禽大腸桿菌和沙門氏菌混感的診斷與藥敏試驗

張榮武 （山東省陵縣畜牧局 253500）

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禽大腸桿菌和沙門氏菌混感的診斷與藥敏試驗

張榮武 （山東省陵縣畜牧局 253500）

利用采自萊蕪市某發(fā)病雞場的病料，研究其致病原因并進行藥敏試驗。通過運用細菌分離培養(yǎng)鑒定、生化試驗來鑒別分離自發(fā)病雞群的致病菌。對采自發(fā)病雞群的細菌進行藥物敏感性試驗。結果顯示，分離自發(fā)病雞群的細菌有2種，分別為大腸桿菌與沙門氏菌。大腸桿菌對頭孢曲松與頭孢噻肟中度敏感；沙門氏菌對頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感；對頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、強力霉素敏感。

大腸桿菌 沙門氏菌 藥敏試驗

2011年11月，萊蕪某海藍褐雞場爆發(fā)疾病，患病雞多為15日齡，死亡率30%。患病雞精神沉郁，呆立，垂頭縮頸，兩翅下垂，羽毛松亂，食欲減少，飲欲增加。剖檢發(fā)現肝臟表面有纖維素滲出，肝臟上面有針尖大小壞死灶，氣囊渾濁，腎臟蒼白。經藥物多次治療無效，為進一步確定該疾病的病原菌筆者進行了實驗室分離診斷。通過對分離菌的鑒定確定了病原。

1 材料及方法

1.1 主要試劑 MH培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、SS瓊脂、生化試劑管均購自杭州天和微生物試劑有限公司。藥敏紙片購于北京天壇藥業(yè)生物技術開發(fā)公司。

1.2 分離及初步鑒定 用無菌接種環(huán)取病死雞的肝臟、心臟病料，劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18~ 24h，在麥康凱瓊脂平板上挑取紅色菌落接種于伊紅美藍平板，挑取無色透明菌落接種于SS平板進行鑒別培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18~24h。挑取伊紅美藍平板疑似大腸桿菌的菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板上面標號SD-1，挑取SS平板上面疑似沙門氏菌的菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板上面標號SD-2。分別挑取純培養(yǎng)，革蘭氏染色，觀察細菌形狀和染色特性。

1.3 生化反應鑒定 將分離疑似沙門氏菌菌株接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素、硫化氫，并進行枸櫞酸鹽利用、吲哚試驗和V-P試驗等生化試驗，置于37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察。將符合大腸桿菌形態(tài)特征的細菌接種于蔗糖、水楊酸、D－木糖、硫化氫、衛(wèi)矛醇、乳糖、麥芽糖、L－阿拉伯糖、甘露醇、間－肌醇、尿素酶、七葉苷水解、葡萄糖、山梨醇、吲哚、M－R、V－P、枸櫞酸鹽利用、明膠液化等 19項生化實驗。

1.4 分離菌藥物敏感性試驗 用接種環(huán)于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上挑取分離純化的大腸桿菌菌落4~5個，接種于3~5mlLB液體培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)12h，用生理鹽水稀釋至與0.5麥氏標準比濁管濁度相同的濃度。在15min內，用貼無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后均勻涂布于M-H瓊脂平板上，待干。用鑷子蘸取95%乙醇并通過火焰，待燒干后再蘸取乙醇重復上述操作，共3次。待冷卻后，用此無菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm，37℃溫箱培養(yǎng)24h觀察結果。沙門氏菌藥敏試驗同大腸桿菌。用大腸桿菌ATCC25922作為質控菌。試驗選取藥敏片：阿莫西林、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、丁胺卡那、慶大霉素、安普霉素、強力霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。

2 試驗結果

2.1 分離鑒定試驗結果 分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上存在2種菌落，一種菌落為鮮桃紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑濕潤。另一種菌落為圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明中間呈黑色、邊緣整齊、中等大小的菌落。標號為的菌落在伊紅美藍培養(yǎng)基上生長為紫黑色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤。標號為SD-2的菌落在SS培養(yǎng)基上形成無色透明，圓形、微凸、光滑濕潤、邊緣整齊菌落。SD-1革蘭氏染色鏡檢發(fā)現細菌呈陰性桿菌，SD-2革蘭氏染色陰性短小桿菌。初步判定SD-1為大腸桿菌，SD-2為沙門氏菌。

2.2 分離菌SD-1菌鑒定結果 如表1所示根據《伯杰氏手冊》上面關于大腸桿菌鑒定，可以確定SD-1該株細菌為大腸桿菌。

表1 SD-1生化特性

2.3 分離菌SD-2菌鑒定結果 如表2所示根據《伯杰氏手冊》上面關于沙門氏菌鑒定，可以確定SD-2該株細菌為沙門氏菌。

表2 SD-2生化特性

2.4 藥敏試驗結果 由表3可知該次試驗分離的大腸桿菌對于阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、安普霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐藥，對于強力霉素、紅霉素、丁胺卡那耐藥，對于頭孢曲松、頭孢噻肟中度敏感。沙門氏菌高度耐受的藥物有阿莫西林、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。沙門氏菌對于氨芐西林耐藥，對于頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感，對于頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、強力霉素敏感。

表3 藥敏試驗抑菌圈直徑 (mm)

注：“R”代表耐藥，“I”代表中介，“S”代表敏感

3 結論

通過實驗室診斷可以確診該雞場是由于大腸桿菌與沙門氏菌混合感染所導致的疾病。藥敏試驗顯示大腸桿菌與沙門氏菌均對于頭孢噻肟、頭孢曲松敏感，所以臨床治療可選用頭孢曲松或頭孢噻肟用于該病的治療。

近幾年通過藥物預防和治療沙門氏菌所引起的雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒等疾病已經得到了有效的控制，但是2011年下半年以來沙門氏菌致病現象有增加的趨勢。通過藥敏試驗發(fā)現沙門氏菌耐藥性有強的趨勢，這種現象的發(fā)生與臨床上抗生素濫用有一定的關系。

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（2012–04–19）

S852.61+2

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1007-1733(2012)07-0010-02