左旋泮托拉唑鈉有關物質測定方法研究

陶亞成，朱思思，韓繼永

(江蘇奧賽康藥業股份有限公司，江蘇南京211112)

泮托拉唑鈉為H+－K+－ATP酶泵抑制劑，直接作用于胃壁內質子泵，用于治療胃及十二指腸潰瘍和反流性食管炎等。左旋泮托拉唑鈉為泮托拉唑鈉的左旋體，具有比泮托拉唑鈉消旋體更強的藥理作用。本文主要根據不同藥典標準中泮托拉唑鈉的有關物質測定方法對左旋泮托拉唑鈉進行研究，并對方法和結果進行比較和分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20AT高效液相色譜儀、LC－Solution色譜工作站(日本島津制作所);BP211D電子天平(塞多利斯公司);雷磁PHS－3C精密pH計(上海精密科學儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙腈，HPLC 級，Tedia Company，Inc.;磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀，分析純，南京化學試劑有限公司;磷酸，分析純，北京益利精細化學品有限公司;超純水，自制。左 旋 泮 托 拉 唑 鈉 (批 號:S20081001、S20081101、S20081102，江蘇奧賽康藥業有限公司)。

2 方法與結果

2.1 泮托拉唑鈉有關物質檢查法及限度比較，結果見表1(見下頁)。

2.2 系統適用性試驗溶液制備 取左旋泮托拉唑鈉、雜質B、雜質C適量，照各標準下方法用適宜溶劑稀釋制成適宜濃度，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表2。

表2 各版藥典有關物質系統適用性試驗比較

結果表明，采用上述條件左旋泮托拉唑鈉與雜質B、C分離度均符合要求，CP2005版的雜質B出峰較遲，但基線穩定;BP2009版和USP32版的條件相同，由于梯度變化較快，基線不穩定，且主峰拖尾，可見有雜質峰分離度不理想。CP2010版的梯度程序變化較BP2009版和USP32版緩和，主峰理論板數較高，各雜質間的分離度良好，基線在45 min內較為穩定。

表1 泮托拉唑鈉有關物質檢查法及限度比較

2.3 樣品測定 取本品適量，照各標準測定有關物質，結果見表3。

表3 左旋泮托拉唑鈉有關物質檢查結果對比(單位:%)

采用以上四版藥典收載的有關物質測定法進行測定，結果基本一致。綜合考慮各條件的優劣，我們分別采用CP2005版條件和CP2010版條件，并適當調整后，進行方法學對比研究。

2.4 已知雜質定位及分離度考察 取左旋泮托拉唑鈉適量，用溶劑制成每1 mL約含0.4 mg的溶液;另取雜質A、B、C、D+F、E適量分別用溶劑溶解并稀釋成每1 mL約含40 μg的溶液，濾過。

量取上述溶液各1 mL置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為混合溶液，精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖1。

結果表明，在上述兩種有關物質測定方法中，左旋泮托拉唑鈉峰與各雜質峰及各雜質峰之間均分離良好。

2.5 溶液穩定性試驗溶液制備 精密稱取左旋泮托拉唑鈉適量，分別按《中國藥典》2005年版和2010年版泮托拉唑鈉有關物質項下方法試驗，分別于0、2、4、6、8 h取樣測定，考察左旋泮托拉唑鈉在溶液中的穩定性。在《中國藥典》2005年版條件下，樣品溶液0 h雜質1個(相對保留時間為0.59)，8 h 雜質5 個(相對保留時間分別為 0.21、0.22、0.30、0.59、0.77)，且各雜質的峰面積逐漸增大。而《中國藥典》2010年版條件下，樣品溶液0～8 h內，雜質僅1個，且峰面積無明顯變化(雜質平均含量0.014%，RSD為9.18%)。

結果表明，在《中國藥典》2005年版條件下，左旋泮托拉唑鈉在流動相中穩定性較差，配制6 h，雜質個數和雜質量明顯增加，溶液配制后應在4 h內使用。在《中國藥典》2010年版條件下，樣品在溶液中8 h內基本穩定。

2.6 破壞性試驗 分別取左旋泮托拉唑鈉適量(約10 mg，CP2005版置50 mL量瓶中;CP2010版置25mL量瓶中)，進行如下試驗:①酸破壞:加 0.1 mol·L－1鹽酸溶液 5 mL，搖勻，置室溫下放置 5 min，用 0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液中和;②堿破壞:加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液5 mL，搖勻，置室溫下放置2.5 h;用1 mol·L－1鹽酸溶液中和;③氧化破壞:加0.9%過氧化氫5 mL，搖勻，置室溫放置5 h;④高溫破壞:加流動相或溶劑使溶解，置80℃水浴上，加熱1 h后，放冷;⑤日光破壞:加流動相或溶劑使溶解，置日光條件下放置4 h，見圖 2。

結果表明，在《中國藥典》2005年版和2010年版兩種有關物質測定條件下，左旋泮托拉唑鈉在酸、高溫、氧化條件下均有不同程度的破壞，在日光條件下不穩定，在堿性條件下基本穩定。各條件下產生的降解產物峰與主峰分離良好，各雜質峰的保留時間均在主峰保留時間的4倍以內。

對各破壞性試驗下的色譜峰進行峰純度分析，結果表明，在本條件下，主峰的色譜峰純度值均大于999.0，提示主峰為單一色譜峰。

圖1 已知雜質定位及分離度考察

圖2 破壞性試驗

2.7 定量限及檢測限 《中國藥典》2005年版:取左旋泮托拉唑鈉適量，用流動相溶解并逐步稀釋測定，進樣體積20 μL，S/N 約為10時，即定量限為1.28 ng，S/N 約為3時，即檢測限為0.38 ng。2010年版:取左旋泮托拉唑鈉適量，用溶劑溶解并逐步稀釋測定，進樣體積20 μL，S/N約為10時，即定量限為4.22 ng，S/N 約為3 時，即檢測限為 1.26 ng。

2.8 重復性試驗 同一批樣品測定6份，計算雜質A含量0.013%，RSD=5.72%;其他雜質未檢出。

2.9 校正因子試驗 按《中國藥典》2010年版取左旋泮托拉唑鈉和雜質A、雜質B(起始原料)、雜質C、雜質D+F、雜質E適量，精密稱定，置同一量瓶中，加溶劑溶解并制成每1 mL中各約含0.4 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。連續測定5次，結果以左旋泮托拉唑鈉為參照，雜質A的校正因子為1.03(RSD 為0.27%，相對保留時間約0.94)，雜質 B 的校正因子為0.96(RSD為0.51%，相對保留時間約1.32)，雜質C的校正因子為0.30(RSD為0.34%，相對保留時間約0.72)，雜質D+F的校正因子為1.10(RSD為0.57%，相對保留時間約1.10)，雜質E的校正因子為1.09(RSD為0.32%，相對保留時間約1.14)。

2.10 加樣回收率試驗 取雜質A、雜質B(起始原料)、雜質C、雜質D+F、雜質E適量，精密稱定，置同一量瓶中，用溶劑溶解并稀釋制成每1 mL約含各雜質0.4 mg的溶液，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，作為對照品貯備液;另取左旋泮托拉唑鈉約10 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，平行9份，分成3組，分別精密加入對照品貯備液 2.0、2.5、3.0 mL，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。再精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。按加校正因子的自身對照法計算各雜質含量，結果表明，雜質A、雜質B(起始原料)、雜質C、雜質D+F、雜質E的回收率結果均在90% ～110%之間，均符合規定。

2.11 耐用性試驗 左旋泮托拉唑鈉在柱溫、流速、色譜柱型號、流動相pH等色譜條件產生微小變化時對有關物質的測定基本無影響，理論板數以左旋泮托拉唑鈉計均在2 500以上，各雜質與左旋泮托拉唑鈉的分離度及各雜質之間的分離度均符合要求，表明本方法的耐用性良好。

3 討論

綜上所述，《中國藥典》2010年版、《英國藥典》2009年版及《美國藥典》32版泮托拉唑鈉的有關物質方法中流動相組成、溶劑、檢測波長及柱溫條件一致，在梯度程序方面略有不同，《中國藥典》2010年版的梯度程序相比較為平緩，試驗結果顯示《中國藥典》2010年版中左旋泮托拉唑鈉峰的理論板數最高。而通過比較《中國藥典》2005年版和2010年版兩種方法，結果顯示2005年版條件與2010年版條件相比，左旋泮托拉唑鈉溶液的穩定性較低，已知雜質岀峰時間較長，且峰形也較差。而有關物質限度要求，《英國藥典》2009版最高，美國藥典32版次之，《中國藥典》2005年版的限度要求最低。采用《中國藥典》2010年版的有關物質條件進行的方法學試驗說明本方法適用于左旋泮托拉唑鈉的有關物質檢測。

為保證臨床用藥安全，故在左旋泮托拉唑鈉的質量控制過程中，有關物質檢測方法采用《中國藥典》2010年版條件下泮托拉唑鈉的有關物質方法進行檢測，而雜質限度參照《英國藥典》2009版進行嚴格控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版(二部)［S］.北京:化學工業出版社，2005:367－368.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:504－505.

［3］British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia［S］.London:The Statimary Office，2009:4536 －4540.

［4］United States Pharmacopoeia Committee.United States Pharmacopoeia［S］.32th edition.Washington DC:The U-nited States Pharmacopeial Convention Inc，2009:3200.