Clusterin、Livin、和P53在胃癌中的表達及意義

王國利 李景武

1.河北省唐山市人民醫院藥劑科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民醫院胃腸外科，河北唐山 063001

Clusterin、Livin、和P53在胃癌中的表達及意義

王國利1李景武2

1.河北省唐山市人民醫院藥劑科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民醫院胃腸外科，河北唐山 063001

目的研究Clusterin（簇集蛋白）、Livin（凋亡抑制蛋白）和野生型P53在胃癌組織中的表達及臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測42例胃癌組織和30例正常胃組織中Clusterin、Livin和P53蛋白的表達情況。結果Clusterin、Livin和P53在胃癌組織中的陽性表達率分別為71.4%、85.7%和76.2%，均為高表達；Clusterin、Livin和P53蛋白的表達與與有無淋巴結轉移、分化程度、浸潤深度和TNM分期相關（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的表達在生存時間分別＜3年及≥3年時差異有統計學意義（P＜0.05）。結論Clusterin、Livin、和P53在腫瘤侵襲轉移中發揮了重要作用，檢測Clusterin、Livin和P53的表達可作為預測胃癌的轉移趨勢指標，為胃癌的診治提供臨床參考。

胃癌；簇集蛋白；凋亡抑制蛋白；P53；免疫組化

胃癌是消化系統最常見的惡性腫瘤之一，在腫瘤患者中，其死亡率排在第二位，極大地危害著人類的健康。盡管胃癌通過手術、放化療等取得了一定療效，但遠期效果仍不能令人很滿意，最終多死于復發和轉移，因此探索新的治療方法意義重大。腫瘤的發生發展是多因素、多階段共同作用的結果，大量的研究表明，Clusterin、Livin、P53蛋白與腫瘤的生長和轉移關系密切[1-2]。本研究旨在探討Clusterin、Livin和P53蛋白在胃癌的表達情況以及其臨床意義，為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2008年7月～2009年7月收治的行手術治療的42例胃癌患者的臨床資料。所有患者術前均未進行過化療、放射治療，病理診斷均為胃腺癌。其中男30例，女12例，年齡43～74歲，平均（55.3±6.8）歲，組織學分型：高中分化者16例，低分化者占26例。臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期25例。淋巴結轉移22例。選取30例正常胃黏膜組織標本（距癌旁5 cm以上的胃黏膜組織）作為對照組。

1.2 試劑和方法

兔抗人Clusterin及Livin單克隆抗體，兔抗人P53多克隆抗體（購自美國SANTA CRUZ公司），SP9001試劑盒和DAB顯色試劑盒（北京中山生物技術有限公司）。免疫組織化學染色采用鏈酶卵白素-生物素過氧化物酶法（SP法）。Clusterin、Livin和P53抗體稀釋倍數均為1∶100，DAB顯色，蘇木素復染，染色步驟嚴格按說明書進行，用PBS代替一抗作陰性對照，細胞質或細胞核中呈現棕黃色染色顆粒為陽性細胞。

1.3 判定標準

采用Olympus BX51型光學顯微鏡觀察并攝片。光學顯微鏡下，計算出每10個高倍視野中染色為陽性的腫瘤細胞百分率，具體如下，顯色細胞數（染色陽性百分比）：＜5%定為0分；6%～20%定為1分（弱+）；21%～50%定為2分（+）；＞50%定為3分（++），本實驗數據統一采用總積分＞1，即陽性表達作為統計分析的標準。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件進行統計分析。計數資料采用χ2比較（即：四格表或R×C表的χ2檢驗），以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 正常胃黏膜組織和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達

Clusterin、Livin和P53的表達情況如表1所示，Clusterin、Livin、P53陽性表達主要定位于癌細胞的胞質，呈棕黃色或棕褐色，陽性表達率分別為71.4%、85.7%和76.2%，三者在正常胃黏膜組織中的陽性表達率分別為20.0%、33.3%、26.7%，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 Clusterin、Livin和P53的表達與胃癌臨床病因素的關系

如表2所示，Clusterin、Livin和P53的陽性表達與有無淋巴結轉移、分化程度、浸潤深度和TNM分期有關（P＜0.05）；與年齡、性別、腫瘤的部位、腫瘤的大小及大體分型差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 Clusterin、Livin和P53的表達與患者3年生存率的關系

如表3所示，對42例胃癌患者進行跟蹤隨訪，3年內患者的死亡例數為14例，Clusterin、Livin蛋白的表達在生存時間分別＜3年及≥3年時差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

細胞凋亡是由基因控制的細胞主動地程序性死亡過程。凋亡障礙使細胞生存延長，突變的細胞積累而導致腫瘤的形成。大量的研究表明，腫瘤發生發展的重要原因之一可能是由于凋亡的抑制作用所致。細胞凋亡的調控因子包括誘導因子和抑制因子。抑制因子包括Clusterin、IAP家族、Bcl-2、BclxL、Mcl-l等，誘導因子包括P53、Caspases家族、Fas/FasL和Bax等[3]。

Clusterin是一種新發現的凋亡抑制因子，是一種硫酸化糖蛋白的異構二聚體，在多種組織中發現這種蛋白的表達，Clusterin可能是在細胞外發揮抗凋亡作用的[4]。Livin基因是最新發現的細胞凋亡抑制蛋白家族成員之一，近年來，以Livin為靶點的腫瘤基因治療策略備受關注。Livin編碼雙重底物特異性磷酸酶，具有脂質磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性，Livin可能通過脂質磷酸酶的活性調節細胞生長，其可在G1期阻斷細胞周期進程，Livin基因作為一種抑癌基因，多數正常成人組織中不表達，而在一些腫瘤組織細胞中高表達，其異常高表達常引起組織細胞凋亡受阻，與腫瘤的發生密切相關[5-6]。p53基因分為野生型和突變型兩種。野生型p53基因為抑癌基因，野生型p53基因發生突變后，轉變為突變型p53基因，成為癌基因。野生型p53基因是細胞生長周期中的負調節因子，突變型p53基因喪失了對細胞增殖的監控作用，可以促進細胞增殖、轉化及癌變[7-8]。

表1 正常胃組織和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達[n（%）]

表2 Clusterin、Livin和P53的表達與胃癌臨床病因素的關系（例）

表3 胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達與患者3年生存率的關系[n（%）]

本研究結果顯示，Clusterin、Livin和P53的陽性表達均為高表達，且與有無淋巴結轉移、分化程度、浸潤深度和TNM分期有關（P＜0.05）；提示三者可能抑制了胃癌細胞的凋亡，促進腫瘤細胞分裂，與胃癌發生和生長關系密切。預示著隨著胃癌的生長、分化程度的降低其侵襲和轉移能力逐漸增強。本研究結果還顯示，Clusterin、Livin蛋白的表達在生存時間分別＜3年及≥3年時差異有統計學意義（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的高表達可能預示腫瘤有較高的侵襲性和預后不良。與國內外相關研究結果一致[9-11]。

綜上所述，筆者認為Clusterin、Livin和P53蛋白的表達水平與胃癌的發生、發展、侵襲和轉移有密切的關系，可以作為評估胃癌的生物學行為、預測轉移趨勢的重要指標之一，為胃癌的診治制定更加積極、合理、有效的治療方案提供依據和參考。

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Expression and clinical significance of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer

WANGGuoli1 LIJingwu2
1.Department of Pharmacy,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China;2.Department of Gastrointestinal surgery,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China

ObjectiveTo study the expression of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer,and to investigate the clinical significance of Clusterin,Livin and P53 proteins expression.MethodsExpression of Clusterin,Livin and P53 in 42 specimens and 30 normal tissue specimens of gastric cancer was determined by immunohistochemical staining.ResultsThe positive rate of Clusterin,Livin and P53 was 71.4%,85.7%and 76.2%.The expression of Clusterin,Livin and P53 in the tissue of gastric cancer was significantly higher than that in normal gastric tissue,the expression of Clusterin,Livin and P53 protein was associated with lymphaticmetastasis,infiltration depth,degrees of differentiation and TNM staging(P＜0.05). Clusterin,Livin protein expression compared in survival time＜3 and≥3 had statistical significance(P＜0.05).ConclusionClusterin,Livin and P53 protein play a critical role in tumormetastasis.Co-detection of the expression of Clusterin, Livin and P53 protein can be used to predict themetastatic potential of gastric cancer,and it provides clinical reference for the diagnosis and treatment of gastric cancer.

Gastric cancer;Clusterin;Livin;P53;Immunohistochemistry

R735.2

A

1673-7210（2012）11（b）-0020-03

2012-09-11 本文編輯：郝明明）