血栓心脈寧片對急性血瘀大鼠血漿NO／ET－1的影響

張曉天，王 凱，周曉輝，彭 蕊，王鑫磊，呼 潔，賽景影，王 放，孟祥輝＊

（1．吉林大學白求恩醫學院，吉林 長春130021；2．吉林大學第一醫院；3．長春醫學高等專科學校）

血栓心脈寧片是純中藥制劑，主要由川芎、丹參、水蛭、毛冬青、牛黃、麝香、槐花、人參莖葉皂苷、冰片、蟾酥等組成。具有活血化瘀，擴張血管，抑制血小板、紅細胞聚集，降低血黏度，降低血脂，改善局部和全身的血液循環及防治血栓的功效［1］，臨床主治腦血栓、冠心病、心絞痛等血瘀證者［2］。本實驗通過觀察血栓心脈寧片對大鼠血漿NO／ET－1的影響。

1 材料與方法

1．1 藥品

血栓心脈寧片，由吉林華康藥業股份有限公司提供，國藥準字Z20030145，產品批號：041101；步長腦心通膠囊，陜西步長制藥有限公司，國藥準字Z2025001，產品批號：110764。

1．2 動物

Wistar大鼠60只，雌、雄各半，體重200－220g，由吉林大學基礎醫學院試驗動物中心提供，質量合格證號：SCXK－（吉）2009－0001。

1．3 試劑和儀器

鹽酸腎上腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司出品，批號：110302；大鼠NO ELISA檢測試劑盒，購自R＆D公司；大鼠ET－1ELISA檢測試劑盒，購自R＆D；TDL80－2B飛鴿牌離心機，哈爾濱東聯電子技術開發有限公司；瑞士帝肯TECAN SUNRISE酶標儀，早稻田（北京）生物科技發展有限公司。

1．4 實驗方法

1．4．1 動物分組與給藥 自實驗動物中心引入Wistar大鼠后，適應性飼養1周，室溫22℃－25℃，濕度40%－60%。將大鼠按體重隨機分為6組，每組10只，雌、雄各半，分組為：正常對照組、血瘀模型組、血栓心脈寧片高劑量組1．40g／kg、中劑量組0．70g／kg、低劑量組0．35g／kg，步長腦心通顆粒陽性對照組0．80g／kg。試驗過程中正常對照組正常飼養，血瘀模型組給水10mL／kg，各給藥組均給予10 mL／kg供試藥液。每日上午9時灌胃給藥，連續給藥7天。

1．4．2 血瘀模型的制備 第6天灌胃給藥后30 min，除正常對照組外，其余各組動物均皮下注射0．1%腎上腺素0．8ml／kg，2h后于冰水中浸泡5 min，再過2h后給予同劑量的腎上腺素以復制急性血瘀模型［3］。

1．4．3 血漿 NO、ET－1含量的測定 大鼠復制急性血瘀模型后，禁食不禁水12h，第7天末次給藥30min后，腹腔注射10%水合氯醛3ml／kg麻醉，腹主動脈取血，置于肝素抗凝管中。3000r／min離心30min，吸取上層血漿按照大鼠血漿一氧化氮（NO）ELISA檢測試劑盒及大鼠（Rat）內皮素（ET－1）ELISA檢測試劑盒說明書進行操作，測定大鼠血漿NO及ET－1含量。

1．4．4 統計學處理 應用SPSS16．0統計軟件進行數據處理，實驗數據以均數±標準差（ˉx±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用方差分析。P＜0．05為有統計學意義。

2 結果

由表1可見，復制急性血瘀模型后，大鼠血漿NO含量明顯降低（P＜0．01），ET－1含量明顯增加（P＜0．01），NO／ET－1比例失衡，表明大鼠急性血瘀模型造模成功。與急性血瘀模型組比較，血栓心脈寧片低劑量0．35g／kg組、中劑量0．70g／kg組和高劑量1．40g／kg組可使血瘀模型大鼠血漿NO含量顯著增加（P＜0．05、P＜0．01），而使血漿ET－1含量顯著降低（P＜0．01），表明血栓心脈寧片可升高血瘀模型大鼠血漿NO含量，降低血漿ET－1含量，并使NO／ET－1失衡趨于恢復。

表1 血栓心脈寧片對急性血瘀模型大鼠血漿NO及ET－I的影響（ˉx±s，n＝10）

3 討論

血瘀證是中醫臨床常見的一種證型，其臨床表現主要為疼痛、腫塊、瘀斑、氣虛等癥候。祖國醫學認為，血瘀證是由于血液瘀滯、運行不暢而產生的病理癥候［4］。本實驗給大鼠皮下注射大劑量腎上腺素模擬暴怒時的機體狀態，以冰水浸泡法模擬外寒侵襲，在兩種因素綜合作用下復制大鼠急性血瘀證模型，該模型常用于中醫血瘀證及活血化瘀藥的研究［5－7］。

NO和ET－1是血管內皮細胞分泌的一對調節血管舒縮功能的活性物質。NO是維持血管舒張的重要物質，由NO合成酶（NOS）催化L－精氨酸和氧分子反應生成的，其主要作用是介導血管平滑肌舒張；抑制血管平滑肌的增殖，從而防止動脈硬化及動脈斑塊的形成；抑制血小板的活化和聚集。ET－1是血管內皮細胞分泌的迄今所知作用最強、持續最久的縮血管活性多肽，具有強烈縮血管，誘導血小板聚集和血栓形成作用而造成血管損害。NO／ET－1比例失衡是內皮細胞損傷的重要因素，從而誘導急性血瘀的發生發展［8－10］。

本實驗測得正常對照組與血瘀模型組血漿NO及ET－1含量具有顯著差異，說明實驗動物造模成功。與血瘀模型組比較，血栓心脈寧片低、中、高劑量組均可使急性血瘀模型大鼠血漿NO含量明顯升高，ET－1含量明顯降低，其中以中劑量組效果最為明顯。因中藥的藥物濃度與藥物療效不一定成線性關系，當超過一定量的最佳藥物濃度后，再增加藥物濃度時，藥物療效未必隨之增加。所以，中劑量組為本實驗的最佳劑量組，且與陽性對照組具有相似的效果。說明血栓心脈寧片對急性血瘀有良好的防治作用，其藥物作用機制可能與通過改善NO／ET－1比例失衡從而保護內皮細胞免于損傷有關。

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