鼠腦缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法 小鼠隨機(jī)分為4組，即假手術(shù)組、模型組及翻白草總黃酮高、低劑量組。采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷法制備小鼠I/R損傷模型，Y型迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，酶聯(lián)免疫標(biāo)記法檢測(cè)小鼠腦組織中髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性及腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6的含量。結(jié)果 翻白草總黃酮可改善小鼠學(xué)習(xí)及記憶能力，降低I/R損傷小鼠腦組織MPO活性及TNF-α、IL-6的含量。結(jié)論 翻白草總黃酮對(duì)I/R損傷小鼠有保護(hù)作用，其機(jī)制與其抗炎作用有關(guān)。

翻白草總黃酮;I/R損傷;MPO;TNF-α;IL-6

翻白草為薔薇科植物，在我國(guó)分布極為廣泛，應(yīng)用歷史悠久，多種醫(yī)藥典籍中均有記載，其主要功效為清熱解毒，涼血止血〔1〕。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，翻白草具有消炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗氧化、降血糖等作用〔1～3〕。翻白草富含黃酮類(lèi)成分〔4，5〕，具有重要開(kāi)發(fā)價(jià)值。本研究旨在探討翻白草總黃酮對(duì)小鼠腦缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的機(jī)制，為其臨床應(yīng)用于缺血性腦血管疾病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

健康昆明種小鼠60只，雌雄兼用，體重(25±2)g，由泰山醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字070103。翻白草購(gòu)于泰安市場(chǎng)，經(jīng)我院中藥學(xué)教研室鑒定;總黃酮采用超聲法提取，按文獻(xiàn)方法〔5〕檢測(cè)含量為22.4 mg/g生藥。考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒、髓過(guò)氧化物酶(MPO)試劑盒，購(gòu)于南京建成生物公司;白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒，購(gòu)于北京環(huán)亞泰克生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 實(shí)驗(yàn)前1 d采用Y形迷宮對(duì)小鼠進(jìn)行篩選，淘汰反應(yīng)過(guò)于遲鈍或特別敏感的小鼠。將篩選合格的60只小鼠隨機(jī)分為4組，每組15只，即假手術(shù)組(進(jìn)行手術(shù)，但不進(jìn)行腦I/R)、I/R模型組及翻白草總黃酮(FPB)高、低劑量組，采用灌胃給予 5、2.5 mg·kg－1·d－1FPB，1 次/d，連續(xù) 3 d。假手術(shù)組、模型組灌胃給予等體積的蒸餾水。

1.2.2 腦I/R模型制備 末次給藥后1 h，用水合氯醛(4%，0.1 ml/10 g腹腔注射)麻醉小鼠，常規(guī)消毒頸部皮膚，將小鼠仰臥固定，切開(kāi)頸部皮膚，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，用縫合線打活結(jié)，縫合頸部皮膚。腦I/R時(shí)，提起活結(jié)阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈5 min，立即松開(kāi)再灌注25 min。

1.2.3 學(xué)習(xí)記憶能力的檢測(cè) 術(shù)后24 h，篩選清醒活躍小鼠繼續(xù)給藥2 d，末次給藥1 h后進(jìn)行腦缺血再灌注，隨即采用Y型迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)能力，次日檢測(cè)記憶能力。電壓范圍50～90 V。檢測(cè)時(shí)先放入小鼠使其適應(yīng)3 min，然后給小鼠以電刺激，隨機(jī)改變電擊區(qū)和安全區(qū)，小鼠遭遇電擊時(shí)直接逃至安全區(qū)為正確反應(yīng)，否則為錯(cuò)誤反應(yīng)。電擊15次，記錄正確次數(shù)。24 h后再次測(cè)定小鼠連續(xù)遭遇15次電擊的正確反應(yīng)次數(shù)。

1.2.4 腦組織MPO活力及TNF-α、IL-6含量測(cè)定 脫臼處死小鼠，斷頭取腦，用冰生理鹽水洗去血液，濾紙吸干，將腦組織制成10%勻漿，4℃離心(3 500 r/min，10 min)，取上清，按照試劑盒操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 FPB對(duì)I/R損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

模型組小鼠正確次數(shù)明顯低于假手術(shù)組小鼠，24 h后檢測(cè)正確率有所提高，但仍然顯著低于假手術(shù)組。與模型組相比，F(xiàn)PB高、低劑量組均可顯著改善I/R損傷小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力(P＜0.01，P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 FPB對(duì)I/R損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響(s)

表1 FPB對(duì)I/R損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響(s)

與假手術(shù)組比較：1)P＜0.01;與模型組比較：2)P＜0.05，3)P＜0.01，下表同

組別 n 學(xué)習(xí)正確次數(shù) 記憶正確次數(shù)10 0.65+0.16 0.69±0.17模型組 8 0.17±0.071) 0.37±0.151)低劑量FPB組 8 0.44±0.121)2) 0.51±0.081)2)高劑量FPB組 9 0.52±0.113) 0.64±0.153)假手術(shù)組

2.2 FPB對(duì)I/R損傷小鼠腦組織MPO活力及TNF-α、IL-6含量的影響

模型組小鼠腦組織中TNF-α和IL-6含量及MPO的活力均顯著升高(P＜0.05)。與模型組小鼠比較，F(xiàn)PB高、低劑量組小鼠腦組織TNF-α和IL-6含量及MPO的活力明顯降低(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 FPB對(duì)I/R損傷小鼠腦組織中TNF-α、IL-6、MPO的影響±s)

表2 FPB對(duì)I/R損傷小鼠腦組織中TNF-α、IL-6、MPO的影響±s)

組別 n TNF-α(ng/L)IL-6(pg/ml)MPO(U/g)10 282.32±28.34 120.28±22.26 0.64±0.08模型組 8 321.90±25.361)209.97±56.481) 0.85±0.151)低劑量FPB組 8 278.00±33.032)176.34±29.052) 0.71±0.102)高劑量FPB組 9 272.53±40.052)128.87±14.603) 0.68±0.092)假手術(shù)組

3 討論

學(xué)習(xí)記憶功能障礙是缺血性腦血管疾病患者普遍的臨床表現(xiàn)。本研究顯示，腦I/R損傷的小鼠在Y型迷宮中回避電擊的正確次數(shù)顯著減少，記憶能力也明顯下降。預(yù)先給予FPB的小鼠則表現(xiàn)出了較好的規(guī)避危險(xiǎn)的能力，提示FPB可減輕腦I/R造成的損傷。腦I/R損傷的發(fā)生是多種因素及多種機(jī)制參與的復(fù)雜病理生理過(guò)程，其中炎癥反應(yīng)起著重要的作用。當(dāng)腦缺血/再灌注時(shí)，可激活腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板和免疫細(xì)胞釋放大量的促炎性細(xì)胞因子，包括TNF-α、IL-6、IL-8、血小板激活因子和補(bǔ)體活化產(chǎn)物等物質(zhì)〔6〕。TNF-α、IL-6作為炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子，參與I/R損傷過(guò)程，加重腦損傷〔7〕。MPO是中性粒細(xì)胞的活化標(biāo)志物，可誘導(dǎo)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)炎癥效應(yīng)細(xì)胞的增殖與活化〔8〕。本研究結(jié)果表明，小鼠I/R損傷后腦組織中TNF-α、IL-6含量顯著升高，MPO活力亦明顯提高，而預(yù)先給予FPB可降低腦組織中TNF-α、IL-6含量及MPO活力，提示FPB可抑制腦I/R后炎癥反應(yīng)。

黃酮類(lèi)化合物具有廣泛的藥理活性，本研究證實(shí)翻白草總黃酮可抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)腦I/R后學(xué)習(xí)記憶能力有一定保護(hù)作用，為其在腦血管疾病防治方面的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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6 李春穎，曲 嫻，李東盈.反復(fù)腦缺血再灌注對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶和腦內(nèi)氧化損傷的影響〔J〕.北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009;10(4)：322-6.

7 劉秀平，許棟明，王 文，等.炎癥反應(yīng)影響腦缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2009;15(11)：1041-3.

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R285

A

〕 1005-9202(2012)22-4965-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.052

泰安市大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(No.2010D2040)

張 峰(1972-)，男，碩士，講師，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

劉文泊(1989-)，男，2008級(jí)臨床藥學(xué)專(zhuān)業(yè)本科生，主要從事藥學(xué)研究。

〔2011-10-18收稿 2012-01-10修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)