黔產(chǎn)鉤藤藥材不同采收期及不同加工方法有效成分含量對比研究

王克英郭思妤祝晶姜洪旭歐恒熙蘭才武

1、貴州省食品藥品檢驗所，貴州貴陽550004;2、貴州省職業(yè)技術(shù)學院，貴州金陽550081;3、貴陽醫(yī)學院碩士研究生，貴州貴陽550004;4、貴州省昌昊發(fā)展有限公司，貴州凱里556000

黔產(chǎn)鉤藤藥材不同采收期及不同加工方法有效成分含量對比研究

王克英1郭思妤2祝晶3姜洪旭3歐恒熙3蘭才武4

1、貴州省食品藥品檢驗所，貴州貴陽550004;2、貴州省職業(yè)技術(shù)學院，貴州金陽550081;3、貴陽醫(yī)學院碩士研究生，貴州貴陽550004;4、貴州省昌昊發(fā)展有限公司，貴州凱里556000

目的:測定不同采收期及不同加工方法黔產(chǎn)鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量，并考察鉤藤堿和異鉤藤堿在不同采收期的含量變化。方法:采用RP－HPLC法，KromosilC18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱;流動相以甲醇－0．2%氨水溶液(65:35)，流速:1.0mL/min，柱溫35℃，進樣器溫度5℃，檢測波長為245nm，結(jié)果:不同采收期鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿含量有顯著變化。以10月～1月份，采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較高;不同加工方法鉤藤堿和異鉤藤堿含量也有所不同。結(jié)論:1．以10月～1月份采集的樣品含量較高，符合中國藥典規(guī)定鉤藤藥材在秋、冬二季采收。2．陰干和曬干的藥材含量較高。為黔產(chǎn)鉤藤藥材提供了最佳加工方法。

黔產(chǎn)鉤藤;HPLC;不同采收期;不同加工方法;含量測定

鉤藤(Rhynchophylla)作為我國的傳統(tǒng)中藥，其帶鉤莖枝應(yīng)用歷史悠久，主要分布于我國南方地區(qū)，貴州道地藥材鉤藤也為同科同屬植物，作為常用的中藥材之一，具有清熱平肝，熄風定驚的作用。主要用于頭痛眩暈、感冒夾驚、驚癇抽搐、妊娠子癇，以及高血壓等癥［1］。現(xiàn)代研究表明，鉤藤的主要有效成分為鉤藤總生物堿(Rhynchophylla total alkaloids，RTA)，其中主要是鉤藤堿(rhynchophylline)和異鉤藤堿(isorhynchophylline)，分別占總堿的28.9%和14.7%，也是鉤藤中含量最大的生物堿成分［7］。具有降血壓、抗心律失常以及抗血小板聚集和抗血栓形成的作用［3－5］。目前，隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展，由于鉤藤的深入開發(fā)研究，鉤藤的功能效用在不斷擴大，己越來越受到人們關(guān)注。目前評價鉤藤質(zhì)量優(yōu)劣的標準，多以鉤藤堿和異鉤藤堿的含量為指標。由于鉤騰藥材使用不斷擴大，需求量不斷上升，藥工們可以隨時采收藥材上市。為了保證藥材質(zhì)量，我們做了不同采收期及不同加工方法的鉤藤藥材質(zhì)量對比研究。本實驗采取二種藥效成分同時考察的方法，對不同生長季節(jié)及不同加工方法的鉤藤進行評估，為我省鉤藤藥材的采收及加工炮制方法提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀;美國Waters2695－2996高效液相色譜儀及二極管陣列檢測器;Empowrer色譜數(shù)據(jù)工作站;KQ－500D A型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);實驗所使用試劑試藥均為分析純。鉤藤堿(純度為98%)和異鉤藤堿(純度為98%)對照品購自上海原葉生物科技有限公司(批號2010923－2011)。所用鉤藤藥材均由貴州省昌昊中藥發(fā)展有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱:十八烷基鍵和硅膠為填沖劑，KromosilC18柱(4.6 mnl×250 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.2%氨水溶液(65:35);流速:1.0mL·min－1;柱溫:35℃;進樣器溫度:5℃;鉤藤堿及異鉤藤堿的檢測波長均為245nm;進樣量:10μL;理論塔板數(shù)按鉤藤堿和異鉤藤堿峰面積計算應(yīng)不底于3000。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取鉤藤堿和異鉤藤堿對照品加甲醇制成每1mL含60μg和每1mL含80μg的混合溶液，即得。

2.3 通過質(zhì)量標準的研究，鉤藤堿、異鉤藤堿的線性關(guān)系考察、精密度實驗、重復(fù)性實驗、穩(wěn)定性實驗、加樣回收率實驗均符合藥典的要求。見圖1～2。

圖1 鉤藤堿和異鉤藤堿HPLC色譜圖

圖2 黔產(chǎn)鉤藤藥材HPLC色譜圖

2.4 樣品測定精密取不同采收期及不同加工方法樣品粉末(過三號篩)約0.3g，精密稱定，加入氯仿:甲醇(5:1)的混合溶劑20mL，冰箱5℃放置過夜，加0.5mL氨水，低溫超聲40分鐘，過濾，用氯仿:甲醇(5:1)的混合溶劑洗滌容器及濾渣，濾液置蒸發(fā)皿中，在65℃水浴上揮干，殘渣加甲醇定容置3mL容量瓶中，搖勻，微孔濾膜過濾，既得。分別吸取以上供試品溶液與鉤藤堿和異鉤藤堿混合對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測定峰面積，按外標法計算樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量之和。結(jié)果見表1及表2，所有測定結(jié)果均以干燥品計。

表1 不同采收期鉤藤堿和異鉤藤堿的含量(μg/g)(n=3)

表2 不同加工方法鉤藤堿和異鉤藤堿的含量(μg/g)(n=3)

烘干(50－60℃)余慶57050620曬干69868766陰干75030780鮮品81020830烘干(50－60℃)凱里45030485曬干952611010陰干949721021鮮品985691054烘干(50－60℃)錦屏25022292曬干34014350陰干37040410鮮品32020340烘干(50－60℃)荔波56921590曬干61031640陰干59844642鮮品58946635

3 討論

3.1 本實驗以春、夏、秋、冬月份鉤藤藥材為材料，對不同生長季節(jié)鉤藤藥材中的2種有效成分(鉤藤堿和異鉤藤堿)含量進行了測定。通過各不同生長期的有效成分含量對比研究，可確定鉤藤藥材最佳采收期。從表3中可以看出不同采收期鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿含量有顯著變化。從每一個產(chǎn)地不同采收期鉤藤藥材來看，基本上都是以10～1月份采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較高。可作為最佳采收期，符合中國藥典規(guī)定鉤藤藥材在秋、冬二季采收規(guī)定。而以3～7月份采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較低。通過本課題的研究證明，為確定鉤藤藥材最佳采期收期提供了科學的依據(jù)。

3.2 我們將劍河、凱里、錦屏、荔波、余慶等產(chǎn)地的樣品，通過各種不同的加工方法，對鉤藤藥材有效成分含量進行了對比研究。可以看出各地的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量結(jié)果從大到小，為鮮品＞陰干＞曬干＞烘干。通過實驗證明，鉤藤藥材在加工炮制時，加熱或溫度過高致有效成分鉤藤堿和異鉤藤堿分解，使含量下降，從而導(dǎo)致藥效降低。因此，為了鉤藤藥材采收后，在加工炮制時藥材質(zhì)量不受到影響，采用合理的加工炮制方法是必要的。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典［S］．2010版一部．北京:化學工業(yè)出版社，2010:240．

［2］郭星等．HPLC法測定不同產(chǎn)地鉤藤中異鉤藤堿和鉤藤堿的含量［J］．河南中醫(yī)，2010，30(1)．

［3］仲崇林等．反相高效液相色譜法測定植物鉤藤中鉤藤堿含量［J］．應(yīng)用化學，2008，23(9)．

［4］王英鋒等．高效液相色譜測定鉤藤中鉤藤堿異鉤藤堿含量［J］．藥物分析雜志，1999，19(1):56－57．

［5］梁勇等．鉤藤中總生物堿的提取分離研究［J］．中國熱帶醫(yī)學，2006，6(1)．

［6］黃卓謙等．鉤藤煎煮過程中化學成分變化的研究［J］．西北大學學報(自然科學版)，2008，38(5)．

［7］王盟等．鉤藤總生物堿的研究進展［J］．實用醫(yī)藥雜志，2008，25(3)．

R931.4

A

1007－8517(2012)13－0027－02

貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)課題，合同編號:黔產(chǎn)合中藥字【2010】5039號。

2012.05.02)