不同樹種栽培松杉靈芝的試驗

邢宗杰

(黑龍江大興安嶺地區圖強林業局,黑龍江 漠河 165301)

松杉靈芝 (Ganoderma tsugae)是靈芝的一種,其有效成分是普通靈芝的幾十倍[1]。其人工品與野生品無明顯的質量差異[2]。所治病種涉及心臟、血管、消化、神經、內分泌、呼吸等各個系統,尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠的防治以及延緩衰老的作用十分顯著[3],極具栽培和開發價值。

筆者曾于2006—2009年,對松杉靈芝人工代料栽培進行了初步試驗,并取得一定成果和可觀的經濟效益。本文報道以不同樹種為原料栽培松杉靈芝試驗的結果,供研究人員和栽培者參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗菌株為采集自圖強林業局奮斗林場52林班的野生松杉靈芝幼體經組織分離獲得。

母種培養基a為PDA培養基,配方為：馬鈴薯200 g、蔗糖20 g、水1 000 mL、瓊脂18～ 20 g。母種培養基b配方為水冬瓜赤楊木塊200 g、食糖20 g、食鹽2 g、清水1 000 mL。

原種培養基配方為樺木木屑78%、麩皮20%、食糖1%、豆餅粉2%、石膏1%,每千克培養基中另加維生素B10.1 g,pH值調至6.5。栽培試驗采用5個樹種：水冬瓜赤楊(Alnus cremastogyne Burk)、榆樹 (Ulmuspibirian Elm)、鉆天柳 (Chosenia arbutifolia)、落葉松 (Larix gmelinii)、白樺(Betula platyphylla suk)。

1.2 試驗方法

(1)母種分離與純化。按常規方法制作PDA母種培養基,制成斜面試管,常溫下放置7天,觀察有無雜菌發生,備用。將干水冬瓜赤楊木加工成綠豆大小的小木塊,將食糖、食鹽溶于1 000 mL水中,制成營養液。將小木塊浸水10小時,取出后瀝水1小時裝管至1/2高,經滅菌后備用,作為母種培養基b。

在無菌條件下,對基本成熟、長勢有后勁的野生松杉靈芝子實體,用75%的酒精初步消毒。手術刀經酒精燈灼燒,冷卻后,切削子實體扇面,每切削一次,燒一次手術刀并冷卻,如此3～4次后,將子實體切成黃豆粒大小的小塊,并迅速接入斜面試管及小木塊試管中。在25～28℃條件下避光培養,24 h后觀察接入兩種不同培養基的子實體組織,周圍均發生萌動現象的,表明其已成活。當PDA培養基試管菌絲長到5 mm時,取其頂端優勢菌絲,移接到備用試管內進行再次培養提純,小木塊試管不作處理,備用。

(2)原種制作。按設計配方稱取各種配料,加清水拌勻,裝入 500 mL菌種瓶,經 0.14 MPa、126℃滅菌2 h,冷卻到30℃以下后在無菌條件下接入兩個不同培養基母種,于25～28℃環境下培養30～45天,裝瓶備用。

(3)菌棒制作。樹木進入休眠期 (2月)后,砍伐直徑8～10 cm的水冬瓜赤楊、榆樹、鉆天柳、落葉松、白樺5個不同樹種,截成15 cm的小段,以人工手段將含水量降到40%左右,裝入16.5×33×0.005(cm)的聚乙烯塑料袋,常壓100℃滅菌12 h,冷卻后接入原種,于24～28℃條件下培養,培養室相對空氣濕度為40%～50%,經30～40天,菌絲長透菌木。

(4)出芝管理。松杉靈芝屬高度腐生菌,只有寄生木材被高度腐朽,菌絲貯存大量養分后產生子實體,一般情況在第二年才可發生大量子實體[4]。根據這一特性,進入深秋后 (9月15日)將長好菌的菌木入棚埋入土中越冬,第二年5月下旬,除去菌木上覆蓋的厚土,留1～2 cm薄土層,覆膜,進行保溫保濕培養。培養前期濕度為70%～80%,現菌后控制在80%～90%,棚內溫度保持14～28℃,光照控制在100～300 lx,CO2濃度調節到0.1%以下。靈芝現蕾到成熟大約需40天,見子實體邊緣無生長點,有孢子粉彈射時停水采收。

2 結果與分析

2.1 不同母種培養基的生長情況 試驗結果表明,兩種培養基的菌絲生長速度無明顯差異,萌動時間均為24 h,滿管時間培養基a為30天,培養基b為32天,平均日生長速度分別為4.20 mm和3.97 mm。分析原因可能是,在避光,溫、濕度條件一致情況下,PDA培養基和小木塊培養基所含營養都能滿足靈芝菌絲正常萌動、生長的需要。

2.2 不同母種培養基菌絲老化情況 觀察發現,不同母種培養基菌絲老化速度有很大的差異,出現老菌皮時間培養基a為17天,而培養基b為115天。分析原因,對PDA培養基,菌絲只能生于培養基表面,一旦遇有微光和適生氣體,菌絲便失去生長空間,出現老化,而對小木塊培養基,菌絲生存空間大,即便長滿管后還可向木質中繼續生長,因此老化推遲。

2.3 不同樹種結實情況 5種試驗樹種均能發生靈芝子實體 (圖1),其中木質松軟的樹種結實要大一些,但子實體質地不如木質較硬的樹種上的致密堅硬。同時木質松軟的樹種結實后,從手感上感覺其菌木已幾乎被完全分解吸收,沒有第二年再出芝的可能,而木質較硬的樹種則不同。經分析認為：木質松軟的樹種其組織結構不夠緊密,相對而言,木質素和纖維素不足,不能提供靈芝多年生長所需的必需營養,因而不適用多年 (2～3年)靈芝再生。而木質較硬的樹種則在第二年還可以產生優質的靈芝子實體 (表3)。

表3 不同樹種結實及菌木腐熟情況

2.4 不同樹種的發菌速度 5個樹種的栽培袋置于同一培養室內進行培養,通過觀察,發現菌絲長滿段木的時間有著一定差異：菌絲長滿段木時間從快到慢依次為水冬瓜赤楊 (30天)、鉆天柳 (33天)、樺樹 (35天)、落葉松 (42天)、榆樹 (50天)。根據不同樹種的材質硬度和菌絲長滿段木時間綜合分析,菌絲在段木上的生長速度與材質硬度及輸導組織的密度有關。

圖1 5個樹種出芝情況

3 小結與討論

3.1 綜上可見,由于松杉靈芝母種極易老化,因此生產母種時,應采取小木塊培養基為好。同時也可考慮用PDA培養基提純后,再轉入小木塊培養基,此方法更便于貯存。以后使用時,只要將1塊小木塊接入PDA斜面培養基,10天左右即可得到純正母種。另外,PDA培養基只能在0℃以上保存,而小木塊培養基則可置于-40℃保存,不影響日后擴繁。松杉靈芝菌絲在段木上的生長速度與材質的硬度及材質疏導組織的密度有直接關系。

3.2 試驗證明,采用的5個樹種均可用于生產松杉靈芝,所產靈芝品質差異不明顯,在選擇樹種時,主要應從當地的資源條件考慮。樹種形成主要依靠天然更新和人工植樹,建議勿選擇落葉松,因為該樹種生長較慢。其他4個樹種除了天然更新和人工造林形成林木之外,都有著較強的萌生能力,用于栽培松杉靈芝,不僅能保證原料來源,而且對保護和合理利用森林資源都具有重要意義。

[1]李希政,夏宏志,李氵蒙,等.松杉靈芝生產雜菌原因及控制[J].中國食用菌,2011(2)：64-65.

[2]張 潔,姜士成.松杉靈芝的質量標準研究 [J].長春中醫學院學報,2005,21(1)：62-63.

[3]中國科學院微生物研究所檢測鑒定書 〔2009〕微檢字第095號.

[4]王 柏,張明杰,徐金丹.松杉靈芝的馴化栽培初探 [J].中國食用菌,1997(5)：14.