梯度滲漉法提取丹參有效成分的工藝

劉少文

（廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

丹參為唇形科中藥丹參的根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之等功效。文獻報道[1,2]，脂溶性的丹參酮類成分，水溶性的丹參酚酸類成分為其主要有效化學(xué)成分。中藥丹參廣泛的應(yīng)用于現(xiàn)有中成藥處方中，但是在工藝上僅僅將丹參酚酸類成分或丹參酮類成分單一的進行提取，作為治療疾病中的有效成分，從而造成中藥丹參的浪費。因此，我們通過丹參有效成分的性質(zhì)[3]，對丹參的提取方式進行了系統(tǒng)的研究，為找出同時提取丹參中丹參酮類成分和丹參酚酸類成分的簡便方法，將中藥丹參進行充分合理的利用，更為丹參有效成分最大限度的進行提取提供一種實驗參考，現(xiàn)將實驗研究結(jié)果報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

儀器Sartorius BP211-D型電子天平（美國梅特勒公司）；UVVIS8500紫外可見分光光度儀（安捷倫）；BUG25-12型超聲波清洗機。

1.2 試藥的選擇

丹參藥材 （產(chǎn)于四川，購自廣州清平中藥材市場）；丹參酮IIA標(biāo)準(zhǔn)品（購于中國藥品生物制品檢定所，生產(chǎn)批號：20110214）、丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品（購于中國藥品生物制品檢定所，生產(chǎn)批號：20110112），乙醇由我院自制（無水乙醇與蒸餾水進行配比，分別配成濃度為50%、65%、95%的乙醇溶液）。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參提取工藝的比較

脂溶性和水溶性兩類成分是丹參中的主要成分，其中我院通過丹參酮IIA、丹酚酸B的含量指標(biāo)作為對回流法、一般滲漉法、梯度滲漉法的浸提物進行含量的測定，提取步驟見如下操作。

2.1.1 中等濃度乙醇回流法

采用天平稱取丹參顆粒約50g，采用10倍量的65.0%乙醇進行回流提取，提取時間為1.5h，共提取2次，將提取液合并后定容，分別測定丹參酮IIA和丹酚酸B的含量。

2.1.2 一般滲漉法[4]

采用天平稱取丹參粗粉約50g，采用10倍的65%乙醇浸泡過夜后進行滲漉，滲漉的流速為2.5mL/min，將滲漉液定容后，測定丹參酮IIA和丹酚酸B含量。

2.1.3 梯度滲漉法

天平稱取丹參粗粉約50g，裝入滲漉提取裝置中，采用95%的乙醇浸泡過夜后開始進行滲漉，收集藥材量約10倍的滲漉液，后采用濃度為50%的乙醇溶液進行第2次的滲漉，收集藥材量10倍量的滲漉液，收集95%乙醇滲漉液測定丹參酮IIA的含量，50%的乙醇滲漉液測定丹酚酸B的含量。

2.1.4 比較結(jié)果

梯度滲漉法所得浸提物中丹參酮IIA和丹酚酸B含量均高于其他法，且操作簡便，冷提取使有效成分不被破壞，穩(wěn)定性好，故認(rèn)為梯度滲漉法是同時提取丹參中脂溶性成分和水溶性成分較好的方法。

2.2 丹參梯度滲漉法提取工藝考察

2.2.1 取丹參藥材粗粉約50g，分別稱取3份，分別用95%、85%、75%的乙醇5mL溶脹1h后裝筒，用提取溶媒50mL浸漬24h后，各用12倍量不同濃度的乙醇開始滲漉，滲漉速度為2mL /min，收集滲漉液，定容，測定丹參酮含量及干膏收率。

2.2.2 取丹參藥材粗粉約50g，分別稱取3份，分別用低濃度60%、50%、40%的乙醇5mL溶脹1h后裝筒，用提取溶媒50mL浸漬24h后，各用12倍量不同濃度的乙醇開始滲漉，滲漉速度為2mL/min，收集滲漉液，定容，測定丹酚酸B含量及干膏收率，

2.2.3 上述不同濃度梯度滲漉結(jié)果表明，采用95%的乙醇滲濾提取丹參酮類成分的含量，提取率較高，固體物的收率較低，因此選用95%的乙醇進行滲漉；而采用50%的乙醇滲濾提取丹酚酸B的含量，提取率較高，純度相差不大，因此選擇50%的乙醇進行低濃度的滲漉。

2.3 正交實驗設(shè)計

以丹參酮IIA的含量已經(jīng)干膏的收率作為實驗設(shè)計的指標(biāo)，考察不同的滲漉溶劑的量、溶脹的時間和滲漉速度對提取后有效成分質(zhì)量的影響，結(jié)果見表1、表2。

表1 丹參中脂溶性有效成分提取工藝因素水平表

表2 正交實驗結(jié)果

由表1、表2確定最佳的醇提工藝條件為：A2B3C3，丹參藥材粗粉，溶脹時間為120min，采用10倍的乙醇量進行滲漉，流速為4.0mL/min。

3 小 結(jié)

通過采用梯度滲漉的方法可以將丹參中脂溶性和水溶性的成分分別提取出來，經(jīng)過梯度提取的有效成分的效率較高，同時提取工藝相對簡單[5,6]，簡化了純化精制流程，提取的過程不用經(jīng)過加熱等操作環(huán)節(jié)，從而使丹參中的有效成分不受破壞。

[1]胡小成,曹鳳梅.丹參的藥理、臨床應(yīng)用與制劑作用[J].中國新醫(yī)藥,2006,3(1):6-12.

[2]杜冠華,張均田.丹參水溶性有效成分-丹酚酸研究進展[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2004,20(5):394-398.

[3]劉紹華,唐獻蘭,楊衛(wèi)豪,等.滲漉法提取兩面針活性成分工藝的研究[J].中草藥,2006,37(3):373-375.

[4]騫紅玉,吳勁松.當(dāng)歸滲漉提取工藝的研究[J].湖南中醫(yī)雜志,2008,24(3):94-96.

[5]張濤,趙正保.滲漉法提取祖師麻中瑞香素的工藝研究[J].中國藥物與臨床,2008,8(4):331-333.

[6]李承珠,李曉紅,董作仁,等.丹參抗凝作用的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志,2001,3(2):297.