3種豬肺炎支原體疫苗對仔豬的免疫試驗

王娟萍，姚敬明，吳 忻，劉文俊，孟 帆，樊振華，雷宇平，米瑞娟

（1．山西省農業科學院畜牧獸醫研究所，山西 太原030032；2．山西省動物疫病預防控制中心，山西 太原030024）

豬肺炎支原體（Mhp）是引起豬的一種慢性接觸性呼吸道病，這種病世界廣泛流行，豬群感染率在30%～80%［1］，由于降低了生長率和飼料利用率引起養豬業的巨大經濟損失。一旦豬群中有幾頭豬被感染，就會在同圏豬之間傳播，特別是在斷奶時將豬混群以后更是這樣。此外，大量研究表明，豬肺炎支原體與其他病原體具有協同感染作用，尤其是與豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環病毒 Ⅱ 型 （PCV2）、豬流感病毒（SIV）等病毒性疫病混合感染后可以使病毒性肺炎的嚴重性和持久性明顯增加［2］。近年來豬肺炎支原體疫苗已在生產中廣泛應用，市場上有國產、進口，肌肉注射、肺內接種、一次、二次免疫等［3－4］，為了查清這些疫苗的免疫效果，我們選擇不同類型的疫苗和不同的接種方法進行了免疫試驗，總結如下。

1 試驗材料與方法

1．1 主要試劑 豬肺炎支原體ELISA抗體檢測試劑盒，購自美國IDEXX公司；豬支原體肺炎滅活苗瑞倍適－旺，購自美國輝瑞（動物保健品）有限公司；豬支原體肺炎滅活苗喜可舒，購自西班牙海博萊生物大藥廠；豬支原體肺炎活苗（168株），購自南京天邦生物科技有限公司。

1．2 試驗動物及分組 從12窩新生杜長大仔豬中，選擇體重相近的健康仔豬72頭，隨機分成A、B、C、D四組，每組3窩，18頭仔豬。A組為瑞倍適－旺疫苗注射組，B組為喜可舒疫苗注射組，C組為豬支原體肺炎活苗（168株）注射組，D組為對照組。按照常規三點飼養進行管理，仔豬于28日齡斷奶，63日齡轉入育肥舍。4組豬置于同一棟豬舍，所有試驗用動物采取相同的飼養和管理方法。

1．3 疫苗的劑量及免疫方法 A組14日齡免疫瑞倍適－旺，免疫劑量2mL／頭，頸部肌肉注射；B組分別于14日齡和28日齡免疫喜可舒，頸部肌肉注射，劑量2mL／頭；C組7日齡于6～7肋骨間肺內接種1頭份豬支原體肺炎活疫苗（168株）；D組分別于14日齡和28日齡每頭頸部肌肉注射生理鹽水2mL。

1．4 采血及抗體檢測 每組隨機抽取15頭試驗豬，分別于14、21、35、49、63日齡和84日齡前腔靜脈采血并分離血清，－20℃冷凍保存備用。

按照ELISA抗體檢測試劑盒的說明書（北京愛德士元亨生物科技有限公司提供）進行，在630nm測量并記錄樣品和對照的吸光值。檢測結果的判定標準為：S／P＞0．4為陽性，S／P＜0．3 為陰性，0．3≤S／P≤0．4為可疑。

1．5 試驗結果統計與分析 應用SPSS17．0統計分析軟件統計各組的試驗數據，通過Duncan′s新復極差法（DMRT法）比較組間的差異。

2 試驗結果

2．1 各組OD值的變化規律及差異顯著性分析通過定時采血檢測各組豬肺炎支原體抗體效價，經統計分析，其結果見表1。

表1 各組豬肺炎支原體抗體水平

由表1可見，14日齡時各組抗體水平差異不顯著（P＞0．05）；在21日齡時A組產生的抗體水平顯著高于C、D兩組（P＜0．05）；35日齡時，A、B兩組抗體水平極顯著高于C、D兩組（P＜0．01），A組顯著高于B、C和D 3組（P＜0．05），B組顯著高于C、D兩組（P＜0．05）；49日齡時，A、B兩組抗體水平極顯著高于C、D兩組（P＜0．01）；63日齡時，B組抗體水平極顯著高于A、C、D三組（P＜0．01），A組抗體水平極顯著高于C、D兩組（P＜0．01）；84日齡時，A、B兩組抗體水平極顯著高于C、D兩組（P＜0．01）。

2．2 豬肺炎支原體抗體陽性率變化規律 在檢測各種疫苗免疫效價的同時，對各組豬群肺炎支原體抗體陽性率變化規律進行了統計，見表2。

表2 各組肺炎支原體抗體陽性率的變化

從表2可見，在免疫前即14日齡時，各組陽性率均為0；在21日齡時，A、B兩組的陽性率有一定的升高；35日齡時A、B兩組陽性率明顯上升，而C、D兩組陽性率為0；在49、63、84日齡時，A、B兩組陽性率維持在一個較高的水平，C組陽性率為0，而D組陽性率在84日齡時有1頭感染。

3 小結與分析

3．1 試驗證明不同疫苗免疫接種試驗豬后抗體產生不同。14日齡時，各組抗體水平差異不顯著。在21日齡時A組產生的抗體水平顯著高于C、D兩組；35日齡時，A組顯著高于B組，B組顯著高于C、D兩組；49日齡時，A、B兩組抗體水平極顯著高于C、D兩組；63日齡時，B組抗體水平極顯著高于C、D兩組，84日齡時，A、B兩組抗體水平極顯著高于C、D兩組。由此從免疫效價分析，進行二次免疫喜可舒疫苗效果最好，一次免疫瑞倍適－旺疫苗效果次之，肺內接種豬支原體肺炎活疫苗（168株）組檢測不到抗體，這和廠家介紹的該疫苗只起占位效應不產生體液免疫抗體，但對豬群呼吸道綜合征臨床癥狀有明顯的改善，發育增重，提高生產效力相符。

3．2 對照組在第12周有1頭檢測呈陽性，這可能試驗環境控制不良，外界感染有關。通過對試驗豬群肺炎支原體抗體陽性率變化規律的統計，A、B兩組的陽性率隨著仔豬日齡的增長，抗體陽性率逐漸升高，但只檢測到84日齡，以后如何變化需要進一步檢測證明。

3．3 控制和凈化豬支原體肺炎是世界養豬業面臨的難題，疫苗免疫接種是控制該病的有效措施，試驗證明，通過接種疫苗預防該病的發生有良好的效果，從臨床癥狀看豬呼吸道癥狀明顯減少，體重，均勻度發育良好，比用藥物預防和控制，省力，成本低，效果好，本項試驗沒有進行生產性能比較，也未做對試驗豬的肺部病變進行觀察比較，今后在推廣免疫試驗時，要定時測定豬的體重、耗料等生產性能。

［1］ 于敏，王文軍，李景鵬，等．豬肺炎支原體的研究近況［J］．畜牧獸醫科技信息，2003（8）：14－16．

［2］ Barbara E S，Jeffery J Z，Doid J T，etal．豬病學［M］．9版．趙德明，張仲秋，沈建忠，主譯．北京：中國農業大學出版社，2008：795－816．

［3］ 梅學華．三種豬肺炎支原體滅活疫苗免疫仔豬后抗體效價的比較研究［D］．雅安：四川農業大學碩士論文，2004．

［4］ 劉茂軍，苗連葉，趙永前，等．豬支原體肺炎活疫苗（168株）臨床試驗［J］．畜牧與獸醫，2009，41（8）：93－95．