分光光度法測(cè)定元胡止痛片中延胡索總生物堿的含量

劉琳琳 李正國(guó) 劉麗芳

1.中國(guó)藥科大學(xué)中藥分析教研室，江蘇南京 211198；2.山東省濟(jì)寧市藥品檢驗(yàn)所，山東濟(jì)寧 272025

分光光度法測(cè)定元胡止痛片中延胡索總生物堿的含量

劉琳琳1，2李正國(guó)2劉麗芳1▲

1.中國(guó)藥科大學(xué)中藥分析教研室，江蘇南京 211198；2.山東省濟(jì)寧市藥品檢驗(yàn)所，山東濟(jì)寧 272025

目的采用分光光度法測(cè)定元胡止痛片中延胡索總生物堿的含量，確定最佳的提取及測(cè)定方法。方法 用溴甲酚綠與生物堿結(jié)合成有機(jī)絡(luò)合物，以定量的有機(jī)溶劑提取，用分光光度法在波長(zhǎng)413 nm處測(cè)定。結(jié)果 平均回收率為100.9%，RSD為0.53%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可作為元胡止痛片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

元胡止痛片；延胡索總生物堿；分光光度法

元胡止痛片由延胡索與白芷兩味藥材組成，主治由氣滯血瘀引起的胃痛、脅痛、頭痛及痛經(jīng)，效果確切。藥理實(shí)驗(yàn)證明，延胡索中所含的生物堿類物質(zhì)為主要的鎮(zhèn)痛成分。處方中所用延胡索多經(jīng)過(guò)醋制，因?yàn)橛坞x的生物堿較難溶于水，經(jīng)醋制后生成醋酸鹽而易溶于水。本研究通過(guò)分光光度法測(cè)定元胡止痛片中總生物堿含量可有效控制元胡止痛片生產(chǎn)投料，確保藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

梅特勒-托利多XS-43；TU-1800SPC紫外可見光分光光度計(jì)，SBC-100超聲波處理器（濟(jì)寧市超聲波儀器廠），所用試劑均為分析純。元胡止痛片（市售品）；延胡索乙素（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110726-200610）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

取本品20片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，用石油醚（60～90℃）脫脂1 h。取藥渣，揮干溶劑后，加1.5%鹽酸溶液50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，取濾液2 mL，置于分液漏斗中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=5.2）20 mL，加溴甲酚綠顯色劑2.0 mL，用氯仿15 mL萃取，待靜置分層后，分取氯仿層作為供試品溶液。

2.2 陰性供試品溶液制備

精密稱取白芷細(xì)粉0.5 g，按供試品溶液制備方法制得陰性供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，加1.5%鹽酸溶液溶解，配制成每1毫升含0.234 mg的溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于分液漏斗中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=5.2）20 mL，加溴甲酚綠顯色劑2.0 mL，用三氯甲烷15 mL萃取，待靜置分層后，分取三氯甲烷層，以三氯甲烷為空白，于413 nm測(cè)定吸光度。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=2.612 9C+0.001 952（r=0.999 7），線性范圍為0～0.234 mg。結(jié)果在線性范圍內(nèi)的對(duì)照品濃度與吸收度呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

對(duì)同一供試品（批號(hào)：070801），按照供試品的提取方法操作，連續(xù)測(cè)定 6次，測(cè)得吸光度值為 0.553、0.553、0.553、0.552、0.552、0.552，RSD為0.10%（n=6），表明該方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品5份，每份約1 g，分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均含量為17.37 mg/片，RSD為0.13%（n=5）。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在室溫下放置不同時(shí)間（h），分別在0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0定吸光度，觀察放置時(shí)間對(duì)吸光度的影響。測(cè)定 結(jié) 果（A）分 別 為 0.241、0.241、0.242、0.243、0.243、0.245，RSD為0.63%（n=6），說(shuō)明萃取液在6 h內(nèi)吸光度基本無(wú)變化。

2.8 準(zhǔn)確度測(cè)定

采用加樣回收法，取已知含量的供試品（批號(hào)：071002），分別加入一定量對(duì)照品，按上述方法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為100.96%，RSD為0.53%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

取不同批次樣品，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中延胡索乙素的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 提取方法的選擇

取供試品及陰性供試品各1 g，分別以石油醚（60～90℃）與乙醚脫脂，棄去石油醚，取藥渣， 結(jié)果表明以石油醚（60～90℃）脫脂可以去除白芷對(duì)試驗(yàn)的干擾。

3.2 不同酸度的影響

采用不同濃度（0.5%、1%、1.5%、2%）的鹽酸溶液提取，對(duì)提取結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果1.5%鹽酸溶液提取效果更好。

3.3 提取時(shí)間考察

取同一批號(hào)供試品（批號(hào)：080304）5份，每份約1 g，精密稱定，分別以石油醚（60～90℃）脫脂1 h，棄去石油醚，取藥渣，揮干溶劑， 分別精密加入1.5%鹽酸溶液50 mL，再分別超聲處理（功率 300 W，頻率 40 kHz）10、30、60、90、120 min，結(jié)果以超聲處理30 min生物堿已經(jīng)能夠提取完全。

3.4 顯色劑的選擇

參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，選用溴甲酚綠顯色劑與甲基橙進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明溴甲酚綠測(cè)得的結(jié)果更穩(wěn)定，采用溴甲酚綠為顯色劑。

3.5 緩沖溶液酸度的考察

分別取 pH 為 5.6、5.4、5.2、5.0、4.8、4.2 的醋酸 - 醋酸鈉緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果證明pH=5.2的緩沖液更利于溴甲酚綠與生物堿結(jié)合成有機(jī)絡(luò)合物。

3.6 測(cè)定波長(zhǎng)的確定

精密吸取對(duì)照品溶液1 mL，陰性供試品溶液和供試品溶液各2 mL，置分液漏斗中，加醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=5.2）20 mL和溴甲酚綠顯色劑2 mL，用氯仿15 mL萃取，待靜置分層后，分取氯仿層，于255～550 nm之間進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明對(duì)照品溶液、供試品溶液在413 nm處吸收最強(qiáng)，而陰性供試品溶液在此處無(wú)吸收，最終選定413 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

采用本方法測(cè)定元胡止痛片中總生物堿含量，操作簡(jiǎn)便，精密度及回收試驗(yàn)結(jié)果良好，陰性供試品對(duì)結(jié)果無(wú)干擾，且不同廠家生產(chǎn)的元胡止痛片中總生物堿含量差異明顯。因此，增加元胡止痛片中總生物堿含量測(cè)定方法可有效控制元胡止痛片的生產(chǎn)投料。

[1]劉喜綱，劉翠哲，常金花.應(yīng)用酸性染料比色法測(cè)定總生物堿的含量[J].中國(guó)藥房，2007，18（11）：875.

[2]曾常青，羅北亮.酸性染料比色法測(cè)定鉤藤的總生物堿含量[J].中藥材，2007，30（8）：1021-1024.

[3]趙駿，齊喜紅.生物堿提取方法研究概述[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（4）：43-44.

Determine the content of total corydalis alkaloid by spectrophotometry in Yuanhuzhitong tablet

LIU Linlin1，2 LI Zhengguo2 LIU Lifang1
1.Department of Pharmaceutical Analysis,China Pharmaceutical University,Nanjing 211198,China;2.Jining Institute for Drug Control,Jining 272025,China

Objective Determine the content of total corydalis alkaloid by spectrophotometry in Yuanhuzhitong tablet，Identify the optimal extraction and determination.Methods Use bromocresol green combined with alkaloids into organic complex，extraction with a certain amount of organic solvent, measured at a wavelength of 413nm by spectrophotometry.Results Average recovery was 100.9%, RSD 0.53%.Conclusion This method is accurate， reliable， reproducible and can be used as quality control standards of Yuan hu zhi tong Tablet.

Yuanhuzhitong tablet; Total Corydalis Alkaloid; Spectrophotometry

R284

A

2095-0616（2012）03-141-02

▲通訊作者

2011-08-09）