不同廠家復方丹參片的有效成分含量考察

楊春智，徐玉紅，李玉珍，姚苑梅，黃瑞英

(廣東醫學院附屬福田醫院，廣東 深圳 518033)

復方丹參片由丹參、三七和冰片組方，具有活血化瘀、理氣止痛功效，用于心血管疾病可顯著擴張冠狀動脈，增加血流量，減少心肌耗氧量，改善血液流變性[1]。丹參為方中君藥，活性成分主要分為脂溶性和水溶性成分兩大類，脂溶性成分主要為丹參酮ⅡA、隱丹參酮等，具有抗心肌缺血、抗菌、抗雄性激素作用;水溶性成分主要為丹酚酸類，如丹酚酸B，具有抗心肌缺血和增加冠狀動脈血流量等生物活性[2]。自1985年版《中國藥典》收錄復方丹參片后，其質量控制方法不斷改進[3]。但2010年版《中國藥典(一部)》對復方丹參片中兩類活性成分的代表成分丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量只規定了下限，未對其上限進行限定[1]。調查發現，不同廠家生產的市售復方丹參片中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量雖均符合中國藥典要求，但不同批次的復方丹參片活性成分含量存在較大差異[4-5]。本研究中，對幾家醫院使用的不同廠家生產的復方丹參片活性成分含量進行了連續跟蹤測定，并就有效成分含量的廠間一致性與批間穩定性進行了質量分析，希望能為醫院藥品招標選擇提供依據。

1 儀器和試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1322A真空脫氣機，G1315B-DAD檢測器，D1316A柱溫箱，rheodyne-7725i手動進樣器，ChemStation工作站;UV-2201型紫外分光光度計(日本島津);pHS-3C型精密pH計(上海精科雷磁儀器廠);AG285型電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司);數顯示隔水式電熱培養箱(上海浦東躍欣科學儀器廠)。丹參酮ⅡA對照品(批號為 1107662200417)，丹酚酸 B對照品(批號為1115622200605，含量98.15%)，均購于中國藥品生物制品檢定所;復方丹參片(市售品，來源于不同醫院臨床采購的A，B，C 3個生產廠家，每個廠家6個批次);甲醇(色譜純，天津市西華特種市劑廠)，乙腈(色譜純，天津四友)，純化水，其他試劑為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件[6]與系統適用性試驗

丹酚酸 B:色譜柱為 eclipseXDBC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.2%磷酸水溶液(40∶60)，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，檢測波長280 nm，理論塔板數按丹酚酸B色譜峰計大于3 000。丹參酮ⅡA:流動相為甲醇-水(85∶15)，檢測波長270 nm，其他條件與丹酚酸B相同，理論塔板數按丹參酮ⅡA色譜峰計大于3 000。按上述色譜條件，丹酸酮ⅡA和丹酚酸B的保留時間分別約為6.0 min和5.2 min，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品各10.0 mg，分別置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，搖勻分別作為丹參酮ⅡA和丹酚酸B的對照品貯備液;精密量取丹參酮ⅡA對照品貯備液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得質量濃度為100.0μg/mL的丹參酮ⅡA對照品溶液;精密量取丹酚酸B對照品貯備液2 mL，加水制成質量濃度為200.0μg/mL的丹酚酸B對照品溶液。取同一批次復方丹參片10片，精密稱定(糖衣片先除去糖衣)，研細，取約2.0 g，精密稱定，置具塞棕色量瓶中，每次加甲醇50 mL，超聲波(功率 100 W，頻率 40 kHz)提取 15 min，共 3次;過濾，合并提取液，水浴濃縮近干，加入少量甲醇溶解，轉移到50 mL量瓶中，用甲醇定容，作為供試品溶液。測定丹參酮ⅡA時，用微孔濾膜過濾后直接進樣;測定丹酚酸B時，將濾液稀釋10倍后進樣。

2.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線繪制:分別精密量取丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，依次分別吸取各質量濃度丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品溶液20μL，按上述色譜條件進樣測定。以質量濃度(C)為橫坐標、相應的峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A=1 169.82C+20.15，r=0.9999(丹參酮ⅡA)和 A=876.13C+61.20，r=0.999 8(丹酸酚 B)。結果表明，丹參酮ⅡA與丹酚酸B質量濃度分別在5.0～80.0μg/mL和10.0～160.0μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:分別配制低、中、高質量濃度的丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品溶液，依上述色譜條件每個濃度分別進樣5次，記錄丹酸酮ⅡA和丹酚酸B的峰面積。結果丹參酮ⅡA和丹酚酸B峰面積的 RSD均小于2%。

重復性試驗:取同廠家同批號的復方丹參片，依法平行制備5份供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定含量。結果丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量的 RSD分別為2.1%和1.8%。

加樣回收試驗:取已知丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量的樣品適量(約1 g)，精密稱定，分別精密加入低、中、高不同量的丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品后，按供試品溶液處理方法制得供試液并按上述色譜條件分別測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 丹參酮ⅡA和丹酚酸B加樣回收試驗結果(n=3)

穩定性試驗:分別取質量濃度為40μg/mL的丹參酮ⅡA和丹酚酸B對照品溶液，每隔一定時間測定1次。結果表明，對照品溶液至少在48 h內保持穩定。

2.4 樣品含量測定

取不同醫院臨床使用的來自3個生產廠家的樣品各6個批次，每批次平行測定3份，取其平均值作為該批次樣品含量。每份約稱取2.0 g，精密稱定后按2.2項下的方法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，計算丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量及含量變異系數(RSD)。3個廠家18批次樣品中丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量總體變異系數分別為19.5%和19.4%。對各廠家6批次樣品測定結果進行 t檢驗，除B廠和C廠在丹參酮ⅡA含量上存在明顯差異(P＜0.05)外，各廠樣品之間在丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量上無明顯不同(P＞0.05)。相同廠家不同批次樣品中丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量變異系數分別為11.9% ～22.9%和13.8% ～26.5%。詳見表2。

表2 3個廠家不同批次樣品含量測定結果

3 討論

復方丹參片作為傳統中藥制劑，對治療心腦血管疾病具有良好療效，臨床應用廣泛，但研究表明，不同廠家生產的復方丹參片制劑質量參差不齊，特別是藥典標準未有收載的復方丹參片制劑質量評價指標檢測結果不容樂觀[7-10]。從2005年版《中國藥典(一部)》開始，丹參藥材中脂溶性代表成分丹參酮ⅡA、水溶性代表成分丹酚酸B均作為含量監控指標納入復方丹參片的質量標準，但均只規定了控制下限。本研究中，采用自建高效液相色譜法測定含量[6]，對不同廠家不同批次的復方丹參片中有效成分含量進行了連續跟蹤檢測，3個廠家生產的共計18個批次的市售產品中丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量均符合《中國藥典》限量要求，除B廠和C廠6個批次的產品在丹參酮ⅡA含量上存在明顯差異外，各廠家6個批次的產品在有效成分含量上沒有明顯差別;但同一生產廠家不同批次產品間有效成分的含量卻呈現比較大的差異，丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量最高值與最低值相差1.4～1.8倍，批間含量較穩定的是A廠產品，B廠產品批間含量差異最大。批間含量穩定性有助于保證臨床用藥安全、有效，醫療機構在進行臨床藥品遴選時應盡可能選擇批間含量穩定性好的產品。

復方丹參片中含有丹參、三七等中藥材，其中丹參藥材經過提取以獲取有效成分，出現不同生產廠家以及同一生產廠家不同批次產品中丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量差異較大的原因，可能與丹參藥材的不同來源、不同產地、不同采收時間、不同加工方法等有關[11-12]。如何避免不同生產廠家、不同批次間有效成分含量的大幅波動，值得藥品審批監管部門、生產廠家思考。推行中藥材規范化種植，生產廠家應盡量使用GAP基地種植生產的優質藥材，可能是減少復方丹參片有效成分含量波動幅度的有效途徑。

此外，復方丹參片是一種復方制劑，臨床藥效的充分發揮有賴于各藥材有效成分的綜合作用。雖然我國藥典收載的復方丹參片質量標準不斷提高，市售的制劑產品質量也有很大提高[13]，但對其中的三七活性成分皂苷類、冰片中的主要成分均僅采用定性檢查的方式，未對其含量進行定量控制。研究表明，不同廠家生產的復方丹參片中上述兩種成分含量差異更大[8，10]。這不利于對復方丹參片的質量進行全面控制，建議不斷完善、提高藥品質量標準。

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