大青龍湯對脂多糖致發熱大鼠的解熱作用研究△

鄒甜，田連起，葉曉川，張秀橋，周愛軍，劉焱文*

(1.湖北中醫藥大學 中藥資源與中藥復方教育部重點實驗室，湖北 武漢 430061；2.東莞市沙田醫院，廣東 東莞 523981)

東莞市科技局項目(東科[2010]111號)

*

周愛軍，E-mail：dgzhouaijun@163.com；劉焱文，E-mail：ywliu2008@163.com

大青龍湯對脂多糖致發熱大鼠的解熱作用研究△

鄒甜1，田連起1，葉曉川1，張秀橋1，周愛軍2*，劉焱文1*

(1.湖北中醫藥大學 中藥資源與中藥復方教育部重點實驗室，湖北 武漢 430061；2.東莞市沙田醫院，廣東 東莞 523981)

目的研究大青龍湯退燒解熱活性物質。方法采用內毒素致大鼠發熱模型,觀察大青龍湯不同化學物質部位解熱作用的效果。結果大青龍湯全方水煎劑及其多糖物質部位和生物堿提取物均對內毒素引起的大鼠體溫升高有明顯的抑制作用，在給藥3 h后就有較強的解熱作用，于3，4，6，7 h均與模型對照組比較差異有統計學意義，其解熱作用與阿司匹林相當。結論大青龍湯解熱效果顯著，其解熱的主要物質部位為生物堿提取物、多糖、揮發油及石膏。

大青龍湯；脂多糖；解熱；物質部位

“大青龍湯”為我國醫圣張仲景所著《傷寒論》的經典方劑，由麻黃、桂枝、炙甘草、杏仁、石膏、生姜、大棗7味組方，具有發汗解表，清熱除煩之功效；臨床用于外感風寒，表實無汗，兼有里熱之癥等病患[1]。該方劑歷經兩千余年的臨床實踐，療效確切。東莞市沙田鎮醫院周愛軍主治醫師近年采用“大青龍湯”加減方臨床治療流感患者數百例，效果顯著；特別針對高燒患者，退熱效果優于同類中西藥物。本實驗室前期將大青龍湯復方視為整體，按方中各藥所含化學成分的理化性質分類，將其分為揮發油、生物堿、酚酸類、苷類、多糖和水溶性成分等不同有效組分，對其抗流感病毒的有效物質部位進行篩選研究。為了進一步闡釋大青龍湯的藥效物質基礎，本論文通過建立SD大鼠發熱模型，視大青龍湯為整體，對方中植物藥不同有效組分進行了解熱的藥理學研究。

1 材料

1.1 藥物

1.1.1 各味飲片 大青龍湯中麻黃、桂枝、炙甘草、石膏、杏仁、生姜、大棗7味藥均購自湖北金貴中藥飲片有限公司，并經本實驗室張秀橋教授鑒定為正品。麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf.的干燥草質莖，桂枝為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝，杏仁為薔薇科植物山杏Prunusarm-eniacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟種子，甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖，生姜為姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根莖，石膏為硫酸類礦物石膏族石膏。

1.1.2 供試藥液的制備

1.1.2.1 大青龍湯全方供試液的制備 7味中藥用自來水浸泡40 min，加水煎煮兩遍。合并兩次煎液，過濾濃縮。

1.1.2.2 大青龍湯不同有效部位供試液的制備 按大青龍湯方中各藥配伍劑量比例，分別稱取麻黃、桂枝、甘草、杏仁、生姜、大棗適量。取桂枝和冷凍干燥后的生姜，粉碎，超臨界二氧化碳萃取得到超臨界CO2萃取物[2]；桂枝、生姜二藥經超臨界二氧化碳萃取后的藥渣與方中其他植物藥混合，用70%乙醇回流提取兩次，合并濾液，回收乙醇至適量，藥液用石油醚脫脂，將石油醚萃取后的殘液堿化，用三氯甲烷萃取5次，合并三氯甲烷萃取液，回收三氯甲烷得到生物堿；將三氯甲烷萃取后的殘液酸化，用乙酸乙酯萃取5次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得到酚酸類化合物；將乙酸乙酯萃取后的殘液用正丁醇萃取5次，合并萃取液，減壓回收正丁醇得到苷類化合物；取前述經70%乙醇回流提取方中植物藥所剩藥渣，加水煎煮兩次，合并煎液，濃縮，加無水乙醇至80%醇度，放置過夜，濾出沉淀為多糖。

1.2 試劑

脂多糖(Escherichia il，O55：B5, L2880,Sigma公司)。脂多糖(LPS)注射液的制備：無菌條件下，用0.9%氯化鈉溶液將脂多糖配成20 mg·L-1注射液，備用。阿司匹林(神威藥業有限公司，批號：1101021)。

1.3 動物

SD大鼠，雄性，體重180～220 g，購自華中科技大學同濟醫學院，合格證號：SCXK(鄂)2010-0007。在室溫(20±2)℃環境下分籠飼養，實驗前適應環境飼養一周。

1.4 儀器

DL-I型電子體溫計(江蘇魚躍醫用儀器有限公司)。

2 方法[3]

2.1 分組

大鼠每日測量體溫(肛溫)2次，連續2日，取兩次體溫的平均值記為基礎體溫。單次體溫超過38 ℃ 或2次溫差超過0.5 ℃的動物剔除。將合格的大鼠150只隨機分為15組，即空白對照組,模型組對照,阿司匹林對照組(0.2 g·kg-1)[4],大青龍湯全方水煎高、低劑量組，超臨界CO2萃取物高、低劑量組，生物堿提取物高、低劑量組，酚酸提取物高、低劑量組，苷類提取物高、低劑量組，多糖部位高、低劑量組，每組10只。實驗藥物高、低劑量組分別按5倍臨床用藥劑量(相當于生藥38.7 g·kg-1)和1倍臨床用藥劑量(相當于生藥7.74 g·kg-1)，各部位灌胃給藥劑量見表1。

2.2 動物處理及觀察指標

實驗前12 h，禁食不禁水。實驗時空白對照組及模型對照組灌胃給予蒸餾水，其他各組灌胃給藥；給藥后1 h空白組腹腔注射滅菌0.9%氯化鈉溶液，其他各組大鼠分別腹腔注射LPS(20 μg·kg-1)，誘發動物發熱。

體溫測定：取各組大鼠腹腔注射前二次測得的體溫平均值作為基礎體溫(T0)。各組動物分別于腹腔注射LPS后1 h開始測體溫(Ti)，以后每隔1 h測1次體溫，連續監測7 h。計算△T(△T=Ti-T0)，以時間為橫坐標，各組體溫△T為縱坐標，繪制體溫變化(△T-Time)曲線。

2.3 數據處理

3 結果

以時間為橫坐標，各組體溫△T為縱坐標，繪制體溫變化(△T-Time)曲線，結果見圖1。

圖1 大青龍湯及其不同物質部位對發熱模型大鼠△T變化的影響

模型組與空白組比較,模型組大鼠體溫明顯升高，每個時間點差異均有統計學意義，說明造模成功;其他各物質部位組與模型組比較，大青龍湯水煎液低劑量組在5 h差異有統計學意義(P<0.05),在3，4，6，7 h差異有統計學意義(P<0.01)，其高劑量組在3 h差異有統計學意義(P<0.05),在4，6，7 h差異有統計學意義(P<0.01)；生物堿低劑量組在3 h差異有統計學意義(P<0.05),在4，7 h差異有統計學意義(P<0.01)；多糖高劑量組在1、3、4、6 h差異有統計學意義(P<0.05)；而超臨界CO2萃取物、酚酸提取物及苷類提取物有解熱作用趨勢，但無統計學意義。說明大青龍湯全方解熱效果顯著，其主要解熱有效物質部位為生物堿、多糖。與阿司匹林比較，大青龍湯全方水煎液在1～4 h降溫幅度稍低，第5小時即與之相當，第6、7小時則效果優于阿司匹林，說明其全方水煎液起效稍慢，但藥效持續時間長。結果見表1。

表1 大青龍湯及其不同物質部位對內毒素致大鼠發熱的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與陽性對照組比較，#P<0.05,##P<0.01

4 討論

脂多糖(LPS)誘導發熱模型所用的劑量范圍較大，其劑量范圍為10～100 μg·kg-1。在探索LPS誘導大鼠發熱的最佳劑量時，本實驗選取了20，50，100 μg·kg-13個不同的劑量進行考察，結果表明100 μg·kg-1沒有明顯的致熱效果，50，20 μg·kg-1均可以誘導大鼠發熱，但20 μg·kg-1劑量引起實驗大鼠發熱熱勢高及持續時間較長，且腎毒性也較小，綜合各方面考慮，確定LPS劑量為20 μg·kg-1。大鼠在腹腔注射20 μg·kg-1LPS后在7 h內各觀察點的體溫均見顯著增高(P<0.05)，同時伴有寒顫、精神萎靡和輕微腹瀉等癥狀，表明該劑量LPS成功誘導了大鼠的發熱模型[5]。LPS誘導發熱起效較慢，宜較早給藥，所以本實驗提前1 h灌胃給藥[6]。

本方以麻黃為君藥，桂枝為臣藥，甘草味甘平，杏仁味甘苦，苦甘為助，佐麻黃以發表；大棗味甘溫，生姜味辛溫，佐桂枝以解肌；石膏味甘辛微寒，增加清熱除煩之效。實驗結果表明,大青龍湯全方水煎液，生物堿及多糖組分有顯著的解熱作用,其作用與阿司匹林相近。另據文獻報道，大青龍湯方中臣藥桂枝所含揮發油的主要成分桂皮醛具有明顯解熱作用[2,7]，石膏水煎液亦具有顯著解熱效果[8]。

根據本論文的研究結果和相關文獻資料綜合分析，我們認為，大青龍湯經典方劑退燒解熱效果顯著，其解熱的藥效物質基礎可能為方中生物堿和多糖等組分的配伍協同作用。

[1] 劉慶芳.大青龍湯藥效研究與應用[J].河南大學學報(醫學版)，2006,25(4)：70-72.

[2] 黃鶴歸，葉曉川，劉焱文,等.超臨界CO2萃取法與水蒸氣蒸餾法提取桂枝-干姜藥對的化學成分比較[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17(24)：85-92.

[3] 章卓，萬敬員，李洪忠，等.積雪草苷對脂多糖誘導大鼠發熱的預防及對相關炎癥因子的影響[J].中國藥理學與毒理學雜志，2007，21(3)：229-234.

[4] 梅全喜，田素英，鐘希文，等．復方土牛膝糖漿解熱、鎮痛作用研究[J].中國藥房，2006，17(22)：1695-1697.

[5] Dokladny K，Kozak A，Wachulec M，et al. Effect of heat stress on LPSinduced febrile response in D-galactosamine-sensitized rats[J].Am J Physiol Regul Integr Com PPhysiol，2001，280(2)：R338-R344.

[6] 張福利,許宏連,馬艷春,等.脂多糖對寒體、熱體、常體大鼠攻毒發熱后體溫曲線、一氧化氮的影響[J].中醫藥學報,2007,35(1)：17-19.

[7] 馬悅穎，李滄海，郭建友，等.桂皮醛解熱作用及機制的實驗研究[J].中國實驗方劑學雜志，2007，13(4)：22-25.

[8] 梁強，范書鐸，張曉玲，等.生石膏對發熱兔解熱作用的實驗研究[J].中國醫科大學學報，1991，20(1)：16-18.

StudyofDaqinglongTangConcerningLPS(lipopolysas-charideca)UseFebrileRats’AntipyreticEffects

ZOU Tian1，TIAN Lian-qi1，YE Xiao-chuan1，ZHOU Ai-jun2，LIU Yan- wen1

(1.ProvincialandMinistryofEducationKeyLaboratoryofResoureScienceandChineseHerbalCompoundinChineseMedicineHubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China;2.ShatianHospitalofDongguanCity，Dongguan523981，China)

Objective:To study antipyretic effects of Daqinglong Tang and filter out the main effective parts to antipyretic.MethodsUsing endotoxin induced fever method to observe effects of Daqinglong Tang antipyretic.ResultsDaqinglong Tang of all square decotion, Polysaccharide parts and Alkaloid parts bring significantly inhibition on rats body temperature rising that caused by Endotoxin. Their antipyretic effects were like aspirin.ConclusionAntipyretic effect of Daqinglong Tang was significant，and effective parts were alkaloid, polysaccharides，volatile oil and Gypsum Fibrosum.

Daqinglong Tang; Lipopolysaccharide; Antipyretic;Material part

2012-05-09)