不同等級白芍藥材中芍藥苷含量的分析

胡正余，徐以亮

(江陰天江藥業有限公司,江蘇 江陰 214434)

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徐以亮，Tel：(0510)86408091，E-mail：xyl009@126.com

不同等級白芍藥材中芍藥苷含量的分析

胡正余，徐以亮*

(江陰天江藥業有限公司,江蘇 江陰 214434)

目的測定不同等級白芍中芍藥苷的含量。方法采用反相HPLC法，色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：230 nm。結果芍藥苷進樣量在0.201 6～1.008 μg線性關系良好(r=0.999 9)，平均回收率為97.36%(RSD=1.27%)。19批樣品測定結果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。結論白芍現有的劃分等級的方法較好地體現了白芍的質量差異，為白芍的臨床使用和制藥企業選擇原料提供了依據。

白芍；芍藥苷；HPLC；含量測定

白芍[1]為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的根經過水煮去皮的干燥品，性微寒，具有養血調經，斂陰止汗，柔肝止痛，平抑肝陽的功能，用于血虛萎黃，月經不調，自汗，盜汗，脅痛，腹痛，四肢攣痛，頭痛眩暈。白芍中含有芍藥苷、牡丹酚、芍藥花苷、芍藥內酯以及揮發油和三萜類等化學成分，其中芍藥苷為其主要藥效成分，具有鎮靜、解痙、抗炎、抗應激性潰瘍等多方面的作用[2]，是白芍質量評價的指標成分。白芍主產浙江、安徽、四川等地，分別被稱為杭白芍、毫白芍以及川白芍。在長期實踐中，人們根據藥材傳統外觀、規格，將白芍劃分為杭白芍1～7等、白芍1～4等進行銷售。筆者以芍藥苷為指標，參考《中國藥典》2010版一部白芍【含量測定】項下相關規定，采用HPLC法對4個等級白芍樣品[3]的芍藥苷含量進行考察，為白芍的質量評價及臨床用藥提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent12000高效液相色譜儀、Agilent-G1311A四元泵、Agilent-G1322A真空脫氣器、Agilent-G1314B可變波長檢測器、CHEMSTATION B.04.01化學工作站(美國安捷倫公司)；超聲清洗機(無錫超聲電子設備廠)；電子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)；SD101-2電熱鼓風干燥箱(南通金石實驗儀器有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-200527，供含量測定用)；乙腈為色譜純(上海凌峰化學試劑有限公司)，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

白芍樣品產自安徽亳州，按照現行標準劃分為：一等1～4號，二等1～6號，三等1～5號，四等1～4號(一等：長8 cm以上，中部直徑1.7 cm以上，無蘆頭、花麻點、破皮、裂口、夾生；二等：長6 cm以上，中部直徑1.3 cm以上，間有花麻點；三等：長4 cm以上，中部直徑8 mm以上，間有花麻點；四等：長短粗細不分，間有夾生、破條、花麻點、頭尾、碎節或未去凈栓皮)。以上白芍藥材經江陰天江藥業有限公司唐波執業藥師鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactitloraPall.的去外皮干燥根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1% 磷酸溶液(14∶86)；柱溫：30 ℃；檢測波長：230 nm；理論塔板數按芍藥苷計算應不低于1 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成1 mL含芍藥苷100.8 μg的溶液，搖勻，即得。HPLC圖見圖1。

2.3 供試品溶液的制備

本品切片干燥，取適量打粉，稱取約0.1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超聲處理(功率240 W，頻率45 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，過微孔濾膜(0.45 μm)，即得。HPLC圖見圖2。

圖1 芍藥苷對照品HPLC圖

圖2 白芍藥材HPLC圖

2.4 線性關系考察

分別精密吸取芍藥苷對照品溶液(100.8 μg·mL-1)2，4，6，8 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20.16,40.32,60.48,80.64 μg·mL-1的系列對照品溶液。分別精密吸取上述不同濃度的對照品溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣，以芍藥苷峰面積積分值為縱坐標(Y)，芍藥苷進樣濃度為橫坐標(X)，計算得回歸方程Y=12.057X-5.45，r=0.999 9。結果表明芍藥苷進樣量在0.201 6～1.008 μg進樣濃度與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.5 精密度考察

精密吸取芍藥苷對照品溶液(100.8 μg·mL-1)5 μL，注入液相色譜儀分析，測定峰面積積分值，重復6次，計算其RSD=0.99%。結果表明精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密稱取白芍藥材(二等1號樣品)0.1 g，6份，按供試品溶液的制備方法制成供試液，分別進樣10 μL，測定。結果表明白芍藥材(二等1號樣品)中芍藥苷的平均含量為2.54%，RSD=1.27%。

2.7 穩定性試驗

取白芍二等1號樣品的供試品溶液，于0，1，2，4，6，8 h分別進樣10 μL，測定樣品中芍藥苷峰面積積分值，計算其RSD=1.14%。結果表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.8 回收率試驗

取已知含量的樣品(白芍二等1號樣品)0.05 g，精密稱定，分別加入芍藥苷對照品適量，按正文供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，分別進樣10 μL，注入液相色譜儀，測定。結果平均加樣回收率為97.36%，RSD=1.34%(n=6)，結果見表1。

2.9 樣品測定

分別取各樣品約0.1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，分別進樣10 μL，測定，計算含量，結果見表2。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗

表2 樣品測定結果 /%

3 結果與討論

不同等級的19批樣品測定結果表明，一等品中芍藥苷的含量在2.88%～3.54%，二等品中芍藥苷的含量在2.46%～2.78%，三等品中芍藥苷的含量在2.04%～2.32%，四等品中芍藥苷的含量在1.34%～1.97%。以芍藥苷的含量為指標，現有的規格等級劃分方法能較好地體現了白芍的質量差異，為白芍藥材的原料采購及制劑生產和臨床使用提供了依據。

以上測定所用白芍樣品均為4年生當年采收產白芍，且均為亳州產。白芍為藥材中的大宗商品，庫存量較大，在產量高時，入庫封存量較大，有的貯存期較長，在存放過程中，芍藥苷可能會降低。貯藏時間對白芍中芍藥苷含量的影響沒見報道，有待進一步研究。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：96-97.

[2] 吳菡子，熊南山．白芍的藥理研究與臨床應用[J]．中國醫院藥學雜志，1998，18(4)：172-173．

[3] 徐國鈞.中國藥材學[M].北京：中國醫藥科技出版社，1996：178-179.

DeterminationofPaeoniflorininPaeoniaeRadixAlbaofDifferentGradesbyHPLC

HU Zheng-yu， XU Yi-liang

(JiangyinTianjiangPharmaceuticalCo.,Ltd,Jiangyin214434，China)

Objective:To established a method for the determination of paeoniflorin in Paeoniae Radix Alba.MethodsRP-HPLC method was on Kromasil C18column (150 mm×4.6 mm, 5μm), with acetonitrile-0.1% phosphoric acid (14∶86) as mobile phase and detection wavelength at 230 nm. The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was 25 ℃.ResultsThe calibration curves of paeoniflorin were in good linearity at the range of 0.201 6～1.008 μg (r=0.999 9). The average recovery was 97.36% (n=6, RSD=1.27%). The results from 19 samples showed that the content of paeoniflorin was between 2.88% to 3.54% in first rank sample, 2.46% to 2.78% in second rank sample, 2.04% to 2.32% in third rank sample, 1.34% to 1.97% in fourth rank sample, respectively.ConclusionThe classification properly reflects the quality of Paeoniae Radix Alba according to content of paeoniflorin, and provides quality information for clinical use.

Paeoniae Radix Alba;Paeoniflorin; HPLC;Determination

2012-05-23)