藥用植物烏頭內生真菌研究

李治瀅　陳有為　楊麗源　李紹蘭　吳少華　

摘要從藥用植物烏頭的側根、莖、葉、花中分離獲得內生真菌164株，將其中的151株根據顯微形態觀察進行分類鑒定，它們歸屬于6個目、9個科、23個屬，其中毛霉屬、黑孢屬、頭孢霉屬、芽枝霉屬和交鏈孢屬為該植物內生真菌的優勢屬，表明藥用植物烏頭不同部位內生真菌在種群、數量及分布上具有多樣性特征，在側根上分布得最多。

關鍵詞烏頭；內生真菌；分離；分類鑒定 ；多樣性

中圖分類號R282.5文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2009）07-0007-02

烏頭（Aconitum Carmichaeli Debx．）為毛莨科（Ranunculaceae）烏頭屬（Aconitum L.）多年生草本植物。該植物全株有毒，母根為川烏，母根上所附生的側根為附子。主產四川、陜西，云南、貴州、河北、湖南、湖北、江西、甘肅等省也有栽培。烏頭含有多種生物堿，具有抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗腫瘤、強心、降血壓、擴血管等作用[1]。在農業上有殺蟲作用[2] 。

目前，國內外對植物內生真菌的研究報道較多，許多來自植物的天然化合物與植物的內生真菌有密切的關系，甚至也是內生真菌的次生代謝產物[3]。對烏頭的研究報道較多的是它的藥效、藥用成分的分離提取、毒性、種植、田間管理和病蟲害的防治等[4-6]。筆者對烏頭植物內生真菌作了系統的研究，從內生真菌的分離、分類鑒定到活性物質的篩選和分離提取，以期為研究烏頭植物內生真菌提供依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試植物。烏頭樣品采自昆明市云南大學微生物所栽培的烏頭植物。

1.1.2培養基。①分離培養基：PDA培養基（馬鈴薯葡萄糖培養基），使用前1mL培養基中加80IU的青霉素，以抑制細菌生長。②分類鑒定培養基：PDA培養基和促孢培養基（KH₂PO₄，MgSO₄·7H₂O，KNO₃，KCl，葡萄糖，蔗糖）。

1.2試驗方法

1.2.1內生真菌的分離培養。首先用自來水沖洗烏頭植物表面的泥沙，去除母根，接著進行表面消毒、分離和培養。方法參照文獻[7]。

1.2.2內生真菌的分類鑒定。采用插片培養方法，對分離獲得的內生真菌進行顯微形態特征的觀察、分類鑒定。分類檢索參照文獻[8，9]。

2結果與分析

2.1烏頭植物內生真菌的種群組成

從烏頭植物中分離獲得內生真菌164株，將其中的151株根據顯微形態觀察進行分類鑒定，歸屬于6個目9個科23個屬（見表１）。

從表１可以看出，在分離獲得的烏頭植物內生真菌中，以毛霉屬（Mucor）、黑孢屬（Nigrospora）、頭孢霉屬（Cephalosp-orium）、芽枝霉屬（Cladosporium）和交鏈孢屬（Alternaria）較多，這５個屬為烏頭植物內生真菌的優勢屬。其次是木霉屬（Trichoderma）和曲霉屬（Aspergillus）。剛毛孢屬（Pleiochaeta）、頭囊聚孢霉屬（Cephaliophora）、假絲酵母菌屬（Candida）和小克銀漢霉屬（Cunninighamella）最少，均只有1株。

2.2烏頭植物不同部位內生真菌的種群分布

在分離獲得的164株烏頭植物內生真菌中，側根上分離的內生真菌在數量和種群上都是最多的，有78株（占總菌株的47.56%）16個屬（占23個屬的69.57%）；其次是莖部分離的有54株（占32.93%）15個屬（占65.22%）；葉部和花上分離的內生真菌在數量和種群上都較少，分別為17株（占10.37%）和15株（占9.15%），均是7個屬（占30.43%）（見表2）。

從表2可以看出，在側根部位分離的內生真菌種群中，毛霉屬和木霉屬為其優勢屬種，分別為15株和9株，各占側根部內生真菌的19.23%和11.54%；黑孢屬和芽枝霉屬為莖部內生真菌的優勢屬種，分別為13株（占莖部內生真菌的24.07%）和9株（占16.67%）；葉部內生真菌的優勢屬種是黑孢屬和盤多毛孢屬（Pestalotia），分別有6株（占葉部總菌株數的35.29%）和3株（占17.65%）；芽枝霉屬和毛霉屬為花部內生真菌的優勢屬種，均為3株，占花部內生真菌總數的20.00%。

從表2還可以看出，毛霉屬、盤多毛孢屬、組絲核菌屬（Phacodiun）和黑孢屬在烏頭植物各部位都有分布；交鏈孢霉屬在側根、莖和花上有分布，而在葉上沒有分布；球殼孢屬（Sphaeropsis）除了在花上沒有分離獲得外，在烏頭植物的其他部位均可分離獲得；假絲酵母菌屬、木霉屬、鐮孢霉屬（Fusarium）、卷枝霉屬（Pireella）、根霉屬（Rhizopus）、葡萄孢屬（Botrytis）和小克銀漢霉屬只在側根部有分布；而剛毛孢屬和束絲菌屬（Ozonium）只在莖部才有分布；頭囊聚孢霉屬只在花上分離得到。

3結論與討論

（1）毛霉屬不僅是烏頭植物內生真菌的優勢種群，同時也是附子植物側根部和花部內生真菌的優勢屬種；而黑孢屬既是烏頭植物內生真菌的優勢種群，又是其莖、葉部位的優勢屬種；芽枝霉屬則是烏頭植物及其莖、花部的優勢種群。

（2）在烏頭植物側根、莖、葉和花等部位分離獲得的內生真菌在數量和種群分布上存在差異，在側根部位分離獲得的內生真菌最多，其次是莖部，在葉和花上分離獲得的內生真菌較少，側根部和莖部的內生真菌種群明顯多于葉部和花部。這表明烏頭植物不同部位內生真菌在種群、數量及分布上具有多樣性特征。

（3）烏頭植物的側根就是藥用附子，本次烏頭植物內生真菌的分離結果表明，無論在內生真菌的數量還是在種群分布上，都是側根上分布的最多。這可能與附子中含有的藥用成分及含量有關。對以后研究烏頭植物內生真菌的代謝產物及分離提取有活性物質有指導性的作用。

4參考文獻

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[2] 陳小平，崔永三，趙博光.毛茛科殺蟲植物——烏頭[J].中國森林病蟲，2006，25（6）：26-28．

[3] 舒瑩，郭順星，張東明，等.植物內生真菌活性成分的研究[J].中草藥，2005，36（5）：772-776.

[4] 曹小玉，劉川，彭成.90年以來附子研究的文獻定量分析[J].成都中醫藥大學學報，2004，27（3）：58-59．

[5] 陳信義，李峨，侯麗，等.烏頭類生物堿研究進展與應用前景評述[J].中國中醫藥信息雜志，2004，11（10）：922-923．

[6] 鄧廷豐，李培清.云南野生滇南黃草烏人工馴化栽培技術[J].農村實用技術，2001（1）：15-19．

[7] 李治瀅，楊麗源，周斌，等.燈細辛內生真菌的研究Ⅰ：菌種分離及其分類鑒定[J].云南大學學報，2003，25（1）：65-68．

[8] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上海科學技術出版社，1979．

[9] H.L巴尼特，B.B亨特.半知菌屬圖解[M].沈崇堯，譯.北京：科學出版社，1977．