采收期和加工方法對馬齒莧中槲皮素含量的影響

劉淑梅 李夢陽 陽建軍

湖南省郴州市第一人民醫院，湖南 郴州 423000

采收期和加工方法對馬齒莧中槲皮素含量的影響

劉淑梅 李夢陽 陽建軍

湖南省郴州市第一人民醫院，湖南 郴州 423000

目的:比較不同采收期和不同產地加工方法對馬齒莧藥材槲皮素含量的影響。方法:90%乙醇—25%鹽酸 (4∶1)為混合溶劑提取槲皮素;用高效液相色譜法測定馬齒莧中槲皮素含量。色譜柱:kromasil C18(4.6mm ×250mm，5um);流動相:甲醇－0.2%磷酸 (46∶54);流速:1.0ml/min;柱溫:32℃;檢測波長:360nm。結果:不同采收期和不同加工方法的馬齒莧藥材中槲皮素含量存在差異。結論:采收期和加工方法對馬齒莧藥材質量存在一定影響。

馬齒莧;HPLC;槲皮素;加工方法;含量測定

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧 (Portulaca oleracea L.)的干燥全草，馬齒莧為一年生肉質草本植物，應用歷史悠久，是一種傳統的藥食兼用植物，具有清熱解毒、涼血止血的功效。全草含甲基腎上腺素、香豆精、黃酮、強心苷等［1］，有降血糖、抗衰老、提高機體免疫功能、抗動脈粥樣硬化等作用［2］。現代臨床藥理認為，馬齒莧中黃酮類化合物是有效成分之一。所含的黃酮類化合物包括槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素［3］。槲皮素具有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂、擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量等作用。近年研究表明，槲皮素在癌癥防治上具有重要的作用［4］。本文作者已在以往課題中研究了產地加工方法對馬齒莧藥材的質量存在影響［5］，為了進一步探究對其他成分的影響，本實驗遂采用HPLC法測定馬齒莧中黃酮類成分之一的槲皮素含量，為馬齒莧藥材的質量控制提供一定依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC28A高效液相色譜儀，島津SPD26AV紫外－可見檢測器。AUW220D型電子天平 (日本島津公司)。

1.2 試藥 槲皮素對照品:購于中國藥品生物制品檢定所，批號1000812200406，供含量測定用。馬齒莧樣品:采摘于郴州市附近郊區。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，流動相采用色譜純溶劑，水為樂百氏純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 kromasil C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5u);甲醇:0.2%磷酸溶液 (46∶54)流動相;檢測波長:360nm;進樣量:20ul;流速:1.0mL/min;柱溫:33℃。結果槲皮素峰與樣品中其它成分峰能較好分離。理論塔板數以槲皮素計不低于3000。在此條件下，對照品溶液與供試品溶液色譜圖見圖1。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取120℃干燥4h的槲皮素對照品10.05mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45um微孔濾膜過濾后作為對照品溶液，濃度為100.5ug/mL。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末1g，精密稱定，加入90%乙醇－25%鹽酸 (4∶1)混合溶液20ml，85℃回流2h，放冷，用混合溶液補重，搖勻，濾過，用0.45um微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

圖1 槲皮素對照品（A）和1號馬齒莧藥材樣品（B）色譜圖

2.3 線性關系考察 取對照品溶液0.2，0.5，1.0，1.3，1.5，2.0mL，分別置10mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10uL進樣分析，以槲皮素峰面積為縱坐標y，以對照品溶液濃度 (ug·mL)為橫坐標x，進行線性回歸分析，得槲皮素回歸方程為:y=26334x+574.35，r=0.9999，槲皮素在0.02～0.20ug范圍內與峰面積呈現良好線性關系。

2.4 精密度試驗 在上述色譜條件下，取同一供試品溶液連續測定6次，進樣量為20ul，測量槲皮素峰面積，計算其峰面積RSD=0.84% ，結果表明精密度良好。

2.5 穩定性試驗 在上述色譜條件下，取同一供試品溶液，測定6次，每次間隔2h，供試品中槲皮素峰面積的RSD為2.44%，結果表明供試品溶液在10h內穩定。

2.6 重復性試驗 取同一份樣品，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，以供試品中槲皮素含量計算RSD為2.04%，證明此方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗 取已知槲皮素含量的11號樣品0.5g(9份)，精密稱定，分別精密加入濃度為0.0402mg/mL的槲皮素對照品溶液1.9，2.4，2.9mL(各3份)，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定，計算回收率，結果平均加樣回收率為98.46% ，RSD=1.76%，說明此方法穩定可靠。

2.8 樣品測定 取不同來源的馬齒莧藥材各3份，按

2.2.2 項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，分別測定槲皮素含量，結果見表1。

表1 樣品中槲皮素含量測定結果 (n=3)

3 結果及討論

3.1 含量結果分析 實驗結果表明，不同采收期和不同加工方法對馬齒莧藥材中槲皮素含量有影響，其中不同采收期以5月含量相對較低，6月和10月含量較高。加工方法樣品中，燙后曬干和蒸后曬干幾乎是陰干含量的6倍多、直接曬干的2倍。另外實驗過程中也發現陰干樣品和直接曬干的樣品顏色發黑、質輕。由此可見，藥材采收時間和產地加工方法對馬齒莧中槲皮素含量都有影響。相比之下，產地加工方法的影響更明顯。槲皮素是馬齒莧藥材諸多黃酮類成分之一，其含量盡管不能完全反映藥材的質量，但從某種角度來說，采收期和加工方法會對馬齒莧藥材中的化學成分產生一定影響，進而會影響藥材質量。另外，馬齒莧鮮藥材肉嫩多汁，在放置過程中很容易腐爛變質。因此，需選擇適宜時間進行采收，采收后更需要及時采取合適的方法對原藥材進行加工干燥處理，以免影響藥材質量。

3.2 測定條件的確定 在色譜條件的考察過程中，發現流動相的pH值、柱溫對色譜峰的峰形及分離度有較大影響。通過比較，最后確定流動相為甲醇－0.2%磷酸溶液 (46∶54)，柱溫32℃，此條件下得到的色譜峰峰形及分離度較好，且基線穩定。

3.3 提取條件的確定 馬齒莧藥材目前沒有明確的有效成分，本實驗遂選取其有效成分之一的黃酮類化合物槲皮素作為考察指標，但通過實驗預試，馬齒莧藥材中槲皮素含量低，直接測定效果不好，因此本實驗采取酸水解后測定其槲皮素的含量，獲得滿意效果。并對水解條件進行了選擇，考察了不同濃度的乙醇、甲醇以及提取時間和鹽酸濃度及酸水解時間的影響。結果顯示，用90%乙醇:25%鹽酸(4:1)回流2h，馬齒莧中槲皮素含量最高且峰形好，此方法可以用于控制馬齒莧藥材的質量。

［1］牛廣財，朱丹.馬齒莧化學成分及其藥理作用研究進展［J］.安徽農業科學，2005，33(6):1090.

［2］中華本草編委會.中華本草［M］.上海:上海科學技術出版社，1999:754.

［3］姚佳琪，孟娜，宋少江等.馬齒莧化學成分研究［J］.沈陽藥科大學學報，2007，24(12):751.

［4］崔山風.槲皮素的研究進展［J］.西北藥學雜志，2006，21(6):279－280.

［5］劉淑梅，孫濟平，彭小冰等.不同產地加工方法對馬齒莧質量影響的研究［J］.貴陽中醫學院學報，2010，33(1):24.

R927.2

A

1007－8517(2012)22－0031－02

劉淑梅 (1975－)，女，碩士研究生，主要從事院內制劑研究與質量控制。E－mail:chenzhou129@sohu.com。

2012.10.10)