類風濕關節炎及系統性紅斑狼瘡患者血液免疫指標的分析與比較

謝健敏 莫石蘭 葉珮璣

廣東省佛山市順德區第一人民檢驗科，廣東佛山 528300

類風濕關節炎及系統性紅斑狼瘡患者血液免疫指標的分析與比較

謝健敏 莫石蘭 葉珮璣

廣東省佛山市順德區第一人民檢驗科，廣東佛山 528300

目的分析和比較類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）及系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）患者血液中的免疫指標，從而實現對這兩種自身免疫性疾病的準確診斷。方法分別選擇RA患者46例為RA組、SLE患者40例為SLE組、健康體檢者30例為對照組，用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體（ANA），免疫印跡法檢測可提取核抗原（ENA）多肽抗體及ds-DNA，分析各種抗體在不同患者組和對照組的陽性率。結果在RA患者組中，ANA陽性率為37.0%，抗ds-DNA抗體陽性率為13.0%，抗ENA多肽抗體陽性率為19.6%，三種抗體聯合檢測陽性率為50.0%；SLE患者組中，陽性率相應分別為92.5%、70.0%、87.5%以及95.0%。結論自身免疫性疾病患者體內存在多種自身抗體，ANA、抗ds-DNA、抗ENA多肽抗體聯合檢測可以相互補充，提高檢出率，有利于自身免疫性疾病的診斷，避免誤診和漏診。

類風濕關節炎；系統性紅斑狼瘡；血液免疫指標；抗核抗體；抗ds-DNA；抗ENA多肽抗體

自身免疫性疾病（autoimmune disease）是指由機體自身產生的抗體或致敏淋巴細胞破壞、損傷自身正常的組織和細胞成分，導致組織損害和器官功能障礙的原發性免疫性疾病[1]。類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是以多發性和對稱性增生性滑膜炎為主要表現的慢性全身性自身免疫性疾病，該病發病年齡為25～55歲，也可見于兒童，女性發病率比男性高3～5倍，絕大多數患者血漿中有類風濕因子（rheumatoid factor，RF）及其免疫復合物存在；系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）也是一種比較常見的全身性自身免疫病，由抗核抗體（antinuclear antibodies，ANA）為主的多種自身抗體引起，多見于年輕女性，男女之比接近1∶10[2]。本研究通過分析和比較RA及SLE患者血液中的免疫指標，主要包括ANA、抗雙鏈DNA抗體（double-stranded DNA，抗ds-DNA抗體）以及抗ENA多肽抗體譜（extractable nuclear antigen， ENA，可提取核抗原），從而實現對這兩種自身免疫性疾病的準確診斷，避免漏診誤診，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年1月～2011年12月來我院接受治療的RA患者和SLE患者共86例。RA組46例，其中男10例，女36例，年齡17～61歲，平均年齡51.4歲，均符合1987年美國風濕病學會修訂的關于RA的診斷標準；SLE組40例，其中男5例，女35例，年齡20～64歲，平均（52.6±3.5）歲，均符合1982年美國風濕病學會制訂的關于SLE的診斷標準；對照組：選取在我院進行體檢的健康者30例，其中男8例，女22例，年齡21～60歲，平均（54.1±5.4）歲，均沒有自身免疫性疾病和其他傳染病，年齡、性別等一般治療資料與RA組和SLE組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 血樣采集

在清晨9點左右采血，患者及健康體檢者均需空腹，采集肘靜脈血4mL（非抗凝血），離心機5 000 r/min，離心5min，取上清，-30℃冷凍保存，待測。

1.3 檢測方法

ANA檢測采用德國歐蒙公司試劑盒，以鼠肝和鼠腎為底物的間接免疫熒光法，同時以核質豐富的Hep-2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物提高ANA檢測的陽性率，操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。

檢測ENA多肽抗體和抗ds-DNA抗體采用免疫印跡法，使用德國IMTEC試劑盒，嚴格按照說明書操作，先用孵育緩沖液以1∶101稀釋血清，在每槽中加入1 mL孵育緩沖液浸條膜1min后吸干液體，每槽中加入1mL稀釋血清樣本，于室溫中在搖床上輕微晃動孵育30 min，然后取出反應槽，吸干，每槽加入1.5 mL稀釋洗滌液，在搖床上輕微晃動洗滌3次，每次5min，吸干，每槽加入1 mL液，室溫下在搖床上輕微晃動孵育30min，同前再洗滌4次后加入顯色劑A 0.5mL+顯色劑B 0.5mL，作用5～10min，待陽性帶顯色清晰后加入0.5mL終止液，2min后棄去液體，洗滌，將薄膜上的顯色帶與陽性標準帶對照即可判斷出陽性自身抗體。

1.4 統計學方法

采用POMS醫用統計程序庫對實驗數據進行統計學處理，計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ANA檢測結果

ANA陽性檢測結果主要表現為4種核型：均質型、顆粒型斑點型、核仁型、核膜型（核周型）[3]。RA患者組中，ANA陽性17例，占37.0%，其中均質型最多，有10例（58.8%），斑點型次之，有5例（29.4%）；SLE患者組中，ANA陽性37例，占92.5%，其中斑點型最多，25例（67.6%），核膜型次之，7例（18.9%）。見表1。

表1 ANA檢測結果分析[n（%）]

2.2 抗ds-DNA抗體檢測結果

抗ds-DNA抗體檢測結果，RA組中，6例（13.0%）表現為陽性，40例（87.0%）為陰性；SLE組中，28例（70.0%）表現為陽性，12例（30.0%）為陰性。見表2。

表2 抗ds-DNA抗體檢測結果分析[n（%）]

2.3 ENA多肽抗體譜檢測結果

ENA多肽抗體譜檢測結果為，RA組9例表現為陽性，占19.6%，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La陽性率分別為0、 10.9%、8.7%、13.0%；SLE組35例表現為陽性，占87.5%，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La陽性率分別為22.5%、37.5%、30.0%、12.5%。見表3。

表3 ENA多肽抗體譜檢測結果分析[n（%）]

2.4 三種抗體聯合檢測結果

RA組ANA、抗ds-DNA抗體、ENA多肽抗體三種抗體的聯合檢測陽性率為50.0%（23/46），SLE組三種抗體聯合檢測陽性率為95.0%（38/40），均明顯高于三種抗體單獨檢測時表現出的陽性率，差異均有統計學意義（P＜0.05）。健康對照組三種抗體的檢測陽性率均為0。見表4。

表4 三種抗體聯合檢測結果分析[n（%）]

3 討論

ANA又稱抗核酸抗原抗體，是一組將自身真核細胞的各種成分脫氧核糖核蛋白（DNP），與DNA、ENA和RNA等作為靶抗原的自身抗體的總稱[4]。ANA在多種自身免疫病中均呈現不同程度的陽性率，在本研究中，RA組和SLE組均檢測出了ANA陽性，陽性率分別為37.0%和92.5%，因此ANA檢測可以成為自身免疫性疾病的初篩指標，尤其是在SLE的診斷中有較重要的意義，但不能夠作為診斷RA或者SLE的特異性指標。ANA陽性檢測結果主要表現為4種核型：均質型、斑點型、核仁型、核膜型（核周型），RA患者以均質型最多，占58.8%，斑點型次之，占29.4%；SLE患者以斑點型最多，占67.6%，核膜型次之，占18.9%。由此可見，RA主要對應均質性，SLE主要針對斑點型，且這兩種核型不會同時均較高比例的出現在同一種疾病中。

高濃度的抗ds-DNA抗體幾乎僅見于SLE，因此抗ds-DNA抗體是診斷SLE的一項重要指標，是SLE的高度特異性抗體[5]。且抗ds-DNA抗體與疾病活動程度，特別是SLE密切相關，因此可以用來作為SLE的診斷和療效觀察的指標[6]。本研究中，抗ds-DNA在RA患者組和SLE患者組的陽性率分別為13.0%和70.0%，健康對照組為檢出陽性，因此是特異性很高的診斷指標。但抗ds-DNA抗體檢測陰性不能排除SLE，可能是由于血液中存在較多的游離DNA抗原，與對應抗體結合，導致抗ds-DNA抗體降至陰性。

抗ENA抗體是能夠特異性識別ENA的一種自身抗體，主要包括抗-Sm抗體、抗-Ro抗體、抗-RNP抗體、抗-La抗體等。不同的自身免疫性疾病產生的抗ENA多肽抗體譜不同，且各種抗體的檢測陽性率也不相同[7-8]。本研究中，RA患者中，未檢測出抗-Sm抗體，且抗-RNP抗體、抗-Ro抗體、抗-La抗體的陽性率分別為10.9%、8.7%、13.0%；SLE患者中，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La陽性率分別為22.5%、37.5%、30.0%、12.5%。由此可見，在不同的自身免疫性疾病中ENA抗體譜呈現不同的組合，有些抗體僅出現于某種疾病中，成為診斷該病的重要指標，如抗-Sm抗體進出現在SLE中，是該病檢測的特異性指標。

本文中，三種抗體聯合檢測，RA患者組和SLE患者組的檢測陽性率分別為52.2%和95.0%，均明顯高于三種抗體單獨檢測時表現出的陽性率（P＜0.05），提示多種抗體聯合檢測可以相互補充，提高檢出率，有利于自身免疫性疾病的診斷。綜上所述，臨床上應該采用多項指標聯合檢測用于自身免疫性疾病的診斷，從而避免漏診和誤診。

[1]胡堅．原發性免疫缺陷病與自身免疫現象[J].實用兒科臨床雜志，2007，23（21）：1605-1607.

[2]Chloraki-Bobota A，Megalakaki C，Repousis P，et al.Prevalence of autoantibodies（ANA，anti ds-DNA，ENA，IMF）and rheumatic syndromes in patients with lymphoproliferative diseases[J].JBUON，2006，11（4）：485-489.

[3]陳興國，張小利，劉春燕，等.系統性紅斑狼瘡患者血清抗dsDNA抗體的表達水平變化及臨床意義分析[J].放射免疫學雜志，2008，16（1）：6-8.

[4]鄒自英，李素華，陳莉.13種自身抗體檢測對SLE的診斷價值及臨床意義[J].細胞與分子免疫學雜志，2007，23（5）：443-446.

[5]馬悅，鄧春艷，徐國莉.抗核小體抗體在系統性紅斑狼瘡診治中的應用價值[J].中國實驗診斷學，2008，12（1）：135-136.

[6]潘揚，華江.抗SmDI抗體在系統性紅斑狼瘡診斷中的應用研究[J].臨床檢驗雜志，2008，26（1）：23-24.

[7]Hoxha A，Ruffatti A，Grypiotis P，et al.Antinudear，anti-dsDNA and anti-ENA antibodies in patients affected with rheumatoid arrhritis or ankylesing spondylitis during treatmentwith infliximab[J].Renmatismo，2006，58（2）：121-126.

[8]鄒世勇.不同非甾體抗炎藥治療類風濕關節炎的臨床療效及對心血管的影響研究[J].中國醫藥科學，2012，2（10）：68.

Analysis and comparison of serum immune index in patients with rheumatoid arthritis or system ic lupus erythematosus

XIE Jianmin MO Shilan YE Peiji
Department of Clinical Laboratory,the First Hospital of Shunde District in Foshan City,Guangdong Province,Foshan 528300,China

ObjectiveTo analyze and compare the serum immune index of rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus and to achieve an accurate diagnosis of these two kinds of autoimmune diseases.Methods46 cases of RA patients were selected as RA group and 40 cases of SLE patients were selected as SLE group,30 cases of healthy persons as the control group,indirect immunofluorescence assay was used to detect the serum ANA,Western blotwas used to detect the ENA polypeptide antibody and ds-DNA,the positive rate of variety of antibodies in RA group,SLE group and control group.ResultsIn RA group,the positive rate of ANA was 37.0%,the positive rate of anti ds-DNA antibody was 13.0%, the positive rate of anti-ENA peptide antibody was 19.6%,positive rate by joint detection was 50.0%.In SLE group,the positive rate were 92.5%,70.0%,87.5%and 95.0%correspondingly.ConclusionPatientswith autoimmune disease always have variousauto antibodies,jointdetection of ANA,antids-DNA and anti-ENA polypeptide antibody can improve the detection rate,they have the advantage of diagnosis of autoimmune diseases,also can avoid misdiagnosis andmissed diagnosis.

Rheumatoid arthritis;Systemic lupus erythematosus;Blood immune indicators;ANA;Anti-ds-DNA;Anti-ENA polypeptide antibody

R593.2

A

1673-7210（2012）11（b）-0043-03

2012-07-04 本文編輯：李繼翔）