高效液相色譜串聯質譜法鑒定山芝麻水提取液的化學成分

宋偉峰 羅淑媛 李瑞明 梁耀榮

1.中山大學附屬第三醫院，廣東廣州 510630；2.中山大學附屬第一醫院，廣東廣州 510080

高效液相色譜串聯質譜法鑒定山芝麻水提取液的化學成分

宋偉峰1羅淑媛1李瑞明2梁耀榮2

1.中山大學附屬第三醫院，廣東廣州 510630；2.中山大學附屬第一醫院，廣東廣州 510080

目的 鑒定山芝麻水提取液的化學成分。 方法 采用水為溶劑加熱回流提取法提取山芝麻藥材，提取液采用高效液相色譜串聯質譜法鑒定其中的化學成分。 結果 從山芝麻水提取液中共分離得到10個主要的化學成分，并采用多級質譜對其進行了結構鑒定，其中8個化學成分通過對照品得到了確證，分別為奎尼酸、檸檬酸、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸C、異綠原酸A和異綠原酸B。 結論本實驗為該藥材的開發和利用提供了科學基礎。

山芝麻；水提取液；化學成分；高效液相色譜串聯質譜法

山芝麻為梧桐科植物山芝麻Helicteres angustifolia L.的干燥根，其味苦、性寒，歸肺、大腸經，可解表清熱、解毒消腫，用于感冒發熱、痄腮、麻疹、咳嗽、泄瀉痢疾、癰腫[1-2]。山芝麻為民間常用的中藥，始載于《生草藥性備要》，是廣東涼茶的主要原料，也是多種中藥制劑的原料[3]。山芝麻為廣東地方特色中藥材，其研究水平較低，相關報道也較少，嚴重制約了該藥材的開發利用。近年來對其化學成分的研究逐漸深入開展，植物化學研究表明，山芝麻中含有有機酸、三萜、甾體和倍半萜內酯類等有效成分[4-9]。由于中藥飲片主要采用水煎煮的方式服用，研究其水提取液的化學成分具有重要的意義。本文采用水為溶劑加熱回流提取山芝麻的活性成分，提取液采用高效液相色譜串聯質譜法（HPLC-MSn）分析，研究結果將為山芝麻藥材的開發利用及其質量控制提供理論依據。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 HPLC-MSD高效液相色譜離子阱質譜聯用儀（美國Agilent公司）；色譜柱：Zorbax-SB C18高效液相色譜柱（150.0mm × 2.1mm，5μm，美國 Agilent公司）。 乙腈為色譜純（美國Burdick&Jackson），水為Milli-Q超純水。山芝麻藥材購自廣州大參林藥店，經鑒定為山芝麻（Helicteres angustifolia L.）。

2 方法與結果

2.1 樣品提取

取山芝麻藥材粉碎，稱取10 g置圓底燒瓶中，加100mL水，加熱回流提取2 h，提取液冷卻后轉移至100 mL的容量瓶中，定容后過0.45μm濾膜，待分析。

2.2 色譜及質譜條件

2.2.1 色譜條件 Zorbax-SB C18高效液相色譜柱（150.0 mm×2.1 mm，5μm）；流動相A為0.5%的甲酸，B為乙腈，梯度洗脫：0～5 min，98%A+2%B；5～25 min，2%～12%B；25～55 min，12%～25%B；55～70 min，25%～95%B；后運行 10 min，98%A+2%B。流速為0.5mL/min，進樣量為5.0μL，柱溫為25℃，二極管陣列檢測器（DAD）掃描波長為190～400 nm。

2.2.2 質譜條件 電噴霧（ESI）離子源，負離子檢測模式；霧化N2壓力 345 kPa，干燥 N2氣流速 10 L/min，干燥 N2氣溫度350℃；毛細管電壓 3 500 V；質譜掃描：m/z 50～1 000，Auto MSn模式，自動選擇豐度最高的三個離子進行二級和三級質譜分析。

2.3 成分分析

山芝麻藥材水提取液的HPLC-MSn分析總離子流色譜見圖1，色譜圖上有10個明顯的色譜峰，表明山芝麻水提取液中含有10個主要的化學成分。對每個化學成分進行多級質譜分析，并結合相關的文獻報道，對這10個色譜峰進行了鑒定，相關信息見表1，圖2給出了異綠原酸A的多級質譜裂解途徑。異綠原酸（m/z 515）為雙咖啡奎寧酸衍生物，多級質譜失去1分子咖啡酰基，得到單咖啡奎寧酸衍生物（m/z353），m/z 353再失去1分子咖啡酰基得到m/z 191的碎片。

通過與對照品的保留時間、一級質譜和多級質譜信息進行比較，色譜峰 1、2、3、5、6、8、9 和 10 分別確證為奎尼酸、檸檬酸、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸C、異綠原酸A和異綠原酸B。化合物4由于缺乏相關的文獻報道和對照品，故結構未能鑒定，有待進一步分析。化合物7與化合物8、9和10的一級質譜相同，顯示具有相同的分子量，而它們的多級質譜碎片信息也非常相似，提示它們具有相似的結構，因此推測化合物7為異綠原酸的異構體。

3 討論

山芝麻作為嶺南常用中藥，資源極為豐富，常用于治療感冒發熱、痄腮、麻疹、咳嗽、泄瀉痢疾和癰腫等癥。HPLCMSn具有高選擇性、高靈敏度和能提供結構信息的特性，在中藥化學成分鑒定中起著非常重要的作用。本實驗通過對山芝麻水提取液進行HPLC-MSn分析，研究了其水溶性化學成分，山芝麻水提取液主要成分為咖啡酰奎尼酸類化合物。咖啡酰奎尼酸類化合物具有廣泛的抗菌、抗炎、抗氧化等活性，是山芝麻水提取液的藥效物質基礎[10-11]。本實驗為山芝麻藥材的藥效作用研究和合理開發利用提供了實驗依據。

表1 山芝麻水提取液的化學成分分析

[1]廣東省食品藥品監督管理局.廣東省中藥材標準（第1冊）[M].廣州：廣東科學技術出版社，2004：16-17.

[2]蘇丹，高玉橋，黃增芳，等.山芝麻揮發油成分的GC-MS分析[J].中國藥房，2011，22（23）：2173-2174.

[3] 高玉橋，蘇丹，梅全喜.山芝麻的研究進展[J].中國藥業，2009，18（16）：88.

[4]魏映柔，王國才，張曉琦，等.山芝麻化學成分[J].中國中藥雜志，2011，36（9）：1193-1197.

[5]劉衛國，王明時.山芝麻中三個新三萜化合物的結構測定[J].藥學學報，1985，20（11）：842.

[6]王明時，劉衛國，李景榮，等.山芝麻內酯化學結構的測定[J].化學學報，1988，46（8）：768.

[7]郭新東，安林坤，徐迪，等.中藥山芝麻的化學成分研究（Ⅰ）[J].中山大學學報：自然科學版，2003，42（2）：52-55.

[8]鐘蕾，鄒忠梅，徐麗珍，等.山芝麻屬植物化學成分[J].國外醫藥：植物藥分冊，2001，16（4）：145-148.

[9]ChenW，TangWD，Lou LG，etal.Pregnane，coumarin and lupine derivatives and cytotoxic constituents from Helicteres angustifolia [J].Phytochemistry，2006，67（10）：1041-1047.

[10]郭朝暉，周學清，蔣生祥.甘肅金銀花中綠原酸含量與抑菌作用的實驗考察[J].時珍國醫國藥，2005，16（12）：1258-1259.

[11]李滿秀，張瑤，楊淑英.綠原酸的直接熒光分析法及其抗氧化性研究[J].分析科學學報，2011，27（2）：203-206.

Identification of the major com ponents from the water extract of Helicteres angustifolia L.by high-performance liquid chromatography coupled w ith tandem mass spectrometry

SONGWeifeng1 LUO Shuyuan1 LIRuiming2 LIANG Yaorong2
1.The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510630,China;2.The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510080,China

Objective To identify themajor components from the water extract of Helicteres angustifolia L..MethodsThe Helicteres angustifolia L.was extracted by reflux extraction using water as solvent,and the extractwas analyzed by highperformance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry.Results10 major componentswere separated,and their chemical structures were identified by tandem mass spectrometer.Among them,quinic acid,citric acid,neochlorogenic acid,chlorogenic acid,cryptochlorogenic acid,isochlorogenic acid C,isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid B were confirmed by a comparison of MSn information with those of the reference substances.ConclusionThe method provides the scientific basis for the exploitation and utilization of Helicteres angustifolia L..

Helicteres angustifolia L.;Water extract;Components;High-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry

R284.1

A

1673-7210（2012）12（a）-0108-02

廣東省科技計劃項目（項目編號：2011A080300004）。

宋偉峰（1972，4-），男，主管藥師；研究方向：醫院藥學。

李瑞明（1974，7-），男，主管藥師；研究方向：醫院制劑。

2012-06-05 本文編輯：衛 軻）