色胺酮對(duì)小鼠急性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

李捷 繆珊 王四旺 王劍波 謝艷華

第四軍醫(yī)大學(xué)天然藥物學(xué)教研室，陜西西安 710032

色胺酮對(duì)小鼠急性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

李捷 繆珊 王四旺 王劍波 謝艷華

第四軍醫(yī)大學(xué)天然藥物學(xué)教研室，陜西西安 710032

目的觀察色胺酮灌胃后小鼠產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)，以評(píng)價(jià)色胺酮原料藥的安全性。方法將色胺酮設(shè)定3個(gè)劑量組，灌胃給藥，小鼠未出現(xiàn)死亡，故以高、中、低三個(gè)給藥劑量進(jìn)行亞急性毒性研究。連續(xù)喂養(yǎng)觀察體態(tài)行為，30 d后摘眼球取血作血常規(guī)檢測(cè)。結(jié)果試驗(yàn)小鼠的行為未出現(xiàn)異常，無(wú)小鼠死亡。各組小鼠的體重及其增重、進(jìn)食量、食物利用率與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）；各計(jì)量組血常規(guī)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論色胺酮具有較好的安全性。

色胺酮；安全性；急性毒性試驗(yàn)；小鼠

色胺酮（TRYP）為吲哚喹啉類生物堿，其化學(xué)名稱為吲哚[2，1-b]喹唑啉-6，12-二酮（6，12-dihydro-6，12-dioxoindo lo-[2，1-b]-quinazoline），主要存在于馬藍(lán)（Strobilanthes cusia）、蓼藍(lán)（Polygonum tinetorium Lour）、菘藍(lán)（Isatis tinctoria L.）等產(chǎn)藍(lán)植物中，現(xiàn)也可通過(guò)微生物發(fā)酵或人工合成得到[1]。近年來(lái)藥理研究表明其具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗瘧和殺蟲(chóng)作用，特別是可以通過(guò)多種途徑對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用[1-9]。經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道和本課題組研究發(fā)現(xiàn)，色胺酮對(duì)K562白血病細(xì)胞有突出的抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用[2-3]。為了評(píng)價(jià)其成藥的安全性，為進(jìn)一步制劑的劑量設(shè)計(jì)提供參考，筆者對(duì)其極性毒性進(jìn)行了研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

ABX MICROS 60三分類細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（西京醫(yī)院兒科）；COBAS INTEGRA 400 Plus全自動(dòng)生化分析儀；分析天平（德國(guó)賽多利斯）。

色胺酮（TRPY）粉末由西北大學(xué)生命科學(xué)院提供，經(jīng)HPLC法檢測(cè)其含量高于95%，其他試劑均為分析純，臨用前配制成混懸液用以灌胃。

昆明種小鼠，雄性，體重（20±2）g，使用許可證號(hào)：SCXK（軍）字第2007-007號(hào)。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

取適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后的小鼠10只，禁食不禁水12h，每組于1 d內(nèi)按50mg/kg劑量灌胃給藥3次，每8小時(shí)給藥1次。給藥后仔細(xì)觀察小鼠的外觀、行為、活動(dòng)、精神、食欲、皮毛、呼吸和鼻、眼、口及大小便等。結(jié)果連續(xù)觀察3 d，體重略有減輕，但未見(jiàn)死亡，其他未見(jiàn)異常，無(wú)法測(cè)出半數(shù)致死量（LD50）。對(duì)小鼠進(jìn)行大體解剖，發(fā)現(xiàn)胃腸道有明顯的黃色粉末狀物體，推測(cè)是未被完全吸收的色胺酮粉末，其他未見(jiàn)明顯異常。

2.2 亞急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.2.1日常行為觀察取小鼠40只，隨即分為對(duì)照組和高、中、低三個(gè)劑量組。根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)研究[10]定其劑量分別為：高劑量組80 mg/kg、中劑量組50 mg/kg、低劑量組25 mg/kg，對(duì)照組給同體積生理鹽水，連續(xù)給藥30 d。每日觀察動(dòng)物的精神、活動(dòng)、毛色狀態(tài)、記錄攝食量及體重變化。見(jiàn)表1、2。結(jié)果表明各劑量組體重和進(jìn)食量與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2.2 血常規(guī)檢查末次給藥后2 h眼球取血，進(jìn)行血常規(guī)和生化指標(biāo)測(cè)定，即紅細(xì)胞（RBC）、白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)、血紅蛋白（HGB）、平均血紅蛋白（MCH）等。見(jiàn)表3。

3 討論

白血病是嚴(yán)重危害人類生命健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。當(dāng)前，白血病的臨床治療仍采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療，但此療法不良反應(yīng)大，復(fù)發(fā)率高，尤其對(duì)機(jī)體免疫與造血系統(tǒng)有很大損害。從祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)中尋找抑制白血病細(xì)胞惡性增殖并誘導(dǎo)其凋亡的中藥是值得探索的途徑之一。經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道和本課題組研究發(fā)現(xiàn)，從板藍(lán)根中提取的喹啉類生物堿色胺酮對(duì)K562白血病細(xì)胞有突出的抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用[2-3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)其急性和亞急性毒性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在高、中、低三種劑量連續(xù)用藥30 d后，小鼠體征和各生理指標(biāo)與正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明色胺酮安全性良好，在解決其溶解度問(wèn)題后可進(jìn)一步制成制劑作為治療白血病的新藥開(kāi)發(fā)。

表1 給藥期間小鼠體重變化（±s，g，n=10）

表1 給藥期間小鼠體重變化（±s，g，n=10）

時(shí)間對(duì)照組給藥組高劑量組中劑量組低劑量組給藥前給藥后第5天第10天第15天第20天第25天第30天21.5±1.1 25.0±1.3 26.8±1.5 29.1±2.0 33.1±1.8 37.1±1.3 36.2±2.6 18.9±1.4 21.9±1.5 26.7±1.5 28.7±1.8 29.8±1.9 35.0±1.3 36.4±2.4 18.9±1.4 21.9±1.5 26.7±1.5 28.7±1.8 29.8±1.9 35.0±1.3 36.4±2.4 20.8±1.9 23.2±1.4 25.4±1.5 27.8±2.1 31.6±2.0 37.5±1.9 37.9±1.6

表2 給藥后小鼠進(jìn)食量變化（±s，g，n=10）

表2 給藥后小鼠進(jìn)食量變化（±s，g，n=10）

時(shí)間對(duì)照組給藥組高劑量組中劑量組低劑量組給藥前給藥后第5天第10天第15天第20天第25天第30天3.28±0.34 3.26±0.25 3.95±0.73 4.16±0.21 4.57±0.47 4.32±0.38 4.59±0.29 3.06±0.29 3.18±0.41 3.76±0.78 4.09±0.29 4.32±0.38 4.53±0.66 4.23±0.27 3.12±0.23 3.61±0.63 3.68±0.23 4.68±0.51 4.16±0.63 4.26±0.26 4.43±0.18 3.17±0.29 3.43±0.24 3.89±0.59 3.99±0.22 4.07±0.36 4.32±0.38 4.21±0.81

表3 給藥后小鼠血常規(guī)變化（±s，n=10）

表3 給藥后小鼠血常規(guī)變化（±s，n=10）

組別RBC（×1012/L）WBC（×109/L）HGB（g/L）MCH（pg）對(duì)照組低劑量組中劑量組高劑量組8.86±1.88 9.28±2.03 9.71±2.72 9.72±1.54 8.84±2.19 9.95±2.06 10.51±1.56 10.06±2.80 146.95±7.46 151.20±7.64 148.96±10.34 143.39±10.64 14.87±0.71 14.53±0.88 15.00±0.45 14.78±0.67

表4 給藥對(duì)小鼠臟器系數(shù)影響（±s，‰，n=10）

表4 給藥對(duì)小鼠臟器系數(shù)影響（±s，‰，n=10）

臟器對(duì)照組給藥組高劑量組中劑量組低劑量組心肝脾肺腎腦5.59±1.61 56.81±8.13 5.03±1.01 5.81±1.07 12.32±2.51 7.98±1.76 5.24±0.99 54.43±7.49 4.59±1.54 5.71±0.83 13.89±2.25 7.69±1.07 5.29±0.75 51.86±6.23 4.25±1.87 6.47±1.07 14.88±2.71 8.11±1.18 5.13±0.73 52.05±9.60 4.51±1.00 6.11±0.94 14.25±1.95 7.34±1.39

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Acute and sub-acute toxicity test of TRYP in m ice

LIJie MIAO Shan WANG Siwang WANG Jianbo XIE Yanhua
Department of Nature Medicine,the Fourth Military Medical University,Shaanxi Province,Xi′an 710032,China

ObjectiveTo evaluate the safety of TRYP by observing the acute toxic reaction ofmice after oral administration.MethodsThe mice were oral administrated with TRPY at three different dosages.No death ofmice was found.So three doses of the high,middle and low for subacute toxicity study were given.After feeding for 30 days,the blood hematology was detected.ResultsDreg-treated mice had no behavior anomaly and death in the observation period.The difference of body weight,weight increased,food in-take and utilization ratio in each group was not significant(P>0.05).The hematology in each dose group had no significant difference compared with control group(P>0.05),either.ConclusionTRYP is relatively safe.

TRYP;Safety;Acute toxicity;Mice

R282.71

A

1673-7210（2012）11（b）-0013-02

國(guó)家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（項(xiàng)目編號(hào)：2011ZX09401-308）。

李捷（1983-），女，碩士研究生，助教；研究方向：中藥藥理學(xué)。[通訊作者]王四旺（1958-），男，教授，博士生導(dǎo)師；研究方向：中藥新藥開(kāi)發(fā)。

2012-07-05 本文編輯：衛(wèi)軻）