福建省煙草灰霉病的發生與病原鑒定

鄧 真，顧 鋼，張紹升

(1.福建農林大學植物保護學院，福建 福州 350002;2.福建省煙草科學研究所，福建 福州 350001)

我國有關煙草灰霉病的報道較少，過去僅在湖南、河南、云南等地的煙草上偶發[1，2]，福建省未發現此病[3]。近年來國內報道在煙草漂浮育苗時發現灰葡萄孢侵染煙苗，引起葉腐和莖腐[4，5]。2009－2011年對福建省的主要煙區進行煙草病害調查，發現煙草灰霉病在各煙區普遍發生，個別地區發病嚴重，對煙草產量及品質造成一定影響。為此，本試驗對煙草灰霉病的發生特點、病害癥狀和病原菌鑒定進行了研究，明確福建灰霉病害的發生規律，以期為灰霉病害的防治提供依據。

1 材料與方法

1.1 病害調查

2009－2011年對福建省的煙草種植區進行了煙草灰霉病發生情況調查和標本采集。

1.2 癥狀觀察

通過肉眼觀察病害田間癥狀和不同階段的癥狀特點，對病害癥狀和鑒別特征進行系統描述。挑取病組織上的病原物和病組織切片制成臨時玻片，在顯微鏡下進行病原觀察鑒定，對病害進行確診。

1.3 病原菌分離和種類鑒定

采用組織分離法于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基(potato sucrose agar，PSA)平板上進行病原菌分離培養，于PSA斜面純化保存。

病原鑒定主要依據病原菌的培養性狀和形態特征。觀察培養性狀時，將純化的菌株接種到PSA平板上連續培養15 d，定期觀察病原菌的菌落特點、產孢時期及菌核的產生情況。病原菌形態特征利用光學顯微鏡進行觀察鑒定。

1.4 病原菌致病性測定

以5－6片真葉的煙草為材料，利用孢子懸浮液傷口接種和菌餅貼葉接種。孢子懸浮液傷口接種:供試菌株在PSA上培養10 d后，用無菌水沖洗培養基表面的孢子，稀釋成孢子懸浮液(1×106個·mL－1)，用涂布法將孢子懸浮液均勻涂抹在不同葉位的葉片及煙莖表面，以涂抹滅菌水為對照，每個處理3個重復，定期噴水保濕，置于(25±1)℃的恒溫箱中培養，觀察;菌餅貼葉接種:將在PSA上培養4 d的菌落，用打孔器制成直徑為5 mm的菌餅，貼于葉片上，每個葉片4個點，以只接PSA培養基為對照，每個處理3個重復，定期噴水保濕，置于(25±1)℃的恒溫箱中培養，觀察。

接種發病后，重新分離病原物進行鑒定，通過柯赫氏法則確定病原菌的致病性。

2 結果與分析

2.1 病害發生特點

每年4－6月是煙草團棵期至現蕾期，也是灰霉病的發生期。降雨和高濕環境是煙草灰霉病發生的重要條件。受日灼、凍害或機械傷和蟲傷的葉片組織，能誘導并加速病害的發生。煙草灰霉病的發生特點有:(1)成株期的葉片發病率極高，尤其是代謝較弱的老葉，植株下部葉，特別是靠近地面的葉片易發病，而莖部發病少;(2)病斑主要集中在葉片的中前部，葉緣或靠近葉緣的部分。

2.2 病害癥狀

煙草灰霉病主要發生在葉片，也可發生在莖或葉柄。病害多數從植株基部葉片發生(圖1A－1C)，病原菌從葉片上部組織、葉緣或葉尖侵染(圖1D－1F)。葉片內侵染時病斑呈圓形或近圓形，初期病斑呈灰褐色或淡褐色，潮濕條件下病斑迅速擴大，形成輪紋，表面產生灰色霉層(圖1G、1H)。后期病斑破裂或形成穿孔，穿孔為圓形或不規則形(圖1I、1J)。干燥條件下病斑擴展受抑制，褐色，表面霉層少或無霉層(圖1K)。病菌在葉尖侵染時，病斑向內擴展形成V形病斑。從葉緣發病時病斑向內擴展形成半圓形。

2.3 病原鑒定

(1)培養性狀。在PSA上菌落呈放射狀，中等氣生菌絲(圖2A)，4－5 d后菌落四周產生大量分生孢子梗，呈深灰褐色。后期置于室內，7－10 d后產生少量大型菌核，菌核表生，15－27粒·皿－1，黑色，平凸，內卷，表面光滑(圖2B、2C)。聚生菌核表面具疣狀凸起，覆蓋一層白色的菌絲層，3.5－6.5×2.0－5.0 mm;單生菌核呈圓形、橢圓形或不規則形，1.0 －4.0 ×1.0 －2.3 mm。

(2)形態特征。分生孢子梗單生或叢生，直立，1－2次分枝(圖2D)，分枝處有縊縮，長1020－2200 μm、直徑11.32 －16.45 μm，有分隔，基部分隔較短，略膨大(圖2E、2F)。產孢細胞膨大，圓形，可以生成新的產孢細胞繼續產孢(圖2G)。分生孢子呈橢圓形或卵圓形(圖2H)，11.49 －17.57 ×6.37 －8.91 μm，L/B值為 1.60 －2.06。

根據培養性狀和形態特征，參考文獻[6]、[7]，將病原菌鑒定為灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

2.4 致病性測定

將菌餅和孢子懸浮液接種到煙苗上，由病組織上分離獲得相同的病原菌。發病初期，葉部產生水浸狀病斑，保濕培養后，病斑擴展快速，變成不規則形(圖3A－3C)。隨著葉片病斑的擴大，病原菌沿著葉脈侵染莖部，導致整株煙苗枯萎(圖3D)，被侵染的莖部縱切，髓部已完全干枯變黃，甚至中空。條件適宜時，病斑會產生灰色或灰白色的霉層。

圖1 煙草灰霉病的田間癥狀Fig.1 The symptoms of tabacoo gray mold in the field

圖2 灰葡萄孢的形態特征和培養性狀Fig.2 Mophological and cultivation characters of B.cinerea

圖3 灰葡萄孢的致病性Fig.3 The pathogenicity of B.cinerea

3 小結

本研究對福建省煙草灰霉病的病害發生特點和病害癥狀進行觀察描述。通過病原培養性狀及形態學鑒定和致病性測定，將煙草灰霉病的病原鑒定為灰葡萄孢。本課題組從2009－2011年在福建煙草種植區調查發現，煙草灰霉病普遍發生，侵染煙葉葉片造成煙葉組織壞死、腐爛，對煙葉產量和品質構成一定影響。在福建省煙草灰霉病是一種常發性病害，局部地區和特定氣候條件下危害嚴重，應當引起足夠的重視。

[1]陳瑞泰，朱賢朝，王智發，等.全國16個主產煙省(區)煙草侵染性病害調研報告[J].中國煙草科學，1997，1(4):1－7.

[2]張世光，陳興全.云南省煙草真菌、細菌、線蟲病害調查研究[J].云南農業大學學報:自然科學版，1999，14(4):354－356.

[3]林滋鑾，盧洪興，陳炳全，等.福建省煙草侵染性病害種類分布與為害[J].福建農業科技，1995(5):14－15.

[4]宮飛燕，楊程，蔣自立，等.煙草灰霉病在煙草漂浮育苗中的表現及8種殺菌劑對病菌的室內毒力測定[J].中國煙草學報，2008，14(3):32 －35.

[5]陳志敏，過賦文，張曉陽，等.煙草莖腐病的病原鑒定及生物學特性[J].煙草科技，2011(4):78－84.

[6]張中義.中國真菌志(第26卷)葡萄孢屬柱隔孢屬[M].北京:科學出版社，2006.

[7]朱賢朝，王彥亭，王智發.中國煙草病害[M].北京:中國農業出版社，2001.