自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植對(duì)失代償期肝硬化患者肝臟生化及纖維化指標(biāo)的影響

呂明磊 劉琴 賈秋龍 甄増國(guó)

自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植對(duì)失代償期肝硬化患者肝臟生化及纖維化指標(biāo)的影響

呂明磊 劉琴 賈秋龍 甄増國(guó)

目的觀察自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植對(duì)失代償期肝硬化肝臟生化及纖維化指標(biāo)的影響，為臨床治療提供新方法。方法選擇我院失代償期肝硬化住院患者80例，隨機(jī)分為2組:對(duì)照組40例，給予常規(guī)對(duì)癥支持治療、護(hù)肝治療及必要的抗病毒治療。治療組40例，在對(duì)照組常規(guī)治療方法基礎(chǔ)上，采取經(jīng)肝動(dòng)脈途徑自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植。觀察術(shù)后臨床癥狀改善及不良反應(yīng)情況，并于術(shù)后2、4、8、12周進(jìn)行肝功能、凝血功能檢測(cè)，術(shù)后12周進(jìn)行肝纖維化指標(biāo)檢測(cè)。將術(shù)后12周時(shí)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果治療組術(shù)后第1周全部患者(100%)乏力、納差癥狀改善，35例(87.5%)腹脹減輕，而對(duì)照組只有2例(5.0%)乏力、納差癥狀改善，6例(15%)腹脹減輕，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);治療后12周，治療組和對(duì)照組血清ALB水平分別為(38.5±8.2)g/L和(25.4±7.5)g/L，ALT和AST水平分別為(36.3±13.5)U/L，(33.6±14.5)U/L和(70.2±13.3)U/L，(68.6±13.8)U/L，TBIL水平分別為(28.3±12.4)μmol/L和(42.3±16.3)μmol/L，PTA分別為(63.0±11.4)%和(37.2± 12.5)%，治療組肝纖維化指標(biāo)明顯改善。兩組治療后肝臟生化及纖維化指標(biāo)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。治療組2例在治療后第2天出現(xiàn)低熱，未發(fā)現(xiàn)其他不良反應(yīng)及并發(fā)癥。結(jié)論自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療失代償期肝硬化安全有效，在肝功能、凝血功能及肝纖維化指標(biāo)改善方面均有顯著作用。

骨髓干細(xì)胞;移植;肝硬化

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年6月至2011年6月間在我院住院的失代償期肝硬化患者80例，男52例，女28例，年齡22～72歲，平均48歲，其中包括乙型肝炎肝硬化58例，丙型肝炎肝硬化l7例，酒精性肝硬化5例。治療前均存在肝硬化常見(jiàn)癥狀和體征，包括納差、乏力、腹脹，同時(shí)經(jīng)腹部B超或CT檢查，明確診斷肝硬化，部分并合并腹水。實(shí)驗(yàn)室檢查包括血常規(guī)，凝血酶原活動(dòng)度(PTA)，甲胎蛋白(AFP)，肝功能包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)，肝纖維化指標(biāo)包括透明質(zhì)酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)和四型膠原(ⅣC)等。肝功能分級(jí)屬Child-Pugh B/C級(jí)。無(wú)感染和原發(fā)性肝癌等并發(fā)癥。將患者隨機(jī)分為兩組，治療組40例，對(duì)照組40例，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 治療方法 對(duì)照組給予內(nèi)科支持治療，包括保肝、利膽、利尿及對(duì)癥治療等。酌情給予肝水解肽100 mg、還原性谷胱甘肽1.2 g，或促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素120 mg、復(fù)方甘草酸苷120 mg等分別加入5%葡萄糖或0.9%氯化鈉注射液100 ml中靜脈滴注，1次/d，同時(shí)適當(dāng)限鈉限水。療程4～6周。對(duì)乙肝病毒復(fù)制活躍的乙肝肝硬化患者，給予必要的抗病毒治療。治療組在對(duì)照組上述治療的基礎(chǔ)上采取經(jīng)肝動(dòng)脈途徑行自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療。

1.3 術(shù)前準(zhǔn)備 干細(xì)胞移植術(shù)前1 d房間消毒、行碘過(guò)敏試驗(yàn)、雙側(cè)腹股溝備皮、消除其緊張情緒;移植術(shù)當(dāng)日簽署知情同意書(shū)，隔離患者。

1.4 骨髓干細(xì)胞采集及分離 取兩側(cè)髂后上棘為穿刺點(diǎn)，局部消毒麻醉，在無(wú)菌條件下，以l8號(hào)骨髓穿刺針穿刺，抽取骨髓200 ml，以7500 U肝素抗凝，然后采用密度離心法進(jìn)行骨髓干細(xì)胞的體外分離及純化，將得到的干細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液稀釋成骨髓干細(xì)胞懸液10 ml。

1.5 骨髓干細(xì)胞移植 在DSA下經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管，置管于肝固有動(dòng)脈進(jìn)行造影，觀察肝內(nèi)血管情況。將待用的骨髓干細(xì)胞懸液10 ml于0.5 h內(nèi)經(jīng)左右肝動(dòng)脈緩慢注入;術(shù)畢拔管，穿刺點(diǎn)加壓包扎后返回病房，穿刺側(cè)下肢制動(dòng)24 h。

1.6 觀察指標(biāo) 全部病例治療前均查血常規(guī)、PTA、AFP，肝功能、肝纖維化指標(biāo)等，術(shù)后2、4、8、12周復(fù)查血常規(guī)、PTA、AFP、肝功能，術(shù)后12周復(fù)查肝纖維化指標(biāo)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用成對(duì)資料的t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀的改善情況 干細(xì)胞移植術(shù)后第1周開(kāi)始本組全部患者(100%)乏力、納差癥狀有明顯的改善，面色有光澤，35例(87.5%)腹脹減輕，而對(duì)照組患者只有2例(5.0%)乏力、納差癥狀明顯改善，6例(15%)腹脹減輕，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 肝臟生化指標(biāo)及凝血功能的改善情況 治療組自術(shù)后第2周血清白蛋白水平開(kāi)始上升，第4周PTA有明顯改善。術(shù)后第12周時(shí)，TBIL下降水平顯著高于對(duì)照組;兩組肝功能指標(biāo)及凝血酶原活動(dòng)度變化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，詳見(jiàn)表1。兩組治療后血清AFP及外周血紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)無(wú)明顯的變化(具體數(shù)據(jù)未列出)。

2.3 肝纖維化指標(biāo)改善情況 術(shù)后第12周時(shí)，兩組肝纖維化指標(biāo)變化情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，詳見(jiàn)表2。

表1 兩組患者術(shù)后第12周時(shí)肝功能指標(biāo)和PTA變化情況比較±s)

組別 例數(shù) ALB(g/L) ALT(U/L) AST(U/L) TBIL(μmol/L) PTA(%)治療組 40 38.5±8.2 36.3±13.5 33.6±14.5 28.3±12.4 63.0±11.4對(duì)照組 40 25.4±7.5 70.2±13.3 68.6±13.8 42.3±16.3 37.2±12.5 t值 7.456 -11.315 -11.058 -4.324 9.645 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

表2 兩組患者術(shù)后第12周時(shí)肝纖維化指標(biāo)變化情況比較(x±s)

2.4 不良反應(yīng) 治療組中除2例術(shù)后第2天出現(xiàn)低熱，第3天恢復(fù)正常外，未發(fā)現(xiàn)其他不良反應(yīng)及并發(fā)癥。

3 討論

肝硬化是各種慢性病因?qū)е赂渭?xì)胞壞死、纖維組織增生、結(jié)構(gòu)破壞、形成假小葉、肝質(zhì)地變硬的常見(jiàn)疾病，治療重點(diǎn)在于有效促進(jìn)肝細(xì)胞再生并代替纖維組織。研究發(fā)現(xiàn)，在各種原因?qū)е碌母渭?xì)胞急慢性損傷的修復(fù)過(guò)程中，肝細(xì)胞再生起重要作用。骨髓干細(xì)胞是一種具有向某些成體細(xì)胞進(jìn)行分化潛能的細(xì)胞，是肝細(xì)胞的重要肝外來(lái)源［2］。由骨髓干細(xì)胞定向分化而來(lái)的肝細(xì)胞能夠很好地替代已損傷的肝細(xì)胞而發(fā)揮正常的生理代謝作用，進(jìn)而使得肝臟解毒、合成等諸多功能得到較大程度的恢復(fù)，而且可以逆轉(zhuǎn)肝纖維化過(guò)程［3］。國(guó)內(nèi)姚鵬等［4］首先采用自體骨髓干細(xì)胞治療慢性肝衰竭，發(fā)現(xiàn)其在癥狀改善和降低病死率方面效果明顯;金波等［5］證實(shí)自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植后，肝臟的合成功能可以很快提升，且能更快地改善肝臟的解毒及儲(chǔ)備功能，在恢復(fù)殘余肝功能容量方面與常規(guī)治療比較顯出更強(qiáng)的療效優(yōu)勢(shì)。自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療有以下優(yōu)點(diǎn)［6］:①骨髓干細(xì)胞源于自體，取材方便。②療效較明顯。③費(fèi)用較低。④風(fēng)險(xiǎn)性小。骨髓抽取過(guò)程簡(jiǎn)單，采用的介入微創(chuàng)技術(shù)目前也已經(jīng)很成熟。術(shù)后患者大多恢復(fù)良好。

我們對(duì)40例失代償期肝硬化進(jìn)行自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療，發(fā)現(xiàn)全部患者消化道癥狀有不同程度的改善，并于治療后第2周血清白蛋白水平開(kāi)始顯著提升，第4周時(shí)凝血酶原活動(dòng)度有明顯改善，第12周時(shí)TBIL下降水平顯著高于對(duì)照組，肝纖維化指標(biāo)明顯改善，更進(jìn)一步證實(shí)了該項(xiàng)治療在肝功能、凝血功能及肝纖維化指標(biāo)改善方面均有顯著作用。治療組除2例術(shù)后第2天出現(xiàn)低熱，第3天恢復(fù)正常外，未發(fā)現(xiàn)其他不良反應(yīng)及并發(fā)癥，表明該療法是安全的。

自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療失代償期肝硬化患者療效顯著，可明顯改善患者的臨床癥狀和體征，抑制病情發(fā)展速度，提高患者生存質(zhì)量。但骨髓干細(xì)胞移植的研究目前仍然存在很多問(wèn)題，如干細(xì)胞是否需要在體外進(jìn)行擴(kuò)增、干細(xì)胞經(jīng)不同途徑進(jìn)行移植的優(yōu)勢(shì)比較、干細(xì)胞移植數(shù)量和移植手術(shù)次數(shù)的多少對(duì)臨床治療效果的影響等，有待以后進(jìn)一步探討。

［1］姚鵬，胡大榮，王帥，等.重型肝炎的自體骨髓干細(xì)胞移植治療評(píng)估.傳染病信息，2009，22(5):288-290.

［2］胡敏.肝臟干細(xì)胞與肝臟再生.傳染病信息，2011，24(3): 129-131.

［3］Shackel N，Rockey D.In pursuit of the“Holy Grail”-stem cells，hepatic injury，fibrogenesis and repair.Hepatology，2005，41(1): 16-18.

［4］姚鵬，胡大榮，王帥，等.自體骨髓干細(xì)胞移植治療慢性肝衰竭研究.肝臟，2005，10(3):171-173.

［5］金波，孟繁平，馮宇，等.肝動(dòng)脈超選灌注自體骨髓干細(xì)胞治療失代償期乙型肝炎肝硬化的臨床研究.傳染病信息，2011，24 (3):143-146.

［6］周健，劉黎，李多云，等.自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝硬化失代償期患者的臨床效果.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2010，38(5):467-470.

The influence of autologous bonem arrowstem cells transp lation on the indicators of biochem ical and fibrosis liver of the patients with decom pensated cirrhosis

LVMing-lei，LIU Qin，JIAQiu-long，et al.

De-partment of Liver Disease，Xinxiang Infectious Disease Hospital，Xinxiang 453000，China

ObjectiveTo provide newmethods for clinical treatment through observing the influence of autologous bonemarrowstem cells transplation on the indicators of biochemical and fibrosis liver of the patients with decompensated cirrhosis.Methods80 patients with decompensated cirrhosis in Xinxiang Infectious Disease Hospital were randomly divided in two groups:40 patients in control group were given regular symptomatic support treatment，liver protection treatment and the necessary antiviral treatment.On the basis of regular treatment of control group，40 patients in treatment group were taken the hepatic artery way autologous stem cell within the liver transplantation.Observe the postoperative clinical symptoms improvement and adverse reaction conditions of the patients;detect liver function and coagulation function in 2nd，4th，8th，12th weeks after the operation;to detecthepatic fibrosis indicators in the12thweek after the operation.At last，the test results in the 12thweek were compared.ResultsIn the 1rdweek after the operation，all patients(100%)in treatment group had improved their weakness and NaCha Symptoms，35 cases(87.5%)had reduced their abdominal distensions.While only 2 cases(5.0%)had improved their weakness and NaCha Symptoms，6 cases(15%)had reduced their abdominal distensions.The difference between two groups had a statistical significance(P＜0.05) .12 weeks after the treatment，serum ALB leverl of treatment group and control group are(38.5±8.2)g/L and(25.4±7.5)g/L.ALT level and AST level are(36.3±13.5)U/L and(33.6±14.5)U/L and(70.2± 13.3)U/L，(68.6±13.8)U/L.TBLL level are(28.3±12.4)μmol/L and(42.3±16.3)μmol/L;PTA are(63.0±11.4)%and(37.2±12.5)%.Patients in treatment group had clearly improved their hepatic fibrosis indicators.The difference between the two group in camparasion of the indicators of liver biochemistry andfibrosis has a statistical significance(P＜0.01).2 patients in treatment group suffered lowfever in the 2ndday after the treatment，no other adverse reactions and complications were found.ConclusionIt is safe and effective to use autologous bonemarrowstem cells transplation to treat the patients with decompensated cirrhosis.There are significant role in the improvementof liver function，coagulation function and the indicators of liver fibrosis.

Bonemarrowstem cell;Transportation;Liver cirrhosis

453000 河南省新鄉(xiāng)市傳染病醫(yī)院肝病科

失代償期肝硬化尚無(wú)理想治療方法。研究表明采用自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植，可使干細(xì)胞在肝臟中生長(zhǎng)分化為肝細(xì)胞，使損傷的肝功能得以恢復(fù)和重構(gòu)［1］。本研究采取經(jīng)肝動(dòng)脈插管途徑行自體骨髓干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療失代償期肝硬化，通過(guò)觀察該治療方法對(duì)患者臨床癥狀、肝臟生化及纖維化指標(biāo)的影響，對(duì)其療效和安全性進(jìn)行了探討和驗(yàn)證。