口服補液鹽微生物限度檢查方法學驗證

耿濤 李曉波 邢漢學

口服補液鹽用于腹瀉患者，補充體液。為了更好的控制本品質量，本文筆者通過試驗，確定了其微生物限度檢查可采用常規法，結果該方法簡便易行重現性好，值得推廣使用。

1 試驗材料

1.1 試驗樣品 口服補液鹽批號:110416生產單位:北京曙光制藥廠

1.2 實驗菌株 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲莓。來源:由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.3 試藥 營養肉湯培養基、玫瑰紅培養基、營養瓊脂培養基、膽鹽培養基、PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、改良馬丁瓊脂培養基以上培養基均由:北京三藥科技開發有限公司生產;中國藥品生物制品檢定所監制。

2 細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗證

2.1 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌新鮮培養物接種至營養肉湯中，培養24 h，白色念珠菌的新鮮培養物接種至改良馬丁培養基在，培養24 h，手術上述培養物用0.9%氯化鈉溶液制成每1 ml含菌數50～100cfu的菌懸液，備用。接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂培養基中培養7天，進入5 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含孢子數為50～100cfu的孢子懸液，備用。

2.2 方法

2.2.1 常規法 供試液制備，取本品制成1:10的供試液，備用。

試驗組:取1:10的供試液1 ml于培養皿中，再依次加入已知菌數的試驗菌各1 ml按《中國藥典》2005年版微生物限度菌落計數方法測定菌落數。

菌液組:按《中國藥典》2005年版微生物限度菌落計數方法測定每1 ml菌落數。除不加供試液，操作同試驗組。

供試品對照組:取1∶10的供試液1 ml分別注入平皿中《中國藥典》2005年版微生物限度菌落計數方法測定本品的底數。稀釋液對照組;在PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液1 ml中加入已知菌數的試驗菌1 ml，按《中國藥典》2005年版微生物限度菌落計數方法測定菌落數。

菌回收計算

實驗結果，驗證試驗回收率結果見表1。

表1 驗證驗收回收率

從以上結果可以看出，在兩次平行試驗中，采用常規法檢驗口服補液鹽，人工加入菌液，稀釋劑對照組的回收率均高于70%，說明稀釋劑對測定無干擾。試驗組回收率均高于70%，細菌數測定、霉菌及酵母菌數均采用常規法檢驗。

3 控制菌檢查方法的驗證

供試品的制備:同菌落計數

試驗組:取供試液10～100 ml膽鹽乳糖培養基中同時加入10～100cfu/ml大腸埃希菌1 ml。

陰性菌對照組:方法同試驗組，加入10～100cfu/ml金黃色葡萄球菌1 ml代替大腸埃希菌。

結果:試驗菌檢出大腸埃希菌，陰性菌對照組未檢出金黃色葡萄球菌。

4 驗證試驗小結

根據驗證試驗結果，確定口服補液鹽微生物限度檢出法為:細菌數測定、霉菌和酵母菌及控制菌檢出均采用常規法測定。方法如下:取本品10 g加入PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液100 ml中，搖勻，使成1:10供試液照《中國藥典》2005年版微生物限度項下常規法進行檢查。