黃曲霉毒素B1對肉雞實驗性肝損傷的影響研究

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(1.浙江大學動物科學學院，浙江杭州 310013；2.杭州唐天科技有限公司)

亞太地區，飼料原料和配合飼料中以黃曲霉毒素、赭曲霉素、橘霉素、T-2毒素、嘔吐毒素(DON)、串珠鐮孢菌毒素和玉米赤霉烯酮等的危害最為嚴重。Sway等(2005)分析了配合飼料樣品中的黃曲霉毒素、煙曲霉毒素、赭曲霉毒素、T-2毒素、DON和玉米赤霉烯酮，超過90%的樣品中都含有以上6種霉菌毒素[1]。

長期飼用含有霉菌及霉菌毒素的飼料可導致畜禽生長受阻，生產性能下降,畜禽處于亞健康或弱體質狀態，給養殖業帶來嚴重危害和經濟損失，尤以黃曲霉毒素B1(AFB1)的毒性最強，長期采食含有此類毒素的飼料可使動物發生肝癌等病變，是目前發現的最強致癌物[2]。本試驗的目的是探究AFB1導致肉雞肝損傷模型，并確定其劑量與作用時間，為生產實踐提供理論支持和今后研究提供依據。

1 材料與方法

1.1試驗材料

試驗動物：1日齡羅斯308肉雞96羽，由浙大正大種禽公司提供。

黃曲霉毒素B1(AFB1)：購自FERMENTEK公司，純度≥98%。批號：AF022a。

二甲基亞砜(DMSO)：購自國藥集團化學試劑有限公司。批號：20100528。

1.2試驗設計 建立肝臟損傷模型，試驗分3組，每組32羽。詳見表1。

表1 試驗設計及分組

試驗在浙江大學動物科學學院抗生素替代物實驗室飼養基地進行，木屑墊料平地飼養，自由采食，充足飲水。

對照及試驗Ⅰ～Ⅱ組肉雞從8日齡開始連續6 d分別嗉囊注射DMSO 0.1 mg/kg體重，AFB10.1 mg/kg體重和AFB10.2 mg/kg體重。

飼養期14 d。育雛期間按常規方法飼養管理。日糧組成及營養成分，詳見表2。

1.3樣品采集 在注射DMSO及AFB1后第3 d和第6 d空腹稱重、抽血，每組剖殺6羽，采集肝臟、十二指腸組織，福爾馬林保存用于HE染色制作切片。

1.4觀察指標 測定短期內注射AFB1對肉雞生長性能的影響及肉眼觀察臨床癥狀與肝臟組織、十二指腸組織病理變化情況。

表2 日糧組成及主要營養成分

2 結果與分析

2.1短期內注射AFB1對肉雞生長性能的影響 詳見圖1。

圖1 短期內連續注射AFB1對肉雞生長性能的影響

由圖1可見，短期內注射AFB1(0.1 mg/kg體重和0.2 mg/kg體重)與對照組(注射DMSO 0.1 mg/kg體重)，對肉雞生長性能無明顯影響。在試驗期內各組肉雞均無死亡。

2.2短期內注射AFB1臨床癥狀和肉眼觀察 試驗組與對照組相比，注射AFB1組肉雞飲水采食情況正常，但精神略顯萎靡，表現略見虛弱。注射第5 d后，試驗雞出現腿軟，很少站立；皮膚發紫，體軀有多處出血部位。且注射AFB10.2 mg/kg體重比AFB10.1 mg/kg體重組，情況更為嚴重。

2.3注射AFB1后對肉雞肝臟組織損傷的病理切片比較 詳見表3、圖2。

表3 注射AFB1后對肉雞肝臟損傷程度的肉眼觀察

由圖2可見，注射AFB1后肉雞肝臟出現明顯的顆粒變性、水泡變性和脂肪變性。

2.4注射AFB1后肉雞十二指腸組織損傷的病理切片比較 詳見圖3。

由圖3可見，注射AFB1后肉雞十二指腸黏膜上皮細胞絨毛有明顯的斷裂和逐漸脫落現象。

3 討論與結論

3.1本試驗采用嗉囊注射AFB1的肉雞，人工誘發肉雞肝臟損傷模型。注射5 d后，試驗雞出現腿軟，很少站立；皮膚發紫，體軀有多處出血部位，這與丁伯良(1991)[3]報道基本一致。

試驗表明，肝臟病理組織學變化為嚴重的顆粒變性，水泡變性和脂肪變性[4]。AFB1在腸道吸收，經門靜脈入肝，由于肝組織具有細胞膜通透性高、內皮細胞不完整等特點，因而可使血液中大部分毒物，包括分子和離子狀態甚至與蛋白結合的毒物進入肝組織，與肝組織結合的速度非常迅速；且肝細胞內還含有特殊的結合蛋白，與毒物的親和力較強。

圖2 注射AFB1后對肉雞肝臟組織損傷的病理切片比較

另外，由于肝細胞的膜孔較一般細胞的大，是毒物在體內進行生物轉化和排泄的主要器官，AFB1在肝組織中通過羥化和去甲基生成的物質也有毒性，所以AFB1侵入肝組織的量大于侵入其他器官的量，受AFB1的毒害也最嚴重。

圖3 注射AFB1后肉雞十二指腸組織損傷的病理切片比較

3.2試驗可見十二指腸黏膜上皮細胞絨毛有斷裂和逐漸脫落現象。隨著注射AFB1時間持續，十二指腸黏膜受到的破壞逐漸加重，表現為線粒體腫脹，部分線粒體充滿球形致密物質，是蛋白性酶的復合物，或嵴內腔某些變性產物的貯集，是細胞不可逆病變的標志[5]。

試驗證明，線粒體是與細胞合成和分泌等功能密切相關的細胞器，其結構的破壞可使細胞的分裂、分泌功能受到破壞，加劇畜禽的發病和死亡。

3.3AFB1系劇毒物質，實際生產中畜禽多為長期攝入導致慢性中毒，尤其是幼齡畜禽比成年畜禽對黃曲霉毒素的易感性更強，造成的危害也更嚴重[6]。癥狀主要表現為：影響動物的生長、繁殖，抑制動物的生長速度，降低飼料轉化效率，降低產仔數，影響禽類的產蛋率和孵化率等[7-8]。

侯然然等(2008)[9]報道，采食含AFB1日糧后肉雞羽毛蓬亂、精神萎靡、食欲不振，體重、平均日增重、平均日采食量顯著下降，料重比升高。據王勇(2010)[10]報道，AFB10.1 mg/kg體重可使肉仔雞平均日增重顯著降低，料重比顯著升高，平均日采食量下降。以上報道與本試驗結果短期內注射AFB1對肉雞飲水采食情況正常，體重無明顯變化的情況基本不符，表明AFB1對肉雞肝臟和十二指腸的受損影響是個漸進過程。其具體受損機理及影響程度有待進一步研究探討。

[1]H.V.L.N.Sway. 亞太地區霉菌毒素：普遍性、負面影響、經濟后果及其控制策略(上)[J].飼料廣角,2005(9):46-48.

[2]馮梅菊.霉玉米對畜禽的危害及防范措施[J].今日畜牧獸醫,2008(3):6-63.

[3]丁伯良.畜禽黃曲霉毒素中毒病理學研究概況[J].國外獸醫學-畜禽疾病,1991(12):6-9.

[4]劉艷麗，汪銘書，程安春,等.人工感染黃曲霉毒素雛鴨的病理學動態變化[J].中國獸醫科學,2006,36(5):396-400.

[5]王春梅，黃曉峰，楊家驥.細胞超微結構與超微結構病理基礎[M].西安：第四軍醫大學出版社，2004:72-77.

[6]Klein P J,Van-Vleet T R,Hall J O,et al.Biochemical factors underlying the age-related sensitivity of turkeys to aflatoxin B1[J].Comparative Biochemistry and Physiology.Part C,2002,132:193-201.

[7]Lindemann M D,Blodgett D J,Komegay E T,et al.Potential ameliorator of alfatoxicosis inweaning/growing swine[J].Journal of Animal Science,1993,71:171-178.

[8]Verma J,Swain B K,Johri T S.Effect of various levels of aflatoxin and combinations thereof on protein and energy utilization in broilers[J].Journal of the Science of Food and Agriculture,2002,82:1412-1417.

[9]侯然然,鄭姍姍,張敏紅,等．葡甘露聚糖對飼喂黃曲霉毒素B1日糧肉仔雞生長性能、血清指標及器官指數的影響[J]．動物營養學報,2008a,20(2):146-151．

[10]王勇.黃曲霉毒素降解酶對飼喂含AFB1日糧肉仔雞生長性能及健康的影響[D].保定:河北農業大學,2010.