正交試驗優(yōu)選衍宗育子膠囊提取工藝△

李星宇，劉元，宋志釗，文志云

（廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022）

中藥工業(yè)

正交試驗優(yōu)選衍宗育子膠囊提取工藝△

李星宇，劉元*，宋志釗，文志云

（廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022）

目的：優(yōu)選衍宗育子膠囊最佳提取工藝條件。方法：采用正交試驗法安排試驗進行優(yōu)選，以淫羊藿苷總量為指標(biāo)，確定最優(yōu)提取工藝參數(shù)。結(jié)果：衍宗育子膠囊的最優(yōu)提取工藝條件為：浸泡0.5 h，提取溶劑量為10、8、8倍量，提取2次，提取2 h。結(jié)論：優(yōu)選得到的提取工藝質(zhì)量穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，設(shè)備簡單，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

衍宗育子膠囊；提取工藝；正交設(shè)計；淫羊藿苷

衍宗育子膠囊主要由淫羊藿、肉蓯蓉、巴戟天、蛇床子等中藥組成，是廣西民間驗方經(jīng)篩選后進行研制的中藥制劑。衍宗育子膠囊具有補腎壯陽，益氣生精之功效，臨床用于治療生成障礙性無精癥，對腎陽虛衰引起的男性不育療效顯著。方中君藥淫羊藿含淫羊藿苷成分，為本方中有效成分之一，用于腎陽虛之陽痿滑精，筋骨痿軟等［1］。本文采用正交設(shè)計法，以浸膏中淫羊藿苷含量為指標(biāo)成分，系統(tǒng)考察浸泡時間、提取溶劑量、提取次數(shù)及提取時間對淫羊藿苷的影響，優(yōu)化衍宗育子膠囊的提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20AVP紫外檢測器（島津國際貿(mào)易上海有限公司）；威瑪龍色譜工作站（南寧市威瑪龍色譜科技有限公司）；HH-S恒溫水浴箱（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）。

1.2 試藥

淫羊藿苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-200415）。中藥材購于南寧市中藥材公司，經(jīng)本院中藥所鑒定，均符合 《中國藥典》2010年版一部標(biāo)準(zhǔn)，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品中淫羊藿苷的含量測定［2］

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Apollo C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為乙腈 －水（30∶70），流速：1.0 mL·min－1，檢測波長：270 nm，進樣量為10μL；柱溫為室溫；理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1 500。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取稠膏2.0 g，置具塞錐形量瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，稱定重量，超聲處理1 h（90W，45 kHz），放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足缺失重量，搖勻，濾過，即得。

2.2 正交試驗

根據(jù)藥材吸水量預(yù)試驗，為了保證煎煮時水量的均一，第一次煮提時應(yīng)相應(yīng)提高加水量為藥材的2倍。選出影響水提的主要因素：藥材浸泡時間、提取溶劑量、提取次數(shù)、提取時間。首先進行單因素考察，得出藥材浸泡時間0，0.5，1.0 h 3個水平；提取溶劑量為8、6、6倍，10、8、8倍，12、10、10倍3個水平；一般提取次數(shù)為1次、2次、3次3個水平；提取時間為1，2，3 h 3個水平。因素水平見表1。采用L9（34）正交試驗表安排進行正交試驗。

2.3 試驗方法及結(jié)果分析

根據(jù)工藝要求，按處方量（1／10）稱取中藥9份（每份含淫羊藿42 g、巴戟天42 g、蛇床子42 g、肉蓯蓉33 g、菟絲子33 g、覆盆子33 g、黃芪42 g、西洋參8 g），按4個因素、每個因素3個水平，分別根據(jù)L9（34）正交表內(nèi)的9個試驗列號及條件進行9次提取試驗，將每次試驗的提取液濾過，合并提取液，提取液濃縮至稠膏，備用。測定每個實驗提取所得淫羊藿苷含量。對試驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理，見表2。方差分析見表3。

表1 水提工藝條件正交試驗因素水平表

表2 正交試驗L9（34）數(shù)據(jù)分析表及結(jié)果

表3 提取試驗方差分析表

從方差結(jié)果分析可知因素C（提取次數(shù)）和B（提取溶劑量）對結(jié)果的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義，而A（浸泡時間）和D（提取時間）對結(jié)果影響不具有統(tǒng)計學(xué)意義。再結(jié)合各因素K值進行分析，提取的最佳工藝是A3B3C3D2，故提取工藝條件最終確定為：（A）浸泡0.5 h，盡管浸泡1 h K值最高，但與浸泡0.5 h兩者之間相差不大，為節(jié)省時間，大生產(chǎn)可不予以考慮，故定浸泡時間為0.5 h；（B）提取溶劑量：10、8、8倍量，盡管12、10、10倍K值最高，但與10、8、8倍兩者之間相差不大，為節(jié)省溶劑，大生產(chǎn)可不予以考慮，故確定加水量為10、8、8倍量；（C）提取次數(shù)：2次，盡管提取3次K值最高，但與提取2次兩者之間相差不大，為節(jié)省時間、溶劑，大生產(chǎn)可不予以考慮，故確定提取次數(shù)為2次；（D）提取時間：2h。

2.4 驗證實驗

為了確認優(yōu)選的工藝條件的可靠性和穩(wěn)定性，按優(yōu)選工藝條件取相應(yīng)藥材進行3批驗證實驗，結(jié)果淫羊藿苷總量分別為 33.6，34.5，33.2 mg／100粒。

按處方量1／10倍稱取相應(yīng)藥材，提取得淫羊藿苷總量為33.8 mg，比正交試驗中提取得到的淫羊藿苷總量最高一組32.0 mg高出5.6%，表明此最佳工藝條件合理。

3 討論

衍宗育子膠囊為中藥復(fù)方制劑，考察生產(chǎn)工藝的優(yōu)劣之一是通過考察制劑中的有效成分含量進行的。中醫(yī)認為腎陽虛衰是大多數(shù)男性陽痿和不育最常見原因之一，其中下丘腦-垂體-性腺／腎上腺軸的功能紊亂是腎陽虛衰的病理基礎(chǔ)之一。淫羊藿性辛、味甘，溫，補腎陽，強筋骨，祛風(fēng)濕。用于陽痿遺精，筋骨痿軟，在方中起補腎壯陽作用?，F(xiàn)代研究表明淫羊藿及其炮制品均有雌、雄性激素樣作用，其有效成分淫羊藿苷可以在適合的劑量范圍內(nèi)直接促進垂體合成分泌GTH而直接作用于高級生殖調(diào)控中樞，達到補腎助陽的功效［3］。淫羊藿苷能濃度依賴性提高家兔陰式海綿體平滑肌cGMP濃度，對陰莖勃起的作用與其提高海綿體平滑肌cGMP濃度從而增強陰莖海綿體平滑肌松弛作用有關(guān)［4］，為治療性機能障礙奠定了內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)。因此將方中淫羊藿的有效成分淫羊藿苷作為本品制備工藝的考察指標(biāo)，與本品的功能具有較好的相關(guān)性，可以較好地反映本品的質(zhì)量。

［1］張森，譚建華，伊鵬霏，等.淫羊藿苷對生殖系統(tǒng)影響研究進展［J］.中獸醫(yī)藥雜志，2011，13（3）：76-77.

［2］賓天海，黃健軍.HPLC法測定穿龍骨刺膠囊中淫羊藿苷的含量［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2011，20（18）：37-40.

［3］張森，于海峰，李曉艷，等.淫羊藿苷對大鼠腺垂體細胞合成分泌 GTH的影響［J］.中獸醫(yī)藥雜志，2007，26（1）：17-19.

［4］付杰，喬梁，金泰乙，等.淫羊藿苷對家兔陰莖海綿體cGMP濃度的效果［J］.中國藥理學(xué)通報，2002（4）：430-433.

Optim ization of Extraction Technology for Yanzongyuzi Capsule by Orthogonal Experiment

LIXing-yu，LIU Yuan，SONG Zhi-zhao，Wen Zhi-yun
（Guangxi Institute for Chinese Medicine＆Pharmaceutical Science，Nanning530022，China）

Objective：To optimize the extraction technology of Yanzongyuzi capsules.M ethodsSellected the contents of Icariin as themost important factor，the extraction technology of Yanzongyuzi capsuleswas optimized by orthogonal experiment.Results：The optimal extraction technology of Yanzongyuzi capsules was adding 10，8，8 timeswater，soaking 30 minutes and extracting 2 h／time for 2 times.Conclusion：The optimal extraction technology applied to industrial production for stable quality，good reproducible and simple equipment.

Yanzongyuzi Capsules；Extraction；Orthogonal experiment；Icariin

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費科研課題（Z2011521）

*［通訊作者］劉元，Tel：（0771）5869102，E-mail：liuyuan0821＠vip.163.com

2012-02-06）