高效液相色譜法測定喜炎平注射液中穿心蓮內酯的含量

2012-11-10 01:24:18張玉霖張又枝

中國醫藥指南 2012年10期

張玉霖張又枝陳莉

（咸寧學院藥學院，湖北咸寧 437100）

喜炎平注射液可抗病毒且廣譜抗菌，在臨床上廣泛用于治療支氣管炎、病毒性肺炎、扁桃體炎、小兒急性熱性疾病以及細菌性痢疾等疾病[1-3]，主要成分是由穿心蓮內酯通過磺化反應制得的穿心蓮內酯總磺化物[4,5]，磺化反應不完全或者磺化物分解可產生穿心蓮內酯，穿心蓮內酯也具有穿心蓮抗炎、抗菌、抗病毒等功效，但其含量多少可反映喜炎平注射液的整體質量，目前未見喜炎平注射液中穿心蓮內酯測定方法的報道，為了進一步完善這類注射液的質量控制標準，我們建立了HPLC法測定穿心蓮內酯的含量，現介紹如下。

1 儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津），SPD20A 型紫外檢測器，N2000型色譜數據工作站，FA2004電子分析天平，SK2200H超聲儀。穿心蓮內酯對照品（批號：110797-200307，中國藥品生物制品檢定所），喜炎平注射液（江西青峰藥業有限公司），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱： Eurospher 100～5 C18（250 mm× 4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-水（90:10）；檢測波長：225nm；流速：lmL/min；柱溫：室溫。色譜圖見圖1。

圖1

2.2 線性關系

精密稱取穿心蓮內酯對照品49.68mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解適量，超聲5min，用甲醇并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取儲備液1、2、4、6、8、10mL分別置于 l0mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜件，分別取20μL進樣，以峰面積 y對對照品進樣量（μg/mL ）作線性回歸。結果回歸方程（n=6）為：Y=11967.8x+ 324621，r2= 0.9996。

線性范圍為：24.84μg/mL～248.4μg/mL。

2.3 重復性實驗

精密量取2.00mL同一批號樣品（批號：20100531）6份，按樣品測定項下的方法，測定穿心蓮內酯的含量，RSD為 0.87%。

2.4 穩定性實驗

取重復性實驗中的第 1份溶液，室溫下在 0、0.5、1、2、3h測定，結果表明，本品的供試品溶液在室溫 3h內基本穩定，RSD=0.77%，n=5。

2.5 精密度試驗

取濃度為124.2μg/mL的穿心蓮內酯對照品溶液，重復進樣5次，結果 RSD為 0.84%。

2.6 加樣回收實驗

精密量取喜炎平注射液2.00 mL，分別置10mL量瓶中，再分別精密加入對照品溶液，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照樣品測定項下的方法測定加樣回收率，結果見表1。

2.7 樣品測定

精密量取本品2.00mL，于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，按上述色譜條件，取20μL進樣測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結果見表2。

表2 喜炎平注射液測定結果表（n=5）

3 討論

本研究采用高效液相色譜法測定，檢測波長、流動相的組成均參照《中國藥典》[6]穿心蓮項下的含量測定方法，采用比較常用的甲醇-水作為流動相。考察了不同流動相配比的分離情況，其中甲醇-水（90∶10）時所得色譜圖中峰形和分離度都比較滿意。該方法操作簡單，結果準確，為藥品質量控制提供了一定的參考。有研究[5]表明，以穿心蓮內酯為表征性參比物質，通過校正因子，可實現穿心蓮內酯磺化物對照品量值的準確傳遞。在該色譜條件下，能否實現穿心蓮內酯磺化物對照品量值的準確傳遞，從而在穿心蓮內酯磺化物對照品不易獲得的情況下以穿心蓮內酯為對照品間接測定穿心蓮內酯磺化物的量，還需要進一步考察。