高效液相色譜法測定龍膽瀉肝湯顆粒中龍膽苦苷含量

許 仲 ，葉勝體 ，張 妥

(1.廣東省陽江市藥品檢驗所，廣東 陽江 529500; 2.廣東省陽江市中醫醫院，廣東 陽江 529500)

龍膽瀉肝湯顆粒是廣東省陽江市中醫醫院自擬處方制成的中成藥制劑，具有清熱解毒、瀉肝經實火、清利肝膽濕熱的功效，主治頭暈止赤、肋痛口苦、尿赤澀痛、濕熱帶下等諸癥。其質量標準為陽江市中醫醫院自擬，但其中沒有含量測定項。為確保藥品質量，保證用藥有效，筆者為其增加了龍膽苦苷的含量測定項，該方法靈敏度高、專屬性強、重現性好、結果準確?，F報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);AB135-S型電子分析天平(德國梅特勒公司)。龍膽苦苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110770-200510);龍膽瀉肝湯顆粒(廣東省陽江市中醫醫院，批號分別為 20090608，20090721，20090824);甲醇(分析純、色譜純)，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相為甲醇-水(21∶79);流速為1.0 mL/min;柱溫為40℃，檢測波為270 nm;進樣量為10μL。理論板數按龍膽苦苷峰計算大于3 500，分離度為2.01。

2.2 溶液制備

取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得對照品溶液。取本品，研細，精密稱定約15 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)20 min，冷卻，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取不含龍膽苦苷的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，按上述色譜條件進樣。結果見圖1，表明龍膽瀉肝湯顆粒中其他成分對龍膽苦苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱定龍膽苦苷對照品10.12 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;再精密量取上述溶液配制成20.42，32.67，40.84，49.01，61.26 μg/mL 的溶液。分別取上述溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖，以龍膽苦苷進樣量(μg)為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，得回歸方程 Y=12.548X+25.109，r=0.996 9(n=5)。結果表明，龍膽苦苷進樣量在20.42～61.26μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL(質量濃度為40.1μg/mL)，分別進樣5次。結果龍膽苦苷峰面積平均值為525.6，RSD為0.7%(n=5)，表明該方法精密度良好。

重復性試驗:取本品內容物(批號為20090608)各5份，分別精密稱定，依溶液制備方法制成5份供試品溶液，進樣10μL測定。龍膽苦苷平均含量為41μg/mL，RSD為1.2%(n=5)，表明該方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于開機 2 h后的 0，2，4，6，8 h分別進樣10μL，測定峰面積。結果的 RSD為0.9%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

加樣回收試驗:取同一批已知含量的樣品(批號為20090608，含龍膽苦苷6.82 mg/100 g)，分別加入一定量的龍膽苦苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂的色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法和色譜條件進行測定。結果批號為20090608，20090721，20090824的每100 g樣品含龍膽苦苷分別為 6.82，6.86，6.22 mg，平均為 6.63 mg。故擬訂龍膽瀉肝湯顆粒含龍膽以龍膽苦苷計，每100 g不得少于6.63 mg。

表1 龍膽苦苷加樣回收試驗

3 討論

用不同比例的甲醇-水作流動相進行試驗，結果表明，以甲醇-水(21∶79)為流動相時龍膽苦苷的峰形好，保留時間適中，柱效高，與其他干擾峰能很好地分離。總的來說，該方法靈敏度高、專屬性強、重現性好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:17.