猴頭菌片高產菌株的優選

莊意麗，顧慧芬

（上海市中藥研究所，上海 201401）

猴頭菌片高產菌株的優選

莊意麗，顧慧芬*

（上海市中藥研究所，上海 201401）

目的：分離篩選優質猴頭菌菌株。方法：通過組織分離法獲得猴頭菌的純培養菌株，對12種不同菌株的猴頭菇菌絲長速長勢進行評價，并用HPLC法測定腺苷含量作為輔助方法，篩選優質猴頭菌菌株。結果與結論：從9個猴頭菌株中篩選出優質菌株，其中C-12菌株菌絲日生長速度最快，腺苷含量較高。

猴頭菌；優良菌株；腺苷

猴頭菇（Hericium erinaceus），味甘、性平、能利五臟、助消化、滋補，對消化不良、神經衰退與十二指腸潰瘍及胃潰瘍有良好的功效。是一種珍貴藥用真菌，隨著藥用真菌產品的開發，猴頭菇質量的好壞，對提高產品質量及產品穩定有著直接影響。猴頭菌片是由單味藥猴頭菌菌絲體組成，為了篩選具有較高穩定性的猴頭菌菌株，我們于2010年采集吉林長白山天然鮮野生猴頭菇進行組織分離，通過純化培養［1-5］，篩選出菌絲生長速度快、顏色潔白、菌絲密度大的猴頭菌菌株。

根據文獻報道猴頭菇其有效成分為多糖類和多肽類物質及蛋白質、氨基酸等，還含有相當含量的腺苷成分［6-8］。本試驗以腺苷含量測定可作為一種輔助方法對菌絲進行優良鑒別。現將試驗結果報道如下。

1 原材料

供試猴頭菇均采自吉林長白山天然鮮野生猴頭菇。

2 方法

2.1 培養基的制作

PDA培養基：馬鈴薯200 g，瓊脂20 g、葡萄糖20 g，水1 000 mL，自然pH值。

2.2 菌種分離和純化

以長白山天然鮮野生猴頭菇子實體作為多孢分離培養物。選取成熟度50%～60%的幼嫩子實體，擇優良種菇，去雜，用75%酒精沖洗種菇表面，再用無菌水沖洗干凈，無菌濾紙吸干，通過紫外照射進行表面消毒。切取菇體中間3 mm×3 mm左右菌塊接入培養基斜面中央，每種各接種10支試管，然后置于25℃培養箱中培養，每天定時觀察記錄菌絲體生長狀況，從中初篩出猴頭菌母種，再進行2次復篩。

2.3 菌絲生長速度比較

平板接種法用于菌絲生長速度的測定。將篩選出的菌株接種于（PDA）平面培養基中，每個猴頭菇菌株設5個重復。每平板中心接一塊2 mm×2 mm左右的菌種塊，于25℃恒溫下培養10 d，每日觀察記錄菌絲生長狀況，篩選出生長速度快、長勢好、色澤白的優良菌株。

2.4 腺苷含量比較

HPLC法用于測定猴頭菌絲體的腺苷含量［9］。

2.4.1 儀器與試藥 Agilent-1100高效液相色譜儀系統，VWD檢測器，腺苷對照品（中國藥品生物制品檢定所110879-200202），甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。

2.4.2 標準品溶液的制備 精密稱取恒重的腺苷對照品適量，置25 mL量瓶中，加15%甲醇溶解并稀釋至刻度，配置成濃度為0.016 mg·mL－1的腺苷對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 精密稱取猴頭菌絲體干粉0.1 g，加入25 mL 15%甲醇超聲提取30 min，過濾即得。上樣前用0.45μm微孔濾膜過濾。

2.4.4 色譜條件與系統的適用性 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 －0.01%乙酸 （9∶91）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25℃；檢測波長：260 nm；進樣量：10μL。在以上色譜條件下測定并記錄圖譜。

3 結果與分析

3.1 菌株分離培養結果

從12個多孢分離培養物中分離出9株猴頭菌株。

3.2 菌絲體生長比較結果

對9個猴頭菇菌絲體生長速度的測定及其菌絲長勢的觀察，篩選出菌絲生長均勻整齊、潔白、生長快、長勢好的優良菌株。根據表1數據以及方差分析顯示，猴頭菇C-12菌絲生長速度與其他菌株菌絲生長速度之間差異達極顯著水平，C-3與C-11，C-2與C-9、C-1，C-4與C-6、C-10之間差異均不顯著。C-12生長速度為（4.8±0.32）cm／10 d是長勢最好的菌株；其次是C-3和C-11；生長較慢的菌株是C-4、C-6和C-10，長勢也最差。

表1 菌絲體生長結果（n＝5）

3.3 腺苷含量比較結果

精密稱取9個猴頭菇菌絲0.1 g，按2.4.3供試品溶液的制備方法，制備成供試品溶液。以濃度為0.003 2 mg·mL－1的腺苷為對照品溶液，按2.4.4項下色譜條件進樣10μL，測定腺苷峰面積，計算含量。結果見表2。

液相色譜結果表明，樣品色譜圖中，在與標準品色譜峰相應的位置上有相同的色譜峰，主峰與其他色譜峰之間分離關系良好。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，標準品濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，得到回歸方程為：Y＝10.324X－1.244 7，r＝0.999 9。結果表明：腺苷在0.006 4～0.096μg吸收峰的面積與進樣量呈良好的線性關系。從表2可以看出C-12號菌株的腺苷含量相對較高。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）

4 討論

猴頭菇營養價值和藥用價值得到廣大消費者的認可。為了使猴頭菌達到高產、優質、抗逆性強、適應性強的育種目的，本試驗采用組織分離法獲得猴頭菌母種，通過純化培養，篩選出菌絲生長速度快、色白、菌絲密度大的優質猴頭菌菌株，從實驗結果可以看出，猴頭菌C-12菌株無論從菌絲長勢、腺苷含量都是極顯著好于其他菌株，可供推廣應用。

本試驗以腺苷含量可作為一種輔助標準對菌絲進行優良鑒別，采用高效液相色譜法對猴頭菌菌絲體中的腺苷進行了含量測定，獲得了滿意的結果，對判斷菌株的優劣提供輔助參考方法。

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［3］胡建偉，龔明福，賈巖峰.猴頭菌優良菌株篩選研究初報［J］.食用菌學報，2002，9（4）：44-46.

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［6］戚雁飛.HPLC測定復方猴頭膠囊中腺苷的含量［J］.中成藥，2002，24（3）：181-183.

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［9］顧慧芬，莊意麗，張夢玲.HPLC測定猴頭菌片中腺苷的含量［J］.中成藥，2012，34（7）：207-208.

Screen the high yielding producing strains for Hericium tablets

ZHUANG Yi-li，GU Hui-fen*
（Shanghai Institute of Chinese Materia Medica，Shanghai201401，China）

Objective：Study on screening of the high qualityHericium erinaceusstrains.M ethodsPure culture strains ofHericium erinaceuswere isolated from its body tissue.Screening of the high quality strains through evaluating the growth of12 kinds of differentHericium erinaceusstrains.Meanwhile，analyzing the contentof adenosine by HPLC was helpful for the screening.Results and ConclusionA pure culture strain named C-12 was selected out as it the highest one in growth and the content of adenosine.

Hericium erinaceus；High quality strains；Adenosine

*［通訊作者］顧慧芬，Tel：（021）37565589，E-mail：ghuif＠126.com

2012-03-22）