LGT不同表達對結直腸癌術后FOLFOX方案鞏固化療的遠期生存的分析

張靜 裴毅

LGT不同表達對結直腸癌術后FOLFOX方案鞏固化療的遠期生存的分析

張靜①②裴毅①

目的：探討LGT不同表達對結直腸腺癌患者手術后應用FOLFOX方案鞏固治療后遠期生存的影響。方法：選取2006年1月-2009年1月首次入院并行手術治療的結直腸腺癌患者55例，手術前行SELDI檢測，留取指紋圖。術后給予標準FOLFOX方案鞏固化療4～6周期。隨訪至2011年8月。觀察2010年至今，不同年齡、性別，LGT表達與否條件下，無疾病進展生存期和中位生存期兩組的差異。結果：年齡以65歲分組，兩者在無疾病進展生存期和中位生存期上比較差異均無統計學意義(7.85：6.50，P=0.770；15.75：13.00，P=0.517)。按性別分組，男女在無疾病進展生存期和中位生存期上比較差異均無統計學意義(8.50：4.95，P=0.152；17.00：10.00，P=0.203)。LGT陽性者，無疾病進展中位生存期為2.8個月，LGT陰性者，無疾病進展中位生存期為10個月，差異有統計學意義(P=0.000)。LGT陽性者，中位生存期為5.85個月，LGT陰性者，中位生存期為18.5個月，差異有統計學意義(P=0.000)。結論：手術前LGT表達組無疾病進展及中位生存期遠低于LGT陰性組。建議手術前如LGT為陽性表達，首先控制LGT，待LGT表達正常后再行手術，以確保治療后效果。

結直腸癌； 鞏固化療； 危重病人預警蛋白質； 預后

結直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤，發生率僅次于胃癌和食管癌，在我國常見惡性腫瘤死亡中，結直腸癌患者在男性占第五位，女性占第六位。近20年來，結直腸癌的發病率在逐漸增加，同時，其發病年齡趨向老齡化。結直腸癌術后5～10年生存率，化療作為根治術的診時有25%的患者已經存在轉移病變，根治術后50%的患者會發生復發或轉移，因此絕大多數結直腸癌患者需要化學治療。多年來的臨床研究表明，根治術后輔助化療可明顯改善結直腸癌的生活質量和存活。根據NCCN輔助治療有一定價值。根據NCCN指南，結直腸癌輔助化療首選FOLFOX方案。

影響結直腸癌患者預后的因素很多，涉及到臨床、病理特點、各系統的綜合作用等。確定有效的預后參數，能正確估計預后，有助于治療方案的制定[1]。本研究分析了55例經手術治療，術后輔以FOLFOX方案鞏固化療的結直腸癌患者，分析LGT不同表達對其鞏固治療后遠期生存的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本科2006年1月-2009年1月收治的首次入院，入院時均進行危重病人預警蛋白(LGT)檢測，并行手術治療的結直腸腺癌患者55例，術后均進行標準FOLFOX方案鞏固化療(奧沙利鉑85 mg/m2，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，d1、d2；氟尿嘧啶400 mg/m2，靜推，d1、d2，600 mg/m2，持續靜脈泵入22 h，d1、d2；每兩周重復)4～6周期。其中男35例，女20例，中位年齡62歲，入組時均經病理學診斷證實，且排除影響血清蛋白質水平的疾病。以該患者就診時間(入組時間)為生存時間起點，在2011年8月30日前對上述患者疾病狀態(進展與否)及生存狀態(死亡與否)通過查閱病歷、電話隨訪的方式獲得。

1.2 實驗方法 分組：(1)年齡以65歲分組；(2)性別以男女分組；(3)以LGT表達表達與否分組。

實驗設備：PBS-Ⅱc表面增強飛行時間質譜儀(SELDITOF-MS)、能量吸收分子EMA，CM10型蛋白質芯片及相應分析軟件ProteinChip 3.2.0、Biomarker Wizard (美國Ciphergen公司)，HFPFS緩沖鹽(Sigma公司)，CHAPS緩沖鹽(Sigma公司)。

實驗步驟：(1)血清樣本處理：血清標本冰浴解凍，10 000 r/min離心2 min。取血清樣品5 μl，加10 μl 9 M尿素。振蕩30 min，加180 μl緩沖液稀釋(100 mmol/L NaOAc pH 4.0)，4 ℃ 10 000 r/min離心2 min，取上清液待用。(2) 芯片處理：將芯片放入盛有100 mmol/L鹽酸的試管中，振蕩4～5 min，HPLC水沖洗，將芯片安裝到Bioprocessor上，每孔加200 μl結合緩沖液，室溫振蕩5 min，棄掉液體，重復一次。每孔上樣100 μl已處理好的血清樣品，室溫振蕩1 h。棄掉液體，用200 μl結合緩沖液(100 mmol/L NaOAc pH4.0)洗2次，每次5 min，拆下芯片，待芯片自然干燥，然后每點加SPA 0.5 μl ， 兩次。干燥，用CM10蛋白芯片閱讀儀讀芯片。 SPA=Sinapinic acid為CAN(乙腈)50 %和TFA(三氟乙酸)0.5 %的飽和溶液。(3)數據收集：設定檢樣激光強度195，檢測靈敏度8，收集數據質荷比(M/Z)范圍1.0～2.0 KD。收集位置20～80。平均每點收集20次，收集總點數是140次。在每次實驗數據收集前，用All-in-one蛋白芯片校正儀器，使之誤差<0.1 %。以質量控制蛋白質芯片做重復性檢測，其峰值的大小及其強度的變異系數(CVS)均控制在0.05 %和15 %以下，具有良好的重復性。

危重病人預警蛋白(LGT)檢測：即SELDI檢測方法(全稱是[SELDI-TOF-MS]，即表面增強激光解析離子飛行時間(time of flight)質譜技術)。出現在質核比(M/Z)11 000+H至12 000+H之間的蛋白質指紋即為LGT指紋，以出現單峰或以上質譜峰簇(cluster)且豐度值≥5%為LGT陽性[2]。

1.3 統計學處理 觀察無疾病進展生存期的中位生存期。所有數據均采用SPSS 16.0統計軟件進行處理。統計學方法選擇Kaplan-Meier法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 影響術后結直腸癌患者無疾病進展生存時間的單因素分析見表1。

表1 影響術后結直腸癌患者無疾病進展生存時間的單因素分析

從表中可以看出，LGT陽性患者無疾病進展生存時間僅為2.80個月，而LGT陰性患者的無疾病進展生存時間為10.00個月，其無疾病進展生存時間曲線如圖1。

圖1 不同LGT表達無疾病進展生存時間曲線圖

結腸癌與直腸癌患者的中位無疾病進展生存時間分別為7.2個月和6個月；男性和女性結直腸癌患者的中位無疾病進展生存時間分別為8.50個月和4.95個月；<65歲與≥65歲結直腸癌患者的中位無疾病進展生存時間分別為7.85個月和6.50個月，以上各組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

手術前LGT為陽性者中位無疾病進展生存時間為2.8個月，陰性者為10個月(字2=14.205，P<0.01)，說明LGT陽性與陰性術后結直腸癌患者無疾病進展生存時間不同。

2.2 影響術后結直腸癌患者生存期的單因素分析見表2。

表2 影響術后結直腸癌患者生存期的單因素分析

結腸癌與直腸癌患者的中位生存時間分別為14.5個月和12個月；男性和女性結直腸癌患者的中位生存時間分別為17個月和10個月；<65歲與≥65歲結直腸癌患者的中位生存時間分別為15.75個月和13個月，以上各組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

LGT為陽性者中位生存時間為5.85個月，陰性者為18.50個月(見圖2)，LGT陽性與陰性術后結直腸癌患者生存期不同(字2=14.287，P<0.05)。

圖2 不同LGT表達結直腸癌患者的生存曲線圖

3 討論

LGT(危重病人預警蛋白質組指紋)是筆者于2005從一組瀕臨死亡的晚期腫瘤患者的血清中捕獲到的一組促進腫瘤患者病情惡化的異常蛋白質組，其指紋標志是：m/z：11 100+H～11 900+H，豐度>10%，后經過數年的臨床觀察，發現“LGT”的確可作為預示腫瘤進展的重要指標，且LGT蛋白質組指紋的出現與死亡有明顯的相關性[3-4]。

大家對結直腸癌輔助化療的有效性才達成共識。十多年來，眾多學者致力于結直腸癌輔助化療的新藥開發和新方案設計，并開展了一系列大規模臨床研究，結直腸癌輔助化療目前FOLFOX4方案為結直腸癌的標準輔助化療方案[5-6]。本研究比較分析了LGT不同表達對結直腸癌術后FOLFOX方案鞏固化療后中位生存和無疾病生存的差異。表1從性別、年齡和治療前是否存在LGT表達對無疾病進展生存期進行比較分析，結果表明：性別和年齡對無疾病進展生存期沒有影響，而LGT表達與否，其無疾病進展生存期有顯著差異。LGT表達陽性患者，手術和FOLFOX方案標準化療后，無疾病進展生存期遠低于LGT表達陰性患者。表2選用上述三個因素，對中位生存期進行比較分析，結果表明：年齡、性別與中位生存期無關，LGT表達陽性患者，中位生存期明顯較LGT表達陰性患者低，差異有統計學意義。

綜上所述，LGT做預后的判斷，有較明確的臨床意義。手術前LGT表達陽性者，無論術后是否進行標準化療，其無疾病進展生存期的中位生存期均低于LGT表達陰性者。因此，手術前行LGT檢測是必要的，而且建議：手術前對LGT表達陽性的患者行LGT消除治療，以確保術后有較長的生存時間和生存質量。

[1] Enblad P， Adami H O， Bergstrom R. Improved survival of patients with cancer of the colon and rectum[J]. Natl Cancer Inst， 1988，80(16): 586-590.

[2] 裴毅， 郭素堂， 王清馨， 等. 一組新發現的腫瘤功能性蛋白質組的指紋圖譜[J]. 腫瘤研究與臨床， 2005， 17(3): 153-155.

[3] Buyse M， Zeleniuch J A， Chalmers T C.Adjuvant therapy of colorectal eancer: Why we still don’t know[J]. JAMA，1988，259(89): 3571.

[4] 裴毅， 郭素堂， 王清馨， 等. LGT蛋白質組對腫瘤患者臨床意義的首次觀察[J]. 腫瘤研究與臨床， 2005， 17(3): 156-158.

[5] Zahid H S. Cisplatin: mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance[J]. Oncogene， 2003， 22(47): 7265-7279.

[6] 王麗娜， 李邦華， 魏春燕， 等. ERCC1表達與Ⅱ、Ⅲ期結腸癌術后輔助化療預后的關系[J]. 實用臨床醫學， 2010， 11(4): 4-6.

Analysis of LGT Different Expression and Long-term Survival Using FOLFOX Chemotherapy after Colorectal Cancer Surgery

ZHANG Jing，PEI Yi.

Objective: To study the different expression of LGT and Long-term survival of FOLFOX chemotherapy after colorectal cancer surgery. Method: Choose 55 patients use surgical treatment of parallel colorectal，between January 2006 to January 2009.All the patient detect SELDI to get the map of fingerprint ，use four to six cycles of FOLFOX chemotherapy，follow-up to August 2011. A different age， gender， LGT express or not， under the conditions of disease progression of survival and without a median of two groups of the differences. Result:In the absence of survival and disease progression median survival were no significant difference (7.85， 6.50，P=0.770;15.75:13.00，P=0.517)between ≥65 years old group and< 65 years old group;There is no significant difference among the men and women group (8.50，4.95，P=2.057;17.00:10.00，P=1.622).No disease progress for a median is 2.8 months in LGT positive patient， 10 months in LGT negative patient(P=0.000).Progress for a median is 5.85 months in LGT positive patient， 18.5 months in LGT negative patient(P=0.000).Conclusion:Both the no disease progress for a median and progress for a median in LGT positive group is far lower than the LGT negative group.Before the operation such as LGT positive for express， first control LGT， LGT expression to normal after poste operation， to ensure that the treatment effect.

Colorectal cancer; Consolidate chemotherapy; LGT; Prognosis

Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

Medical Innovation of China，2012，9(23):006-008

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.23.003

①山西醫科大學 山西 太原 030001

②山西省腫瘤醫院

裴毅

2012-04-16) (本文編輯：陳丹云)