聚肌胞苷酸刺激的上皮細胞對成纖維細胞活化的影響及EMMPRIN的作用*

陳興無， 左 蓓， 張新紅

(皖南醫(yī)學院弋磯山醫(yī)院呼吸內科，安徽蕪湖241001)

氣道炎癥和重塑是哮喘患者的基本病理特征，其程度與疾病嚴重度呈正相關;在慢性炎癥條件下，氣道壁成纖維細胞活化并轉分化為表達α－平滑肌肌動蛋白(α －smooth muscle actin，α －SMA)、具收縮功能且分泌活躍的肌成纖維細胞［1］。哮喘反復發(fā)作促進氣道炎癥和重塑，已知病毒感染是急性發(fā)作最常見的誘因［2］，其中鼻病毒(rhinovirus，RV)最常見而且是唯一與發(fā)作顯著相關的病原體。RV為單鏈RNA(single－stranded RNA，ssRNA)，在復制過程中生成雙鏈RNA(double－stranded RNA，dsRNA)，dsRNA的模擬合成物聚肌胞苷酸［polyinocinic－polycytidylic acid，poly(I:C)］模擬病毒感染通常用于研究病毒對多種細胞的影響。研究發(fā)現poly(I:C)破壞氣道上皮屏障，增加上皮細胞、成纖維細胞和氣道平滑肌細胞外基質(extracellular matrix，ECM)沉積［3－4］并誘導成纖維細胞轉分化為肌成纖維細胞。體內模型證實poly(I:C)增強抗原致敏，增加氣道炎性細胞浸潤并增強氣道高反應性，表明RV在哮喘氣道重塑中發(fā)揮重要作用。然而，poly(I:C)在成纖維細胞活化過程中的作用機制目前仍不清楚。

基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)破壞ECM和細胞連接，促進炎性細胞募集，成纖維細胞衍生的MMPs可調節(jié)纖維化反應，促進成纖維細胞收縮。RV感染人支氣管上皮細胞增加MMP－9表達［5］，加重氣道損傷和重塑過程。細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN)誘導鄰近細胞生成MMPs［6］，調節(jié)正常組織重構和分化過程中MMPs表達以及存在肌成纖維細胞的非腫瘤狀態(tài)，提示EMMPRIN可能參與肌成纖維細胞分化。EMMPRIN可觸發(fā)細胞骨架重組形成收縮性應力纖維影響收縮表型。我們推測，RV感染可能導致EMMPRIN上調，誘導成纖維細胞活化，促進氣道炎癥和重塑。本研究調查poly(I:C)刺激的上皮細胞對成纖維細胞增殖和α－SMA表達的影響，確定EMMPRIN在該過程的作用及信號通路。

材料和方法

1 材料

人肺泡上皮細胞株(A549)由中國科技大學中心實驗室提供;胎牛血清(FCS，杭州四季青公司)、MEM(Hyclone)、EMMPRIN(R＆D)、poly(I:C)(Sigma);p38 MAPK選擇性阻斷劑SB203580和ERK1/2選擇性阻斷劑PD98059(Sigma)，磷酸化與非磷酸化p38 MAPK和ERK1/2抗體(Promega)，小鼠抗人α－SMA單克隆抗體(Novocastra)，EMMPRIN ELISA試劑盒(R＆D)。

2 方法

2.1 氣道上皮細胞條件培養(yǎng)基(conditioned medium，CM)制備 A549細胞經胰酶消化后以每孔2×106接種于6孔培養(yǎng)板，用含10%FCS的MEM培養(yǎng)至90%匯合，以含20 mg/L poly(I:C)的無血清MEM培養(yǎng)，24 h后收集CM，2 000 r/min離心5 min，過濾后用于下述實驗。

2.2 人氣道成纖維細胞原代培養(yǎng) 按作者既往方法［7］進行貼塊培養(yǎng)，標本源自弋磯山醫(yī)院肺癌病人。

2.3 A549－CM刺激成纖維細胞 將成纖維細胞接種于24孔板蓋玻片上(免疫組化)或6孔板(提取細胞蛋白)各孔中，待達到80% ～90%匯合時換無血清MEM培養(yǎng)24 h。實驗分3組:MEM－成纖維細胞、正常A549－CM(以MEM 1∶1稀釋)－成纖維細胞和poly(I:C)－A549－CM(1∶1稀釋，下同)－成纖維細胞;在另一些孔中預先1 h加入SB203580(5或10 μmol/L)或 PD98059(5 或10 μmol/L)后以 poly(I:C)－A549－CM培養(yǎng)。培養(yǎng)12 h、24 h或48 h檢測細胞增殖或α－SMA表達，部分培養(yǎng)0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h提蛋白檢測磷酸化與非磷酸化 p38 MAPK和ERK1/2水平，選擇12 h、24 h及48 h的成纖維細胞上清－80℃凍存待測EMMPRIN，48 h上清用于MMP－2、－9酶譜分析。

2.4 EMMPRIN刺激成纖維細胞 用與2.3相似的方法培養(yǎng)成纖維細胞，分別給予MEM和EMMPRIN(5 mg/L或10 mg/L)刺激12 h或48 h，檢測細胞增殖和α－SMA表達，48 h取上清進行 MMP－2和MMP－9酶譜分析。

2.5 細胞增殖實驗 以BrdU細胞摻入測定成纖維細胞增殖，將成纖維細胞以每孔5×104接種于24孔板中蓋玻片，至80%匯合時無血清MEM培養(yǎng)24 h;分別以MEM或正常A549－CM或poly(I:C)－A549－CM培養(yǎng)成纖維細胞，每種培養(yǎng)均設立3復孔平行實驗。培養(yǎng)16 h后加入BrdU(100 mmol/L)，繼續(xù)培養(yǎng)8 h后固定細胞進行BrdU免疫組化實驗。

2.6 α－SMA免疫熒光與 Western blotting檢測4%多聚甲醛固定細胞30 min(室溫)，0.05%Triton X－100穿透細胞10 min，α－SMA抗體1∶50。依次加FITC－標記的羊抗鼠Ⅱ抗、Alex 594 phalloidin(1∶1 000)和 DAPI(500 μg/L，95% 乙醇稀釋)后，80%甘油封片。熒光顯微鏡下觀察α－SMA(綠色)，截圖保存。Western blotting檢測:PBS漂洗細胞2次，加100 μL 1×SDS裂解液，刮下細胞至EP管，冰上孵育10 min，95℃煮沸3～5 min，14 000 r/min離心10 min，BSA法測濃度。取50 μg蛋白 SDSPAGE電泳，轉印至硝酸纖維素膜上，脫脂奶室溫封閉1 h，Ⅰ抗4℃孵育過夜，Ⅱ抗室溫1 h，ECL發(fā)光顯色。ImageJ軟件進行圖像處理，測定灰度值。

2.7 p38 MAPK和ERK1/2的Western blotting檢測采用與2.6相似的方法。利用ImageJ軟件進行分析，以非磷酸化條帶為內參照，計算磷酸化與相應非磷酸化條帶灰度的相對比值。

2.8 成纖維細胞凝膠收縮實驗 參照文獻制備成

纖維細胞－膠原混懸液(0.75 g/L膠原，1×108/L成纖維細胞，1×MEM，pH 7.4)，并立即將該混懸液移入24孔培養(yǎng)板中(每孔加600 μL)，37℃培養(yǎng)箱內20～30 min，待混懸液形成凝膠時每孔加入400 μL含10%FCS的MEM繼續(xù)培養(yǎng)，次日無血清MEM培養(yǎng)24 h，用加樣槍槍頭尖端沿凝膠邊緣輕輕分離凝膠。實驗分3組:MEM－成纖維細胞、正常A549－CM－成纖維細胞和poly(I:C)－A549－CM－成纖維細胞，每組3孔，培養(yǎng)48 h后取出凝膠并拍照。以凝膠直徑縮小的程度表示凝膠收縮能力的強弱。同樣實驗進行3次，比較各組凝膠直徑與無細胞情況下凝膠直徑的差異，計算收縮的百分比。

2.9 MMP－2和MMP－9酶譜分析 收集成纖維細胞上清，冷凍離心去除細胞碎片。取5 μL樣本進行含0.1%明膠的 SDS－PAGE非變性凝膠電泳，2.5%Triton X－100室溫輕搖漂洗30 min去除SDS，37℃孵育過夜，考馬斯藍染色后脫色。對脫色后條帶拍照并用ImageJ軟件進行分析，以正常成纖維細胞上清MMP－2和MMP－9為內參照，計算A549－CM－成纖維細胞和poly(I:C)－A549－CM－成纖維細胞上清MMP－2和MMP－9條帶灰度的相對比值。

3.0 EMMPRIN濃度測定 采用ELISA法檢測成纖維細胞上清 EMMPRIN水平，操作按說明進行。EMMPRIN最低測定限值為1.35 ng/L。

3 統(tǒng)計學處理

數據以均數±標準差(ˉx±s)表示，采用SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計學分析;多組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞增殖

由圖1可見，poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞增殖，12 h最明顯，其后刺激作用漸減弱;正常上皮細胞上清也刺激成纖維細胞增殖，但無poly(I:C)－上皮細胞上清作用明顯。BrdU摻入率的結果顯示:poly(I:C)－上皮細胞上清刺激的成纖維細胞12 h增殖率顯著高于MEM或正常上皮細胞上清刺激的成纖維細胞(P＜0.01)，而24 h和48 h增殖率雖明顯高于MEM培養(yǎng)的成纖維細胞(P＜0.05)，但與正常上皮細胞上清刺激的成纖維細胞無顯著差異;相對于MEM，正常上皮細胞上清也明顯刺激成纖維細胞增殖，24 h最顯著(P ＜0.01)，見表1。

Figure 1.Effect of A549 cell supernatants on the proliferation of human bronchial fibroblasts(HBFs).HBFs growing in 24－well plates were cultured under FCS－free condition with MEM(1)，normal A549－CM(2)or poly(I:C)－A549－CM(3)for 12，24 or 48 h.Cell proliferation was assessed with the BrdU DNA －incorporation assay.圖1 A549細胞上清對人氣道成纖維細胞增殖的影響

2 Poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞α－SMA表達和凝膠收縮

表1 A549細胞上清對氣道成纖維細胞增殖率的影響Table 1.Effect of A549 cell supernatants on airway fibroblast proliferation rate(%.ˉx±s.n=3)

免疫熒光、Western blotting及凝膠收縮實驗顯示，poly(I:C)－上皮細胞上清增加成纖維細胞α－SMA表達和凝膠收縮，48 h最顯著;正常上皮細胞上清輕度刺激成纖維細胞α－SMA表達和凝膠收縮，但不及poly(I:C)－上皮細胞上清刺激作用明顯，見圖2。

Figure 2.Effects of A549 cell supernatants on α － SMA expression(A:immunofluorescence;B:Western blotting)in HBFs and contraction of HBF－populated collagen gels(C).HBFs were cultured with MEM(1)，normal A549－CM(2)or poly(I:C)－A549－CM(3)for 12，24 or 48 h.ˉx±s.n=3.*P＜0.05 vs 1;#P＜0.05 vs 2.圖2 A549細胞上清對人氣道成纖維細胞α－SMA表達和凝膠收縮的影響

3 Poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞EMMPRIN表達

見圖3A;同時α－SMA表達增加，并且EMMPRIN濃度越高刺激作用更明顯，見圖3B。

Poly(I:C)－上皮細胞上清刺激成纖維細胞后，其培養(yǎng)上清中EMMPRIN含量明顯高于另2組相應時點(P＜0.05)，正常上皮細胞上清刺激的成纖維細胞上清中EMMPRIN含量較MEM組雖增加，但差異均不顯著(P＞0.05)，見表2。

4 EMMPRIN誘導成纖維細胞增殖和α－SMA表達

表2 A549細胞上清對成纖維細胞EMMPRIN表達的影響Table 2.Effects of A549 cells supernatants on airway fibroblasts EMMPRIN expression(ng/L.ˉx±s.n=3)

成纖維細胞給予EMMPRIN刺激后，增殖增強，

Figure 3.Effects of EMMPRIN on proliferation(A)of HBFs and α － SMA expression(B)in HBFs.HBFs growing in 24 － well plates were cultured under FCS－free condition with MEM(1)，5 mg/L EMMPRIN(2)or 10 mg/L EMMPRIN(3)for 12 h(A)or 48 h(B).ˉx±s.n=3.*P＜0.05 vs 1 or 2.圖3 EMMPRIN對人氣道成纖維細胞增殖和α－SMA表達的影響

5 EMMPRIN為poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞MMP－2和MMP－9生成的重要成分

酶譜分析MMP－2和MMP－9活性顯示:相對于MEM或正常A549－CM刺激的成纖維細胞上清，MMP－2和MMP－9活性在poly(I:C)－A549－CM刺激的成纖維細胞上清中升高，見圖4;以EMMPRIN刺激成纖維細胞，其上清中MMP－2和MMP－9活性相應升高，并且濃度越高刺激作用越明顯，見圖5。

6 Poly(I:C)－上皮細胞上清誘導成纖維細胞p38 MAPK和ERK1/2信號通路活化，后兩者參與α－SMA和EMMPRIN表達

Western blotting結果表明，poly(I:C)－上皮細胞上清刺激成纖維細胞1 h后，p－p38 MAPK蛋白出現，2～4 h最明顯，其后減弱;p－ERK1/2蛋白在刺激1 h后達高峰，持續(xù)至4 h后減弱，見圖6A。p38 MAPK或ERK1/2抑制劑抑制相應蛋白表達，同時減弱α－SMA表達，見圖6B。p38 MAPK和ERK1/2抑制劑均明顯減弱poly(I:C)－A549－CM誘導的成纖維細胞EMMPRIN表達，SB203580呈濃度依賴性，而5 μmol/L 和 10 μmol/L PD98059 的抑制作用無顯著差異，見表3。

討 論

成纖維細胞分化為肌成纖維細胞是哮喘氣道重塑的一個重要方面，我們過去實驗發(fā)現損傷的氣道上皮細胞誘導成纖維細胞轉分化為肌成纖維細胞［7］，在本實驗中，我們以RV dsRNA模擬合成物poly(I:C)作用的上皮細胞上清刺激成纖維細胞，間接了解RV感染氣道上皮細胞后對成纖維細胞活化的影響，結果發(fā)現poly(I:C)作用的上皮細胞上清時間依賴性誘導成纖維細胞增殖并增強α－SMA表達，提示RV感染支氣管上皮細胞后誘導成纖維細胞增殖促進氣道壁纖維化，而收縮蛋白的表達增強氣道反應性。

Figure 4.Effects of poly(I:C)－A549 cell supernatants on MMP－2 and MMP－9 activity in HBFs.HBFs growing in 24－well plates were cultured under FCS－free condition with MEM(1)，normal A549－CM(2)or poly(I:C)－A549－CM(3)for 48 h.MMP－2 and MMP－9 activity in supernatants from HBFs was assessed with zymography.ˉx±s.n=3.*P＜0.05 vs 1 or 2.圖4 Poly(I:C)－A549細胞上清對成纖維細胞MMP－2和MMP－9活性的影響

Figure 5.Effects of EMMPRIN on MMP－2 and MMP－9 activity in HBFs.HBFs growing in 24－well plates were cultured under FCS－free condition with MEM(1)，5 mg/L EMMPRIN(2)or 10 mg/L EMMPRIN(3)for 48 h.MMP－2 and MMP－9 activity in supernatants from HBFs was assessed with zymography.ˉx±s.n=3.*P ＜0.05 vs 1.圖5EMMPRIN對成纖維細胞MMP－2和MMP－9活性的影響

EMMPRIN是一個58 kD跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白(Ig)超家族，EMMPRIN可從細胞表面脫落，作為一種彌散因子作用于鄰近細胞，或作為轉化生長因子(transforming growth factor，TGF)β下游介質誘導成纖維細胞分化。已報道［8］EMMPRIN可誘導α－SMA表達參與肌成纖維細胞分化和膠原基質收縮。本研究觀察到poly(I:C)作用的上皮細胞上清增強成纖維細胞上清中EMMPRIN水平，后者劑量依賴性進一步誘導成纖維細胞增殖和α－SMA表達，提示EMMPRIN是RV感染誘導氣道重塑過程中成纖維細胞活化的一種重要中間媒介。

EMMPRIN的直接功能是誘導多種MMPs生成，人重組EMMPRIN刺激成纖維細胞MMP－1、MMP－2和MMP－3生成和激活，呼吸機相關性肺損傷大鼠肺組織MMP－2增多前EMMPRIN mRNA表達增加，這些MMPs在ECM降解及組織中性粒細胞浸潤發(fā)揮關鍵作用，還與組織重塑有密切關系。有關研究認為支氣管成纖維細胞MMP－2活性與哮喘病人FEV1%預測值負相關，而與氣道高反應性呈正相關;MMP－9與氣道炎癥和重塑的相關性體現在MMP－9缺陷的小鼠哮喘模型支氣管壁纖維化減輕并且肺總膠原蛋白減少，MMP－9抑制劑延緩過敏性氣道炎癥的發(fā)展。此外，研究也表明MMPs可促進成纖維細胞收縮反應，表達α－SMA的肌成纖維細胞同時表達高水平的MMPs如MMP－2［8］。鑒于過敏性哮喘患者支氣管肺泡灌洗液、血、痰MMP－2和MMP－9水平顯著升高，同時人鼻病毒－16感染增加支氣管上皮細胞MMP－9表達，我們檢測了poly(I:C)－上皮細胞上清對成纖維細胞MMP－2、－9生成的誘導作用，poly(I:C)作用的上皮細胞上清增強成纖維細胞上清中MMP－2、MMP－9活性，并且EMMPRIN濃度依賴性激活成纖維細胞MMP－2、MMP－9活性，這提示EMMPRIN誘導成纖維細胞MMP－2、－9激活在RV觸發(fā)氣道重塑過程中具有重要作用。

Figure 6.Effects of poly(I:C)－A549 cell supernatants on p38 MAPK and ERK 1/2 phosphorylation and roles of p38 MAPK and ERK1/2 signaling pathways in α － SMA expression in HBFs.A:HBFs were incubat for the indicated time with poly(I:C)－A549－CM，after which cell lysates were prepared and subject to immunoblotting analysis with antibodies to p38 MAPK，ERK1/2，or their phosphorylated forms.B:HBFs pre － added with SB203580 or PD98059 for 1 h were cultured with poly(I:C)－A549 －CM for 1 h(for p38 MAPK and ERK1/2)or 48 h(for α －SMA).p38 MAPK，ERK1/2 and α －SMA expression were measured by Western blotting.1:poly(I:C)－A549－CM;2:poly(I:C)－A549－CM+5 μmol/L SB203580;3:poly(I:C)－A549－CM+10 μmol/L SB203580;4:poly(I:C)－A549－CM;5:poly(I:C)－A549－CM+5 μmol/L PD98059;6:poly(I:C)－A549－CM+10 μmol/L PD98059.ˉx±s.n=3.*P＜0.05 vs 0 h;#P＜0.05 vs 3 or 6;☆P＜0.05 vs 2 or 5.圖6 A549細胞上清對人氣道成纖維細胞p38 MAPK和ERK1/2信號活化的影響及p38 MAPK和ERK1/2在α－SMA表達的作用

表3 Poly(I:C)－A549上清對成纖維細胞24 h EMMPRIN表達的影響及SB203580、PD98059的作用Table 3.Effects of poly(I:C)－A549 cell supernatants on EMMPRIN in HBFs at 24 h and the roles of SB203580 and PD98059(ng/L.ˉx±s.n=3)

研究表明絲裂原活化蛋白激酶家族的2種關鍵信號:p38 MAPK調控許多細胞過程包括應激反應、細胞分化、增殖、炎癥、血管發(fā)生和細胞因子生成，還調節(jié)平滑肌細胞和上皮細胞α－SMA表達，增強氧化應激誘導的氣道收縮反應［9］;ERK1/2參與成纖維細胞增殖和膠原合成，亦能誘導細胞α－SMA表達，體外實驗表明，RV誘導的人支氣管上皮細胞ERK 1/2信號激活是MMP－9表達上調的關鍵信號［10］。p38 MAPK和ERK1/2也是人肺成纖維細胞α－SMA表達的關鍵信號分子［9］，我們曾發(fā)現p38 MAPK與ERK1/2是損傷氣道上皮細胞誘導上皮下成纖維細胞向肌纖維母細胞轉分化的重要信號［7］。Poly(I:C)可激活成纖維細胞p38 MAPK和 ERK1/2信號通路［11］，介導poly(I:C)誘導的成纖維細胞炎癥因子、趨化因子和黏附分子合成。既往研究發(fā)現EMMPRIN表達上調過程中p38 MAPK和ERK1/2激活［12］，提示 p38 MAPK和 ERK1/2通路參與 EMMPRIN的表達。本研究中我們觀察到poly(I:C)作用的上皮細胞上清時間依賴性誘導成纖維細胞p38 MAPK和ERK1/2磷酸化，刺激60 min后兩者磷酸化水平均增加并持續(xù)激活，兩者特異性抑制劑有效減弱α－SMA表達;此外，p38 MAPK和ERK1/2抑制劑減弱poly(I:C)作用的上皮細胞上清誘導的成纖維細胞EMMPRIN表達，說明這2種信號參與了poly(I:C)作用的上皮細胞誘導成纖維細胞EMMPRIN表達過程。

總之，本研究表明，poly(I:C)作用的上皮細胞可能通過某些介質如 EMMPRIN－MMPs，經由 p38 MAPK和ERK1/2信號通路誘導成纖維細胞增殖或肌成纖維細胞分化，進一步表明RV感染在哮喘急性發(fā)作期氣道反應性升高發(fā)生機制中的重要地位，阻斷p38 MAPK和ERK1/2通路調節(jié)EMMPRIN表達可能對病毒感染誘發(fā)的氣道重塑具有有益的治療價值。

［1］ Singh SR，Hall IP.Airway myofibroblasts and their relationship with airway myocytes and fibroblasts［J］.Proc Am Thorac Soc，2008，5(1):127 －132.

［2］ Jackson DJ，Sykes A，Mallia P，et al.Asthma exacerbations:origin，effect，and prevention［J］.J Allergy Clin Immunol，2011，128(6):1165 －1174.

［3］ Kuo C，Lim S，King NJ，et al.Rhinovirus infection induces expression of airway remodeling factors in vitro and in vivo［J］.Respirology，2011，16(2):367 －377.

［4］ Kuo C，Lim S，King NJ，et al.Rhinovirus infection induces extracellular matrix protein deposition in asthmatic and nonasthmatic airway smooth muscle cells［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2011，300(6):L951 －L957.

［5］ Tacon CE，Wiehler S，Holden NS，et al.Human rhinovirus infection up－regulates MMP－9 production in airway epithelial cells via NF －κB［J］.Am J Respir Cell Mol Biol，2010，43(2):201 －209.

［6］ Jouneau S，Khorasani N，DE Souza P，et al.EMMPRIN(CD147)regulation of MMP－9 in bronchial epithelial cells in COPD［J］.Respirology，2011，16(4):705 －712.

［7］ 陳興無，張麗琴，孫珍貴.ET－1介導損傷氣道上皮誘導成纖維細胞活化的信號機制［J］.中國病理生理雜志，2009，25(12):2403－2407.

［8］ Huet E，Vallée B，Szul D，et al.Extracellular matrix metalloproteinase inducer/CD147 promotes myofibroblast differentiation by inducing α－smooth muscle actin expression and collagen gel contraction:implications in tissue remodeling［J］.FASEB J，2008，22(4):1144 －1154.

［9］ Hu Y，Peng J，Feng D，et al.Role of extracellular signal－regulated kinase，p38 kinase，and activator protein－1 in transforming growth factor－beta1－induced alpha smooth muscle actin expression in human fetal lung fibroblasts in vitro［J］.Lung，2006，184(1):33 －42.

［10］ Tacon CE，Newton R，Proud D，et al.Rhinovirus－induced MMP－9 expression is dependent on Fra－1，which is modulated by formoterol and dexamethasone［J］.J Immunol，2012，188(9):4621 －4630.

［11］ Liu Y，Kimura K，Yanai R，et al.Cytokine，chemokine，and adhesion molecule expression mediated by MAPKs in human corneal fibroblasts exposed to poly(I∶C)［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2008，49(8):3336 －3344.

［12］ Huang Z，Wang C，Wei L，et al.Resveratrol inhibits EMMPRIN expression via P38 and ERK1/2 pathways in PMA － induced THP －1 cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2008，374(3):517－521.